四、INPP4B促進pi3kα依賴的晚期核內(nèi)體形成
五、阻斷atm依賴的磷酸化會損害DNA損傷后PTEN的亞細胞再分配
對MCF-7細胞內(nèi)溶酶體室的檢查顯示，GFP-INPP4B不影響eea1陽性的早期內(nèi)溶體，但***增加了cd63陽性的晚期內(nèi)溶體(2.5倍)和lamp1陽性的溶酶體(1.7倍)(圖4a,b)。
提示INPP4B促進晚期內(nèi)吞體/溶酶體的形成。使用bsa-gold標記MCF-7細胞內(nèi)溶酶體室，在電鏡下進行超微結(jié)構(gòu)分析。GFP-INPP4B增加了類似晚期核內(nèi)體的bsa陽性空泡結(jié)構(gòu)的數(shù)量(圖4c)。利用染料淬滅的BSA(BSA-dq)檢測了運往溶酶體的貨物運輸，BSA-dq通過液相內(nèi)吞進入內(nèi)吞體，溶酶體水解酶隨后促進去淬和***熒光信號。GFP-INPP4B***增加了bsa-dq陽性結(jié)構(gòu)的數(shù)量(2倍)(圖4d,e)，表明INPP4B增強了內(nèi)吞貨物通過晚期內(nèi)吞體到溶酶體的運輸。相比之下，使用泛I類PI3K抑制劑BKM120、PI3Kα特異性抑制劑BYL719(補充圖5f)或使用兩種不同的siRNAs耗盡PIK3CA抑制GFP-INPP4B細胞中晚期核內(nèi)體形成的增加(圖4f,g和補充圖5i,j)。 深耕科研行業(yè)提高科研的高效。生物相關(guān)課題售后服務
2021年，來自加拿大多倫多大學和加拿大溫哥華英屬哥倫比亞大學等團隊合作在Nature communication雜志上發(fā)表了文章“Biological and therapeutic implications of a unique subtype of NPM1 mutated AML.”。此報道描述了npm1突變AML患者的分子異質(zhì)性。基于rna-seq的基因表達譜分析，確定了兩種新亞型，稱為原始型和committed型。基于基因表達、表觀基因組(ATAC-seq)和免疫表型(CyToF)的差異，在**的AML隊列中將亞型與特定的分子特征、疾病分化狀態(tài)和患者生存聯(lián)系起來。此外，表明了在缺乏FLT3-ITD的原始特征病例的***中添加激酶抑制劑對AML可能有***益處。代謝課題省自然科學基金英拜生物對整體實驗實施的全局把控。
為了闡明miR-934是否主要來源于CRC細胞的外泌體，使用GW4869抑制CRC細胞的外泌體分泌，發(fā)現(xiàn)miR-934在CRC細胞來源的外泌體中的表達水平明顯高于外泌體耗盡的CRC細胞（Fig.2h）。此外，采用qPCR分析miR-934在總CM、外泌體耗盡CM(超離心耗竭)和外泌體中的表達，結(jié)果顯示，miR-934在總CM或外泌體中的表達***高于外泌體缺失的CM（Fig.2i）。此外，使用qPCR研究了上述四種CRC細胞系的外泌體中miR-934的表達，發(fā)現(xiàn)外泌體中miR-934的表達模式與CRC細胞CM中的表達模式一致（Fig.2j）。以上結(jié)果表明miR-934主要包裹在CRC細胞來源的外泌體中。
CircACTN4 直接與 FUBP1 相互作用并*** MYC 的轉(zhuǎn)錄
為了探索circACTN4的分子機制，首先進行了pull down和質(zhì)譜分析circACTN4結(jié)合蛋白，發(fā)現(xiàn)FUBP1在circACTN4上顯著富集。RIP 檢測進一步證實 FUBP1 可以通過qRT-PCR與BC細胞中的內(nèi)源性circACTN4 特異性結(jié)合。FISH-IF 分析顯示 circACTN4和FUBP1共定位于細胞核中。但是circACTN4 的上調(diào)和敲低并沒有改變 FUBP1的表達水平，表明circACTN4不參與FUBP1的翻譯后調(diào)控。ChIP-PCR測定證實FUBP1與BC細胞中MYC啟動子結(jié)合。構(gòu)建了 FUBP1 和 FIR 過表達和敲低質(zhì)粒。通過qRT-PCR和蛋白質(zhì)印跡確定轉(zhuǎn)染效率。qRT-PCR和WB的結(jié)果表明，F(xiàn)UBP1的上調(diào)或下調(diào)分別顯著增加或降低了BC細胞中MYC的表達水平。此外， qRT-PCR發(fā)現(xiàn)FUBP1在BC組織中的表達明顯高于鄰近正常組織中的表達。 公共比較毒理基因組學數(shù)據(jù)庫。
