東莞尿液外泌體穩定性好

來源: 發布時間:2023-08-24

外泌體的表征方法:根據藥物遞送系統(DDS)表征外泌體結構至關重要,因為它決定了DDS的特性,例如細胞或組織親和力、應激反應、吸收途徑和藥物釋放。2014年和2018年國際細胞外囊泡學會(MISEV2018)提出了外泌體(包括研究和外泌體制備)應滿足的基本要求指南。在開發基于外泌體的DDS時,必須考慮數量、大小、形態、膜組成和蛋白質(包括受體)等參數。這些參數表征所用的技術主要為光學、非光學和微流體技術。外泌體的表征方法之非光學方法:FTIR光譜和衰減全反射FTIR(ATR-FTIR)常用于外泌體質量量化和脂質和蛋白質含量的總體估計。使用TRPS,可以同時測量大小、濃度和zeta電位。由于掃描電子顯微鏡(SEM)、透射電子顯微鏡的成本較高,近些年來,一種新型的納米粒度分析儀器在外泌體研究領域迅速發展,比如:粒度分析儀可以不只可以進行單顆粒檢測,顆粒粒徑檢測還可以檢測細胞外泌體的濃度、zeta電位、形態等進行多維度檢測。外泌體受到多種因素的調控,例如細胞膜電位、氧化應激和信號轉導途徑等。東莞尿液外泌體穩定性好

CHO細胞外泌體的分離和表征:CHO細胞是一種普遍用于生物制藥蛋白質生產的宿主。CHO細胞中分離外泌體主要采用聚合物的沉淀(PBP)技術從分批培養中分離和富集細胞外泌體囊泡。分離后的外泌體可以通過多種方法來檢測和表征分離的囊泡,這些分析包括動態光散射(DLS)和Zeta電位測量、電子顯微鏡(EM)和外泌體標記物分析、RNA和脂質分析等。根據制造商的指南,使用TEI總外泌體分離試劑盒(Invitrogen)從培養基中分離外泌體。將細胞培養基以2000×g離心30分鐘以去除細胞和任何碎片;隨后將上清液小心移至離心管管中,加入0.5倍體積的TEI試劑,充分混合并在4°C下孵育過夜。然后將樣品在4°C下以10,000×g離心1小時,然后在棄去上清液后,將富含外泌體的顆粒重新懸浮在75μlPBS緩沖液中。然后將樣品儲存在-20°C下,直到需要進行后續分析。東莞尿液外泌體穩定性好外泌體可以作為一種新型的藥物輸送系統,利用其高度選擇性的靶向性,有效地提高藥物的生物利用度。

分離外泌體的方法之微流控分離:基于微流體的外泌體分離可以包括用于外泌體捕獲的免疫親和方法,納米多孔膜篩分方法或微柱上的納米線用于外泌體捕獲。所有三個系統都需要具有粘彈性分析和電操作的芯片才能進行外泌體分離過程。外泌體的特異性很高,采用基于微流控芯片的免疫親和捕獲方法。尺寸范圍在40-100nm之間的外泌體被這種微流體芯片特異性地捕獲,在外泌體分離和定量方面的益處。篩分方法可用于通過壓力或通過電泳從全血中過濾外泌體,壓力的利用使分離時間更短,電場導致高外泌體純度。特異性、可重復性、低分離時間和更低的分離成本是基于微流體的外泌體分離的一些優點。

當外泌體在1983年頭次被發現后,其被認為是細胞排泄廢物的一種方式,如今隨著大量對其生物來源、其物質構成及運輸、細胞間信號的傳導以及在體液中的分布的研究發現外泌體具有多種多樣的功能。外泌體的功能取決于其所來源的細胞類型,其可參與到機體免疫應答、抗原提呈、細胞遷移、細胞分化、疙瘩侵襲等方方面面。有研究表明疙瘩來源的外泌體參與到疙瘩細胞與基底細胞的遺傳信息的交換,從而導致大量新生血管的生成,促進了疙瘩的生長與侵襲。可將不同分離方法結合使用,以提高外泌體分離的效率和分離精度。

差速離心法分離外泌體的實驗原理:離心管內粒子的速度,由三種力(離心力、阿基米德浮力和斯托克斯粘性阻力)的平衡決定,如:其中geff為離心力(加速度),R為旋轉半徑,即粒子距旋轉軸的距離,ω為旋轉角頻率,d為粒子直徑,ρ為質量粒子的密度和ρsolv和η分別是介質的密度和粘度。在固定的離心條件(轉速和介質成分)下,粒子速度完全由粒子的形態和密度決定。密度高于介質密度的粒子沿離心力“向下”運動,而比介質輕的粒子沿與離心力相反的方向“上浮”。對于相似的密度,較大的粒子遷移得更快。因此,在生物學中,離心主要用于按大小(差速和速率區帶離心)或按密度(等密度離心)分離不同的物體。在這項研究中,我們專注于使用差速離心按大小進行顆粒分級。的外泌體分離技術采用了磁珠分離和濾膜分離的方法。腦脊液外泌體哪家劃算

外泌體在人體的主要作用是充當局部和全身信號和調節系統。東莞尿液外泌體穩定性好

外泌體分離方法之親和層析分離法:在親和層析分離法方面,主要使用凝集素和合成Vn(venceremin)肽。凝集素將結合存在于外泌體表面的糖基化蛋白質,從而使外泌體沉淀。Vn肽分離技術基于其對含有HSP的細胞外顆粒的高親和力。然而,這種方法比較容易使提取物被膜表面上含有上述標記物的細胞和其他顆粒污染。外泌體分離方法之介電泳分離法:介電泳分離法主要利用不同大小的粒子在不均勻電場中的位置差異。外泌體被吸引到高電區域,而較大的顆粒將位于低電區域。該方法速度快,適合用于高通量篩選,但缺點是需要加熱。東莞尿液外泌體穩定性好

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