3． 雙光子顯微鏡的激光器有何特別之處？
雙光子吸收幾率依賴于兩個入射光子在空間和時間上的重合程度（兩個光子必須在 10－18 秒內到達） 。 雙
光子吸收截面很小， 只有在具有很大光子流量的區域的熒光團才會被激發。 因此所用激光器多為鈦寶石激
光器， 可以達到皮秒或者飛秒級的掃描速度， 且具有非常高的峰值功率和較低的平均功率， 從而可以減小
或者消除光漂白和光毒作用。 最主要的是在一個很小的范圍提供非常高密度的光子， 可以保證雙光子的同
時激發。 激光掃描共聚焦顯微鏡哪個牌子的好？云南掃描探針顯微鏡
1、動態連續掃描及三維圖像重組
LSCM可以對對活細胞或細胞切片樣品的不同層面進行連續
逐層掃描, 來獲得各個層面的圖像 即所謂的“無損傷的光學切片”。
LSCM掃描的每個層面之間的間距可以達到0.1um甚至更小。獲得的圖像
通過計算機重組 可獲得精細的細胞骨架、染色體、細胞器和細胞膜系
統的三維圖像 與普通光學顯微鏡獲得的圖像相比 LSCM所得的重組
三維圖像清晰度高、立體感強, 可通過計算機軟件對細胞內所研究的結
構進行各種測量 對細胞內的空間結構和某些物質在細胞內的定位方面
的研究中有應用。
2、同時多種物質標記
利用LSCM 通過對膜上、胞漿內多種物質的熒光標記 可以實現
在同一樣品上同時進行多重物質的觀察 比如檢測細胞內鈉、鈣、鎂等
離子濃度的比率及動態變化。 青海激光掃描共聚焦顯微鏡推薦貨源激光掃描共聚焦顯微鏡的種類有哪些？
3.偏置電壓的控制
在 SPM 內， 電壓過高電場強度增大， 可以增強原子遷移， 然后場強過大時， 針尖與樣
品之間會產生復雜的化學反應， 影響觀察效果同時導致原子操縱過程變得復雜。
4.從圖像中去處儀器震蕩影響
探針前列的軌跡最終實際是樣品表面起伏輪廓與超出電子學反饋系統的附加擾動的疊
加。 程序本身從數據開始逆過程反映出樣品表面的情況這一過程是很難綜合考慮擾動情況
的。 因此從擾動本身出發盡量消除震動情況是很需要的。
5.接觸面的接觸距離
好的接觸距離可以提高顯微鏡的分辨率， 然而當接觸距離達到某個值時， 接觸面處的原
子會有突變， 對于測量結果有很大的影響。
細胞膜流動性測定細胞膜熒光探針受到極化光線激發后,其發射光極性依賴于熒光分子的旋轉,而這種有序的運動自由度依賴于熒光分子周圍的膜流動性,因此極性測量可間接反應膜的流動性。這種膜流動性測定在膜的磷脂酸組成分析、作用位點、溫度反應測定和物種比較等方面有重要作用。細胞的物理化學動態監測CLSM可對細胞形狀、周長、面積、平均熒光強度及細胞內顆粒數等參數進行自動測定,能對細胞的溶酶體、線粒體、內質網、細胞骨架、結構性蛋白質、DNA、RNA、酶和受體分子等細胞內特異結構的含量、組分及分布進行定量、定性、定時及定位測定。光活化技術生物體內許多重要的活性物質和化合物均可形成籠鎖化合物,在處于籠鎖狀態時,其功能被封閉,而一旦被某特異波長的瞬間光照射后,光活化解籠鎖,使其恢復原有活性和功能,在細胞的繁殖、分化等生物代謝過程中發揮功能。CLSM具有光活化測定功能,可控制籠鎖探針分解的瞬間光波長和照射時間,從而人為控制多種生物活性產物及其他化合物發揮作用的時間和空間。細胞通訊多細胞生物體中,細胞間相互影響和控制的生物學過程稱為細胞間通訊。 雙光子顯微鏡有沒有必要買？
激光共聚焦顯微鏡在進行生物樣品研究工作中還存在很多局限和問
題：
一是標記染料的光漂白現象。 因為共焦孔徑光闌必須足夠小以獲得高
分辨率的圖像， 而孔徑小又會擋掉很大部分從樣品發出的熒光， 包括從焦
平面發出的熒光， 相應的， 激發光必須足夠強以獲得足夠的信噪比； 而高
強度的激光會使熒光染料在連續掃描過程中迅速褪色， 熒光信號會隨著掃
描進程度進行變得越來越弱。
光毒作用是另外一個問題， 在激光照射下， 許多熒光染料分子會產生
諸如單態氧或自由基等細胞， 所以實驗中要限制掃描時間和激發光的
光功率密度以保持樣品的活性。 在針對活性樣品的研究中， 尤其是活性樣
品生長、 發育過程的各個階段， 光漂白和光毒現象使這些研究受到很大的
限制。 使用雙光子顯微鏡時要注意些什么呢？貴州新型顯微鏡公司
激光掃描共聚焦顯微鏡的日常怎么維護？云南掃描探針顯微鏡
細胞分選CLSM進行細胞分選有兩種方式:①激光消除法,在特制的培養皿上有兩類細胞,一類是未作熒光染色的細胞群,另一類是作熒光染色的細胞群,基于細胞形態及熒光特性,利用高能激光把染色的細胞群殺死,而將未染色的完整細胞亞群保留并繼續培養,該方式適用于數量較多細胞的分選;②Coolie-Cut-terTT法,利用高能激光于底部帶膜的特制培養皿上在預選細胞四周割成八角形,而非選細胞則在該形狀之外被除去,此方式適用于數量較少的突變細胞、轉移細胞和雜交瘤細胞,即使百萬分之一幾率也非常理想。激光顯微細胞外科技術CLSM可將激光作為“光子刀”使用,完成諸如細胞膜瞬間穿孔,線粒體、溶酶體等細胞器燒灼,染色體精確切割和神經元突起切除等一系列細胞外科手術。光陷阱技術此技術是利用激光的力學效應將一個微米級大小的細胞器或其他結構鉗于激光束的焦平面,也可稱為光鑷,利用光鑷移動細胞的微小顆粒和結構,進行細胞融合、機械刺激及細胞骨架彈性測量等,該技術用于染色體、細胞器及細胞骨架的移動。特別是在測量植物細胞的細胞骨架時很有意義,因為植物有一層厚硬的細胞壁。 云南掃描探針顯微鏡
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