tRFs和tiRNAs作為sncRNA執行多種生物學功能 。它們能夠作為miRNA行使RNA干擾;替換與mRNA結合的翻譯起始因子eIF4G,直接抑制蛋白的翻譯過程4,5;結合某些蛋白因子,例如YBX1,影響mRNA的穩定性 ;與細胞色素C相互作用,調控細胞凋亡6;在應激條件下促進應激顆粒 (Stress Granules, SGs) 的組裝 ;敏化細胞氧化應激誘導的p53***以及p53依賴的細胞死亡7;作為父**觀遺傳因子,改變子代基因轉錄級聯過程8,9 。
tRFs具有許多microRNA的功能特性,例如,Dicer依賴的生物發生,與Argonaute蛋白形成RISC復合體以及RNA沉默。 據報道,tiRNA和tRF可以microRNA的方式參與RNA干擾,另外可結合諸如YBX1蛋白因子調控靶mRNA的穩定性。綠地tiRNA動物模型構建
piRNA測序技術服務
piRNA是一類長度約26-32nt的小非編碼RNA分子,通過與Piwi蛋白家族成員作用發揮功能。與miRNA數目只有幾百種不同,piRNA在人、小鼠、大鼠中***表達。piRNA在長度、表達類型、基因結構和生成方式上均與miRNA截然不同。在功能上,piRNA在生殖發育和精子形成過程中保護精子基因組免受轉座子插入的危害,通過表觀遺傳調控基因表達,蛋白翻譯和mRNA更新,以及維持染色質結構和細胞周期進程,并與**進程有關。
tRF&tiRNA測序技術服務
tRNA是非編碼小RNA分子的主要來源。tRNA來源的RN**段(tRF)和tRNA半分子(tiRNA)的生物發生是一個精確調控的過程,其含量有時甚至超過microRNA,具有獨特而多樣的功能。康成生物率先推出tRF&tiRNA高通量測序,使用Arraystar***授權的分析系統,提供從樣品到數據分析的一站式技術服務。 代謝組學tiRNA中標率高這些tRF&tiRNA分子的核苷酸組成、生物發生和功能上具有異質性。
tRFs長度約16-28nt,來源于成熟tRNA或前體tRNA,根據其在tRNA上的對應位置可進一步分為:(i) tRF-5,對應成熟tRNA的5’端,切割發生在D-loop;(ii) tRF-3,對應成熟tRNA的3’端,包含CCA部分,切割發生在T-loop;(iii) tRF-1,源自前體tRNA的3’尾部序列,3’末端含有多聚U序列;(iv) i-tRF,不屬于tRF-5,tRF-3或tRF-1,主要來自成熟tRNA的中間區域。tRF-1產生于前體tRNA的3’尾端序列。tRF-5,i-tRF和tRF-3分別起源自成熟tRNA的5’、內部、和3’端。當切割發生在成熟tRNA反密碼子環,將產生兩個半分子,tiRNAs,包括5’-tRFs和3’-tRFs。
外泌體成分包含蛋白質、miRNA.tRFRNA、LncRNA.circRNA,可調節多種生理或病理反應,包括**細胞侵襲與轉移、血管生長、兔疫應答等。同時,miRNA也可以作為**診斷以及預后標志物。其中的tRFRNA也是目前的研究熱點,其在體內參與多種生理及病理過程,包括病毒***、氧化應激、**、神經退行性疾病、選傳性代謝疾病等。客戶案例:與上海、重慶.沈陽等醫學領域的老師合作就外泌體以及tRFRNA在**、神經性疾病以及-些免疫代謝疾病方面取得了較大進展,并且在影響因子較高的期刊雜志上發表了文章。提供服務:根據客戶的研究方向與發表雜志要求,提供包括文獻搜索、查閱,分析實驗思路的合理性,證明所需要的方法和檢測所需的指標等。tRF&tiRNA測序技術服務tRNA是非編碼小RNA分子的主要來源。
逆轉錄合成cDNA
使用rtStar?First-StrandcDNASynthesisKit(3’and5’adaptor)(Cat#AS-FS-003,Arraystar)試劑盒進行接頭連接和反轉,合成cDNA***鏈。
實時定量PCR
以合成的cDNA作為模板進行實時定量PCR擴增,梯度稀釋的標準同時進行實時定量PCR擴增,根據Ct值制備標準曲線。以同樣的方法測定每個樣品中的內參,校正上樣誤差。6分析結果、提供實驗報告
分析實時定量PCR結果,根據標準曲線定量樣品中的目的tRF&tiRNA。提供實驗報告,包括詳細的實驗方法,實時定量PCR實驗數據和圖表。 5'tiRNA和3'tiRNA的大小在29-50nt左右。綜合tiRNA實驗外包
tRFs是來源于成熟tRNA或前體tRNA的小片段,可進一步分為tRF-5,tRF-3,tRF-1和i-tRF等,長度約為15-30nt。綠地tiRNA動物模型構建
實時熒光定量PCR技術是在普通PCR反應體系中加入熒光試劑,利用熒光信號實時檢測PCR進程,***通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR能夠專一、靈敏、快速、高重復性地精確定量起始模板濃度。tRF & tiRNA是由tRNA切割產生,長度約15-45個核苷酸的小RNA。由于tRF & tiRNA長度太短,且與tRNA序列完全重疊,不能通過傳統的實時定量PCR進行檢測。本公司通過在tRF & tiRNA兩端引入人工合成序列(adaptor),設計特殊的跨連接位點的定量PCR引物,可以精確檢測微量樣品中tRF & tiRNA表達水平。綠地tiRNA動物模型構建
公司特色是以各式高通量二代測序為基礎,利用生物數據信息分析手段,通過英拜生物自有的分子、病理以及細胞實驗平臺,提供課題整體設計外包、撰寫SCI論文一站式服務。公司實驗平臺落座在漕河涇開發區浦江園區,實驗平臺開放參觀,客戶可隨時參觀實驗并參與實驗課題的進度,保證您的實驗是在您的指導下完成。
1.整體課題外包服務:RNA甲基化研究專題,外泌體研究專題,wnt/VEGF/toll等經典通路研究,設計的課題均具有后續實驗課題的延展性,為您的標書奠定較好的基礎
2.標書申請:提供標書課題設計、撰寫,標書部分基礎實驗的開展,設計的標書均符合科研前沿熱點,中標率很高。
3.提供熱點**文獻技術支持,探討科研前沿熱點研究:trfRNA,DNA/RNA甲基化,外泌體,自噬,WNT等相關研究
4.二代測序:轉錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序
5.芯片:信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實驗:DNA甲基化實驗(BSP,MSP,焦磷酸測序),RNA甲基化實驗
7.實時定量PCR(mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA),WB,RNA功能驗證實驗(靶基因驗證,過表達,干擾),基因突變及SNP檢測,FISH,RNA-PULLdown,rip,chip實驗以及細胞增殖,凋亡,流式等細胞功能學實驗