VEGF課題課題設(shè)計

哺乳動物細(xì)胞DNA損傷反應(yīng)(DDR)信號的**是共濟(jì)失調(diào)***擴(kuò)張癥突變(ATM)和ATM-和rad3相關(guān)(ATR)蛋白激酶。ATM和ATR磷酸化并***另外兩個激酶CHK1和CHK2, CHK1和CHK2與ATM和ATR一起，是細(xì)胞周期檢查點[24]的主調(diào)節(jié)器。通過調(diào)節(jié)CDKs的活性，這些分子在細(xì)胞周期G1 S期、S內(nèi)期和G2 M期減緩或阻止細(xì)胞周期進(jìn)程，使DNA損傷得以修復(fù)。ATM和ATR通過控制不同因子在DNA損傷位點的表達(dá)、活性或招募來促進(jìn)DNA修復(fù)。一般來說，DDR機(jī)制能夠修復(fù)細(xì)胞在其生命周期中積累的DNA損傷，但如果認(rèn)為損傷程度過高，就會誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡或細(xì)胞衰老導(dǎo)致細(xì)胞死亡。caspase-3抗體是一種***用于檢測凋亡細(xì)胞的標(biāo)志物。VEGF課題課題設(shè)計

4.ELNAT1直接與hnRNPA1相互作用

由于lncRNA的分子功能與其亞細(xì)胞定位相關(guān)，通過FISH和亞細(xì)胞定位實驗發(fā)現(xiàn)ELNAT1在UM-UC-3和T24細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核均有表達(dá)（SupplementalFigure7A,B）。并且通過RNA-pulldown實驗，發(fā)現(xiàn)在分子量35~40kDa上有明顯的條帶（Figure4A）。對此，通過質(zhì)譜（MS）和Westernblot分析顯示，hnRNPA1是**豐富的ELNAT1相互作用蛋白（Figure4B-D）。熒光染色和RNA免疫沉淀（RIP）證實了ELNAT1和hnRNPA1在UM-UC-3和T24細(xì)胞中的共定位，并且ELNAT1通過內(nèi)源性hnRNPA1富集（Figure4E,F），進(jìn)一步驗證了ELNAT1和hnRNPA1之間的相互作用。 星形膠質(zhì)細(xì)胞課題整體服務(wù)解決了對確定因果調(diào)節(jié)機(jī)制網(wǎng)絡(luò)的方法的關(guān)鍵需求。

5）circPDE4B和RIC8A調(diào)控軟骨細(xì)胞中的p38信號通路

為了闡明RIC8A下游的信號通路，我們研究了RIC8A敲低的HCs中MAPKs、NF-κB和mTOR的磷酸化水平。兩種RIC8AshRNA***降低了p38的磷酸化水平(圖5A)。然后用信號分子抑制劑對HCs進(jìn)行預(yù)處理，包括ERK1/2抑制劑、p38抑制劑和JNK抑制劑，然后是RIC8A過表達(dá)。經(jīng)過p38MAPK抑制劑預(yù)處理的RIC8A過表達(dá)抑制了OA，然而，ERK或JNK抑制劑對其沒有影響(圖5B)。此外，***RIC8AshRNA或過表達(dá)腺病毒后，p38MAPK的磷酸化及其定位發(fā)生了異常調(diào)節(jié)(圖5C-E)。這些結(jié)果表明，RIC8A在軟骨細(xì)胞中通過p38信號通路發(fā)揮作用。接下來我們研究了circPDE4B在OA中調(diào)控p38信號通路中的作用。circPDE4B過表達(dá)降低，而circPDE4B敲低***p38MAPK信號，同時p38磷酸化和核轉(zhuǎn)位(圖5F-H)。然后我們進(jìn)行了拯救試驗。如圖5I-K所示，RIC8A過表達(dá)挽救了過表達(dá)circPDE4B誘導(dǎo)的p38信號通路的下調(diào)，而抑制RIC8A挽救了敲除circPDE4B誘導(dǎo)的p38信號通路的***，以及p38的磷酸化和核易位。基于這些發(fā)現(xiàn)，circPDE4B-RIC8A軸在調(diào)節(jié)軟骨細(xì)胞下游p38MAPK信號通路中發(fā)揮重要作用。

6.水蘇糖減輕DHEA誘導(dǎo)的多囊卵巢綜合征大鼠卵巢功能障礙

為了確定水蘇糖是否參與了Tempol對PCOS大鼠的有益作用，DHEA處理的大鼠給予200mg/kg水蘇糖12天。水蘇糖給藥對體重沒有明顯影響(圖8A)，但改善了PCOS大鼠的動情周期紊亂(圖8B)。H&E染色表明，水蘇糖可減少卵巢囊泡數(shù)量，增加黃體形成(圖8C-E)。水蘇糖還可***降低PCOS大鼠血清睪酮水平的升高(圖8F)。上述結(jié)果提示水蘇糖確實改善了PCOS大鼠卵巢功能障礙，改善了卵巢組織病理損傷。

