1、白樺素作為SREBP加工特異性抑制劑的鑒定
構(gòu)建了一個由含SRE啟動子驅(qū)動的熒光素酶報告基因，并從人肝*細(xì)胞系Huh-7中生成了穩(wěn)定表達(dá)該報告基因的細(xì)胞系(命名為Huh-7/SRE-Luc)。然后將該細(xì)胞與不同化合物孵育，并進(jìn)行熒光素酶活性測定。有趣的是，只有白樺素[lup-20(29)-ene-3b,28-diol]有效降低了熒光素酶的活性。白樺素是一種天然存在的五環(huán)三萜，可以很容易地從樺樹皮中提取出來(比較高可達(dá)干重的30%)。
作者直接檢測了白樺素對SREBP加工的影響和特異性，并與25-HC進(jìn)行比較。25-HC有三個主要作用：通過抑制SREBP-2的切割降低n-SREBP-2(圖1A)；***LXR，進(jìn)而上調(diào)SREBP-1的轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致n-SREBP-1的增加(圖1A)；促進(jìn)HMG-CoA還原酶(HMGCR)的降解，HMGCR是膽固醇生物合成中的限速酶(圖1B)。另一方面，白樺素有效降低了內(nèi)源性的n-SREBP-1和n-SREBP-2(圖1A)，表明白樺素在不***LXR的情況下抑制了SREBP的加工。 Caspase-11介導(dǎo)的肝細(xì)胞焦亡促進(jìn)非酒精性脂肪性肝炎的進(jìn)展。出生缺陷拷貝數(shù)科研整體服務(wù)
1）SsD在AML中表現(xiàn)出抗增殖活性
為了闡明SsD在白血病中的藥理作用，我們在10個人白血病細(xì)胞系中探討了一系列SsD濃度的影響。我們發(fā)現(xiàn)SsD在大多數(shù)白血病細(xì)胞系中以劑量依賴的方式抑制細(xì)胞活力(圖1A)。為了進(jìn)一步研究SsD對白血病的抑制作用，我們在4種白血病細(xì)胞系NB4、kas1、MV4-11和U937(SsD敏感性排名前4位的細(xì)胞)進(jìn)行了集落實驗。與細(xì)胞活力結(jié)果相似，SsD***抑制了所測細(xì)胞系的集落數(shù)量和大小(圖1B-E)。有趣的是，SsD對細(xì)胞增殖和活力的抑制可能是由于細(xì)胞周期阻滯在G1期和NB4細(xì)胞凋亡增加(圖1F-G)。 遼寧氧化氮信號通路科研尿酸升高直接引起腸道屏障損傷。
然后使用單細(xì)胞RNA-seq來描述移植后30天脾臟中存留的T細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄譜（Fig.4G）。使用pseudobulkRNA-seq分析和預(yù)轉(zhuǎn)移體外培養(yǎng)的基因比較，生成了持續(xù)細(xì)胞的基因標(biāo)記，其標(biāo)志是記憶相關(guān)基因(Sell，F(xiàn)oxp1，Tcf7，Cd7，Il7r，Klf2，Ccl5)的高表達(dá)和效應(yīng)相關(guān)基因(Gzmd，Ifng，Prf1，Gzma，Gzmb)的低表達(dá)(Fig.4H-I)。對先前的體外單細(xì)胞數(shù)據(jù)（Fig.2H-J）的進(jìn)一步分析顯示，CDK4/6i處理后，具有這種持續(xù)性特征的細(xì)胞頻率從7.5%增加至26.8%（Fig.4J-K）。這些數(shù)據(jù)表明，抑制CDK4/6促進(jìn)T細(xì)胞向真實的記憶表型分化，其特征是功能的長期持久性。
5、CDK4/6預(yù)處理增強(qiáng)CAR-T細(xì)胞的持久性和有效性
接下來測試CDK4/6i處理是否會誘導(dǎo)嵌合抗原受體(CAR)-T細(xì)胞的記憶表型，并克服CAR-T細(xì)胞***成功的兩大障礙：T細(xì)胞耗竭和缺乏持久性。通過臨床試驗，以LewisY(LeY)抗原為靶點，制造了人類CAR-T細(xì)胞(Fig.5A)并發(fā)現(xiàn)暴露于CDK4/6i產(chǎn)生CD4+和CD8+干細(xì)胞記憶（Tscm）CAR-T細(xì)胞(Fig.5B)。CAR-T細(xì)胞的3’RNA-seq揭示CDK4/6抑制后記憶表達(dá)***改變，GSEA分析證實了記憶相對效應(yīng)信號的富集，并如預(yù)期E2F靶基因下調(diào)(Fig.5C)。為了檢測在體內(nèi)的持久性，使用兩個**供體的PBMC生成的LeYCAR-T細(xì)胞用CDK4/6i預(yù)處理，并轉(zhuǎn)移到NSG小鼠中(Fig.5D)。與未經(jīng)處理的對照組相比，觀察到在移植后的幾周內(nèi)，血液中CD8+和CD4+預(yù)處理的CAR-T細(xì)胞的頻率和數(shù)量***增加(Fig.5E-F)。 神經(jīng)元中FTH的敲除抵消了褪黑素對創(chuàng)傷性腦損傷鐵死亡的保護(hù)作用。