與coaccessibilityscore較高的Cicero連接相比，coaccessibilityscore較低的Cicero連接在GeneHancerdoubleelite數(shù)據(jù)庫中的可能性較小(p<2.21016，卡的平方)。在近端曲小管內(nèi)，大部分Cicero連接要么在啟動子區(qū)域內(nèi)，要么在啟動子和另一個位置之間(圖3d)，這種分布在其他細胞類型中也類似(補充圖11)。轉(zhuǎn)錄因子活性與轉(zhuǎn)錄因子表達有適度的相關(guān)性(Pearsonr2=0.36,p值=4.21012，圖3e)。推測motif活性與轉(zhuǎn)錄因子表達呈正相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子可能在DAR中扮演轉(zhuǎn)錄***因子的角色，而負相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子則扮演轉(zhuǎn)錄抑制因子的角色。令人驚訝的是，糖皮質(zhì)***受體(NR3C1)的motif活性與表達呈正相關(guān)，而礦皮質(zhì)***受體(NR3C2)則呈負相關(guān)(圖3f)。進一步了解阻斷atm依賴的PTEN磷酸化如何影響細胞對基因毒性損傷的反應。代謝課題服務價格
高通量測序后續(xù)的機制實驗。生物相關(guān)課題售后服務
為了驗證MAO-A缺乏是否直接有助于減輕Maoa KO巨噬細胞的免疫抑制極化，進行拯救實驗。構(gòu)建MIG-Maoa逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，利用該載體轉(zhuǎn)導Maoa KO BMDMs，并在這些巨噬細胞中實現(xiàn)了MAO-A的過表達（圖3l-n）。MAO-A過表達***加劇了IL-4/ IL-13刺激的Maoa KO BMDMs的免疫抑制表型（圖3o-p）。綜上所述，這些結(jié)果表明，MAO-A作為一種自主因子，在***刺激下促進巨噬細胞免疫抑制極化。
4、MAO-A通過ROS上調(diào)促進巨噬細胞免疫抑制極化
接下來，研究調(diào)控MAO-A促進巨噬細胞免疫抑制極化的分子機制。據(jù)報道，細胞內(nèi)活性氧(ROS；氧化應激)會引起巨噬細胞的免疫抑制特征。MAO-A催化單胺的氧化脫氨，從而產(chǎn)生過氧化氫(H2O2)作為副產(chǎn)物，可以增加細胞內(nèi)ROS水平。因此，推測MAO-A可能通過上調(diào)TAM中的ROS水平，促進TME中TAM的免疫抑制極化（圖4a）。為了驗證這一假設(shè)，測量了從攜帶B16-OVA**的MaoaWT和KO小鼠中分離的TAMs中的ROS水平，并檢測到MaoaKOTAMs中ROS水平***降低（圖4b-c）。 生物相關(guān)課題售后服務
公司特色是以各式高通量二代測序為基礎(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細胞實驗平臺，提供課題整體設(shè)計外包、撰寫SCI論文一站式服務。公司實驗平臺落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實驗平臺開放參觀，客戶可隨時參觀實驗并參與實驗課題的進度，保證您的實驗是在您的指導下完成。
1.整體課題外包服務：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計的課題均具有后續(xù)實驗課題的延展性，為您的標書奠定較好的基礎(chǔ)
2.標書申請：提供標書課題設(shè)計、撰寫，標書部分基礎(chǔ)實驗的開展，設(shè)計的標書均符合科研前沿熱點，中標率很高。
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4.二代測序：轉(zhuǎn)錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序
5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實驗：DNA甲基化實驗（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實驗
7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學實驗