四、INPP4B促進pi3kα依賴的晚期核內體形成
五、阻斷atm依賴的磷酸化會損害DNA損傷后PTEN的亞細胞再分配
對MCF-7細胞內溶酶體室的檢查顯示，GFP-INPP4B不影響eea1陽性的早期內溶體，但***增加了cd63陽性的晚期內溶體(2.5倍)和lamp1陽性的溶酶體(1.7倍)(圖4a,b)。
提示INPP4B促進晚期內吞體/溶酶體的形成。使用bsa-gold標記MCF-7細胞內溶酶體室，在電鏡下進行超微結構分析。GFP-INPP4B增加了類似晚期核內體的bsa陽性空泡結構的數量(圖4c)。利用染料淬滅的BSA(BSA-dq)檢測了運往溶酶體的貨物運輸，BSA-dq通過液相內吞進入內吞體，溶酶體水解酶隨后促進去淬和***熒光信號。GFP-INPP4B***增加了bsa-dq陽性結構的數量(2倍)(圖4d,e)，表明INPP4B增強了內吞貨物通過晚期內吞體到溶酶體的運輸。相比之下，使用泛I類PI3K抑制劑BKM120、PI3Kα特異性抑制劑BYL719(補充圖5f)或使用兩種不同的siRNAs耗盡PIK3CA抑制GFP-INPP4B細胞中晚期核內體形成的增加(圖4f,g和補充圖5i,j)。 這些數據表明大黃酸***可以消除尿酸引起的腸道通透性增強。成都缺氧信號通路科研
既往研究表明，FBXW7/HIF-1α/ VEGF-A通路參與**血管生成。因此，我們假設miR-144的促血管生成功能是通過在*變過程中調節FBXW7/HIF-1α/VEGF-A通路實現的。在本研究中，我們首先在mRNA水平和蛋白水平檢測暴露于鼻咽*EVs的HUVECs中FBXW7和HIF-1α。而HUVECs上清中用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)測定VEGF-A濃度(圖5I和5J)。結果顯示，暴露于miR-144模擬物的EVs中FBXW7的表達減少，而HUVECs上清液中HIF-1α和VEGFA的表達增加。miR-144抑制劑的引入導致EVs中FBXW7表達增加，HIF -1α表達減少，HUVECs上清VEGF-A濃度降低。此外， FBXW7過表達或HIF-1α沉默導致HUVECs上清中HIF-1α表達和VEGF-A濃度降低(圖5K和5L)。因此，miR-144可以靶向FBXW7，促進HIF-1α和VEGF-A的表達。上海WNT信號通路科研英拜的員工福利待遇很好。
在皂苷處理的MCF-7細胞中，觀察到內源性INPP4B與HARab7WT或HA-Rab7Q67L共同定位于cd63陽性的晚期核內體(圖3e)。HA-Rab7T22N是一個不定位于晚期核內體的顯性陰性突變體(補充圖3f)，它的表達也阻止了內源性INPP4B的募集(圖3e)，表明活性的gtp結合的Rab7是INPP4B亞細胞定位到晚期核內體所必需的。 GFP-INPP4B***提高了細胞內PI(3)P水平(1.8倍)(圖3f)，PI(3,4)P2也存在于早期和晚期核內體。表達INPP4B shrna的MCF-7細胞顯示出更明顯的細胞內PI(3,4)P2斑點，表明INPP4B缺失抑制PI(3,4)P2在核內體上的降解，導致其積累(圖3g)。GFP-INPP4B沒有改變PI(3) p陽性早期核內體的比例，但***增加了PI(3) p陽性晚期核內體的比例(1.7倍)(圖3h, i)。
1.下載GEO數據并進行預處理
下載數據集GSE28829，GSE41571和GSE43292，使用Perl腳本和R軟件的sva軟件包進行原始數據的合并和預處理。然后，使用Perl腳本將每個基因的探針ID轉換為基因名。
2.CIBERSORT分析免疫浸潤
CIBERSORT的LM22基因文件用于定義22個免疫細胞亞群，這些數據可從CIBERSORT網站進行下載。使用CIBERSORT對表達文件的P值和均方根誤差進行計數，獲得免疫細胞收據，使用R包，corplot，vioplot和ggplot2進行結果的可視化。
上海英拜生物提供可視化實驗過程參觀。
IL-3/IL-4能誘導M2巨噬細胞極化，預先用50ng/mLIL-3/IL-4處理THP-1細胞3天，驗證anti-miR-934對M2巨噬細胞極化的影響。結果顯示PTEN過表達部分減弱了miR-934和HCT-8細胞來源外泌體對M2標記物(CD206,arginase-1和IL10)表達的增強作用，而PTEN的沉默則相應地逆轉了anti-miR-934對M2標記物表達的衰減效應（Fig.5g,i）。流式細胞術檢測M2巨噬細胞標志物CD163在PMA處理的THP-1細胞中的表達，結果與上述結果一致（Fig.5j）。總之，研究結果表明，miR-934增強了CRC細胞來源的外泌體對M2巨噬細胞極化誘導的增強作用，而anti-miR-934減弱了其增強作用。
代謝變化被認為是腸病**重要的特征之一。深圳小鼠腸道科研
文章使用FMT(糞微生態移植)來確定大黃酸改變的腸道菌群是否對結腸炎有療效。成都缺氧信號通路科研
同時，circNDUFB2顯著增加了p-P65，p-IRF3，p-STAT1和p-STAT2。circNDUFB2還促進了IRF3和P65進入核內的易位。免疫熒光分析證實circNDUFB2促進了IRF3的磷酸化，并隨后觸發其轉移到細胞核中。更重要的是，RIG-1的敲除顯著消除了這些基因的蛋白質水平或磷酸化水平的上調以及由circNDUFB2誘導的A549細胞中IRF3和P65的核易位。ELISAs測量細胞培養上清液中的細胞因子水平，發現RIG-1敲低顯著消除了對CXCL10，CXCL11，CCL5和IFNβ的誘導。上述結果表明RIG-1在介導NSCLC細胞中circNDUFB2的免疫應答中起關鍵作用，而circNDUFB2引發的免疫應答不依賴于circNDUFB2中m6A的修飾。成都缺氧信號通路科研
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7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，FISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學實驗