綜上所述，Tempol通過降低腸道氧化應(yīng)激、恢復(fù)腸道失調(diào)、調(diào)節(jié)腸道微生物和宿主代謝產(chǎn)物之間的相互作用來保護(hù)DHEA誘導(dǎo)的多囊卵巢綜合征(PCOS)(圖9)。這些結(jié)果表明Tempol是一種潛在的***多囊卵巢綜合征的策略。 IGF-1信號在Pex誘導(dǎo)的肝纖維化中起重要作用。

滲透活性劑保護(hù)細(xì)胞防止ferroptosis

氣孔形成是不同類型調(diào)控細(xì)胞死亡的共同特征。質(zhì)膜孔的打開導(dǎo)致水分子的流入，這是由于無法通過膜孔的高濃度細(xì)胞內(nèi)大分子造成的滲透失衡的結(jié)果(圖3A)。這種效果可以通過添加不能夠通過孔進(jìn)入細(xì)胞的適當(dāng)大小的滲透保護(hù)劑peg來阻止，從而平衡細(xì)胞內(nèi)滲透壓、水流入和隨后的細(xì)胞坍塌(圖3B)。加入1.8nm的peg并不能阻止胞質(zhì)Ca2+的增加、細(xì)胞圓化或細(xì)胞死亡(圖3C-F)。相比之下，在peg(2.3nm和2.7nm)的存在下，胞質(zhì)Ca2+水平的增加和細(xì)胞死亡均以尺寸依賴的方式延遲(圖3D,F)。PEG(2.7nm)對ferroptosis的保護(hù)作用在洗滌后恢復(fù)，這表明膜損傷隨時間的推移是穩(wěn)定的(圖3G)。我們還發(fā)現(xiàn)，PEG(2.7nm)并不能阻止RSL3處理的NIH-3T3細(xì)胞的脂質(zhì)過氧化(圖3H,I)。對于使用的所有PEG大小，NIH-3T3細(xì)胞處理較長時間(24h)后細(xì)胞死亡恢復(fù)(圖3J)。PEG對ferroptosis動力學(xué)的抑制作用也隨著RSL3濃度的增加而降低(圖3K,L)。**終作者以在較低濃度RSL3下能夠起到保護(hù)作用的PEG尺寸作為參考，得出質(zhì)膜穿孔部分的半徑約為2.5nm(圖3L)。 zVAD預(yù)處理也略微增加了IR后PTEN-398A細(xì)胞中未解決的DNA損傷灶的數(shù)量。WNT課題檢測服務(wù)

soRNA測序的 整套服務(wù)。VEGF課題課題設(shè)計

既往研究表明，F(xiàn)BXW7/HIF-1α/ VEGF-A通路參與**血管生成。因此，我們假設(shè)miR-144的促血管生成功能是通過在*變過程中調(diào)節(jié)FBXW7/HIF-1α/VEGF-A通路實現(xiàn)的。在本研究中，我們首先在mRNA水平和蛋白水平檢測暴露于鼻咽*EVs的HUVECs中FBXW7和HIF-1α。而HUVECs上清中用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)測定VEGF-A濃度(圖5I和5J)。結(jié)果顯示，暴露于miR-144模擬物的EVs中FBXW7的表達(dá)減少，而HUVECs上清液中HIF-1α和VEGFA的表達(dá)增加。miR-144抑制劑的引入導(dǎo)致EVs中FBXW7表達(dá)增加，HIF -1α表達(dá)減少，HUVECs上清VEGF-A濃度降低。此外， FBXW7過表達(dá)或HIF-1α沉默導(dǎo)致HUVECs上清中HIF-1α表達(dá)和VEGF-A濃度降低(圖5K和5L)。因此，miR-144可以靶向FBXW7，促進(jìn)HIF-1α和VEGF-A的表達(dá)。VEGF課題課題設(shè)計

公司特色是以各式高通量二代測序為基礎(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細(xì)胞實驗平臺，提供課題整體設(shè)計外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實驗平臺落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實驗平臺開放參觀，客戶可隨時參觀實驗并參與實驗課題的進(jìn)度，保證您的實驗是在您的指導(dǎo)下完成。

1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計的課題均具有后續(xù)實驗課題的延展性，為您的標(biāo)書奠定較好的基礎(chǔ)

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4.二代測序：轉(zhuǎn)錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序

5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片

6.表觀遺傳實驗：DNA甲基化實驗（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實驗

7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實驗