實時熒光定量 PCR 的數據分析
在指數增長期，PCR 產物量以指數形式增加，根據這一
原 則，假設擴增效率為 E，模 板 起 始 量 為 N0，m 個 循 環 后
PCR 產物量為 Nm，則有 Nm=N0（1+E）m（1），對 該 等 式 兩邊 取
對數，則有 LgN0=-m·lg（1+E）+Lg Nm（2），若循環數達到某一
CT 值時，熒光閾值為 Q，式（1）可寫成：Q=N0（1+E）CT，式（2）
可 寫 成 ：LgN0=-CT·lg （1 +E） +LgQ。 當 需 要 對 靶 基 因 在
mRNA 水平上進行表達量分析時，通 常 采 用 式（1）進 行 數
據分析。當需要對靶基因拷貝數進行Absolute Quantification時，則需要用
式（2）進行數據分析。 上海融享生物科技有限公司專業公司。江西相對定量qPCR公司
雙雜交探針也是 TaqM an 探針的衍 生形式,是由 Roche 公司開發的一種 PCR 定量技術 (LightCy cler(r)實時熒光定量 PCR 系統)。該技術 的特點是將熒光基團和淬滅基團分別標記在發光探 針的 5' 端和淬滅探針的 3' 端兩個不同探針上 ,兩探 針可與模板同一條鏈相鄰的序列雜交, 雜交時兩探 針的熒光基團和淬滅基團便緊密相鄰(1 ～ 5 bp), 從 而發生 FRET 使熒光淬滅, 熒光淬滅的程度與起始 模板的量成反比, 以此可以進行 PCR 定量分析 (Hardegg er 等 , 2000)。該方法的特點是淬滅效率 高,但由于 2 個探針結合在模板上 ,從而影響到擴增 效率;另外 ,由于需要合成 2 個較長的探針, 合成成 本相對較高。江西相對定量qPCR公司上海融享生物科技有限公司專業致力于qPCR。
雖然在熒光定量 PCR 檢測時的過程比較 簡單，但是在前期樣本制備階段卻存在著很多影響因素，因此從 siRNA 序列的設計、質粒的共轉染、細胞總 RNA 的提取、質粒 DNA 的去除、cDNA 的獲得、試劑的 選擇及后續的操作步驟都應優化穩定到比較好方案，方 能保證其結果的準確性。實時熒光定量 PCR 技術在 mRNA 表達研究、基因組和病毒核酸的定量測定和等位基因的差異分析等領域的應用越來越***。通過本設計性實驗可以加深學 生對實時熒光定量 PCR 技術及其應用的理解，為今后 的科研工作打下基礎。
Absolute Quantification標準曲線的各
項指標：斜率、擴增效率（E）、相關系數（R2
）、間距均需進行
嚴格評價，從而確保該曲線的可用性。各點間距應相等，間
距以及斜率的Absolute 值應滿足 3.100~3.582，相關系數 R2＞0.99，
擴增效率（E）在 90%~110%之間。擴增效率、斜率以及間距
三者相互關聯，擴增效率（E）=10（-1/斜 率 ）
-1，斜率的Absolute值恰
是各點之間的平均間距。當擴增效率＜90%時，間距以及 斜
率的Absolute 值會＞3.582；當擴增效率＞110%時，間距以及斜率
的Absolute 值會＜3.10，故擴增效率越低，斜率的Absolute 值越大，間
距越寬；擴增效率越高，斜率的Absolute 值越小，間距越窄。擴增
效率過低，酶的活性可能出現了問題，或反應體系不適合反
應的有效進行。若擴增效率過高，反應管內可能存在目的基
因擴增之外的其他非特異擴增，需要對引物進行一個溶解
曲線的檢測，優化反應體系以及反應程序。 您了解qPCR的優勢嗎？
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的局限，實現了每一輪循環均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：Ct值的重現性PCR循環在到達Ct值所在的循環數時，剛剛進入真正的指數擴增期（對數期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現性極好，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的。上海融享生物科技有限公司主營項目包括qPCR。江西相對定量qPCR公司
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研究 DNA 與能夠與之綁定、相互作用的化
合物（生物分子，如核酸、肽核酸、磷脂、蛋白
質以及糖鏈等）之間的關聯性問題，對研發新的
生物制藥的中心作用靶點具有重要價值。Boger
等采取使用 RT-QPCR 技術探索多種生命分子與
核苷酸分子之間的相互影響的歸路來探尋***
**性疾病的新方向，并且認為這是該技術的不
斷發展帶動著**相關性疾病的藥物***的研
究進展，為之提供了研究工具和技術思路。
Lohman & Overman 等在報道了單鏈 DNA
結合蛋白（single-stranded DNA-binding proteins，
SSBs）后，人們逐漸認識到這種分子是多數生命
體細胞生存時不可缺少的蛋白質，它們成特定比
例地綁定到 DNA 單鏈結構中，保護 DNA 免受
部分損傷的同時，能否在遺傳時避免二級結構的
形成，從而能夠確保完成正常的基因復制、轉錄
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