為了研究 PGE2 是否有助于 M2 活化，來自野生型 (WT) 和Il4ra -/-小鼠的BM 衍生巨噬細(xì)胞 (BMDM)在體外與 PGE2 一起經(jīng)受 IL4/IL13。PGE2 單獨不影響 M2 ***，但**增強(qiáng)了 IL4/IL13 觸發(fā)的 M2 ***。更有趣的是，IL4/IL13 促進(jìn)了巨噬細(xì)胞中ptgs2 的表達(dá)，在 PGE2 的存在下可以進(jìn)一步升高。PGE2 通過與稱為 E-前列腺素 (EP) 1-4 受體的 4 種不同 G 偶聯(lián)受體結(jié)合而發(fā)揮作用。不同受體的亞型決定了不同細(xì)胞類型的特定生理反應(yīng)。通過使用特定的 EP 抑制劑，我們確定 PGE2 促進(jìn) M2 極化主要由 EP2 受體介導(dǎo)。此外，PGE2 可以促進(jìn) IL4Rα 表達(dá)，從而增強(qiáng) IL4/IL4Rα 信號傳導(dǎo)。在 ADM 階段（第 2 天）之前抑制 PGE2 合成在很大程度上降低了 M2 ***并在第 3 天增加了胰腺中的 ADM 結(jié)構(gòu)。總之，這些結(jié)果表明導(dǎo)管樣細(xì)胞和胰腺巨噬細(xì)胞在第 3 天釋放的 PGE2 增強(qiáng)了 M2 活化，并限制了再生胰腺中 ADM 的形成。英拜生物提供生物科學(xué)內(nèi)的專業(yè)的技術(shù)咨詢，技術(shù)合作。上海記憶障礙鼠模型科研
發(fā)現(xiàn)乳酸菌上清液降低了尿酸濃度。出生缺陷拷貝數(shù)科研整體服務(wù)
7）MIR210HG通過miR-337-3p和miR-137促進(jìn)**進(jìn)展
為了確定MIR210HG下調(diào)對Ishikawa和HEC-1A細(xì)胞系惡性行為的抑制作用是否通過miR-337-3p/137介導(dǎo)，我們進(jìn)行了功能挽救實驗。結(jié)果證實MIR210HG沉默對Ishikawa和HEC-1A細(xì)胞遷移和侵襲的惡性抑制作用被miR-337-3p/137敲低***逆轉(zhuǎn)(圖7A-7E)。這表明MIR210HG通過miR-337-3p/137調(diào)控Ishikawa和HEC-1A細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為。
8）抑制MIR210HG和miR-337-3p/137過表達(dá)抑制**生長
我們測定了MIR210HG和miR-337-3p/137在體內(nèi)**模型中的功能。裸鼠實驗中，每組實驗小鼠3只。結(jié)果表明與對照組相比，轉(zhuǎn)染sh-MIR210HG并過表達(dá)miR-337-3p和miR-137降低了**體積(圖8A)。轉(zhuǎn)染shMIR210HG并同時過表達(dá)miR-337-3p和miR-137的組**體積**小。免疫組化分析顯示，與單獨轉(zhuǎn)染agomir-337-3p/137和sh-MIR210HG組相比，共轉(zhuǎn)染組HMGA2和Ki-67的表達(dá)較低(圖8B)。
結(jié)論：MIR210HG在子宮內(nèi)膜*患者中是一個**的預(yù)后因素，干擾MIR210HG的體內(nèi)外表達(dá)可抑制子宮內(nèi)膜*細(xì)胞的惡性表型。MIR210HG-miR-337-3p/137被發(fā)現(xiàn)介導(dǎo)HMGA2調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜*細(xì)胞惡性行為的能力。MIR210HG-miR-337-3p/137-HMGA2軸是新的子宮內(nèi)膜*分子預(yù)后標(biāo)志物和潛在的***靶點。 出生缺陷拷貝數(shù)科研整體服務(wù)
公司特色是以各式高通量二代測序為基礎(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細(xì)胞實驗平臺，提供課題整體設(shè)計外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實驗平臺落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實驗平臺開放參觀，客戶可隨時參觀實驗并參與實驗課題的進(jìn)度，保證您的實驗是在您的指導(dǎo)下完成。
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5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
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