4）APP/PS1小鼠大腦皮質(zhì)區(qū)受損星形膠質(zhì)細(xì)胞中氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的脂質(zhì)過氧化水平升高
我們研究了NOX4來源的氧化應(yīng)激在APP/PS1小鼠受損星形膠質(zhì)細(xì)胞中的作用。我們用免疫熒光染色法測(cè)定了APP/PS1小鼠和野生型(WT)小鼠大腦皮層GFAP陽(yáng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞中4-HNE的蛋白水平(圖4A)。免疫熒光染色顯示，與WT小鼠相比，APP/PS1小鼠皮質(zhì)區(qū)GFAP陽(yáng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞中4-HNE陽(yáng)性染色強(qiáng)度增加(圖4A、C)。APP/PS1小鼠皮質(zhì)區(qū)受損的GFAP陽(yáng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞中4-HNE陽(yáng)性染色強(qiáng)度升高。此外，與WT小鼠相比，APP/PS1小鼠中4-HNE和GFAP亞細(xì)胞共定位呈陽(yáng)性的受損星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量***增加(圖4D)。與WT小鼠相比，APP/PS1小鼠皮質(zhì)區(qū)GFAP陽(yáng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞(圖4B和E)和MDA與GFAP亞細(xì)胞共定位陽(yáng)性的受損星形膠質(zhì)細(xì)胞(圖4F)數(shù)量增加。4-HNE在APP/PS1小鼠NOX4陽(yáng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞***定位(圖4G)。此外，APP/PS1小鼠NOX4和4-HNE陽(yáng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量***增加(圖4H)。這些結(jié)果提示APP/PS1受損小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞中氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的脂質(zhì)過氧化水平升高。 我們進(jìn)行了熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè).代謝標(biāo)書技術(shù)指導(dǎo)
6、**來源外泌體miR-208b影響體內(nèi)化療效果和**生長(zhǎng)
隨后作者探究了**來源外泌體miR-208b體內(nèi)對(duì)化療效果和**生長(zhǎng)的影響。用慢病毒轉(zhuǎn)染CT26細(xì)胞產(chǎn)生miR-208b過表達(dá)和miR-208b敲低細(xì)胞系。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)示意圖如圖7A所示，實(shí)驗(yàn)采用6組(每組10只小鼠)，其中3組使用奧沙利鉑，BALB/c小鼠植入CT26細(xì)胞，建立**植入模型。如圖7B-7D所示，miR-208b-OE組**生長(zhǎng)速度較快，而中miR-208-KD組**生長(zhǎng)明顯慢于對(duì)照組。從各組小鼠中分離出外周血CD4+T細(xì)胞，結(jié)果顯示miR-208b-OE組中PDCD4的***下調(diào)，miR-208-KD組的結(jié)果則相反(圖7E和7F)。然而，在PDCD4mRNA水平上沒有觀察到差異(圖7G)。從血清中分離出外泌體，檢測(cè)miR-208b水平(圖7H)。如預(yù)期的，miR-208b在miR-208b-OE組中***升高，而miR-208b-KD組中miR-208b水平下降(圖7I)。這些結(jié)果表明，**分泌的miR-208b在體內(nèi)可以充分地傳遞到CD4+T細(xì)胞中，抑制PDCD4的表達(dá)。此外，這種現(xiàn)象在奧沙利鉑***組更加***(miR-208b-OE+OXA和miR-208b-KD+OXA)。 項(xiàng)目標(biāo)書售后服務(wù)與未接受FMT***的受傷小鼠相比接受FMT***的小鼠表現(xiàn)出相對(duì)更大的運(yùn)動(dòng)恢復(fù)。
此外，為進(jìn)一步驗(yàn)證ELNAT1與hnRNPA1相互作用區(qū)域，使用ELNAT1不同序列缺失進(jìn)行RNA-pull down分析，以評(píng)估ELNAT1和hnRNPA1結(jié)合所需的區(qū)域。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，ELNAT1序列中600-750 nt位置是其與hnRNPA1交互作用區(qū)域（Figure 4 G, H）。并通過POSTAR2預(yù)測(cè)ELNAT1在610-680 nt區(qū)域的莖環(huán)結(jié)構(gòu)可能被hnRNPA1識(shí)別（Figure 4 I），而當(dāng)這一區(qū)域缺失時(shí)，hnRNPA1減弱對(duì)ELNAT1的富集（Figure 4 J）。因此，這表明這些特定的序列（610-680 nt）對(duì)ELNAT1 hnRNPA1的相互作用至關(guān)重要。
5）MAPK1-109aa對(duì)胃*有抑制作用
為了進(jìn)一步研究MAPK1-109aa的生物學(xué)功能，我們將circMAPK1ATG突變質(zhì)粒、circMAPK1IRES突變質(zhì)粒和circMAPK1過表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到MKN45和BGC823細(xì)胞中。如預(yù)期的那樣，當(dāng)轉(zhuǎn)染ATG突變質(zhì)粒和IRES突變質(zhì)粒時(shí)，沒有出現(xiàn)circMAPK1編碼的MAPK1-109aa13-kDa帶(圖5a)。CCK8實(shí)驗(yàn)(圖5b)、集落形成實(shí)驗(yàn)(圖5c，d)和EdU實(shí)驗(yàn)(圖5e，f)顯示過表達(dá)circMAPK1明顯抑制了細(xì)胞的增殖能力。流式細(xì)胞術(shù)顯示，處于S期的GC細(xì)胞數(shù)量也明顯減少(圖5g)。然而，當(dāng)circMAPK1的ATG或IRES序列發(fā)生突變時(shí)，MKN45和BGC823細(xì)胞的增殖能力沒有明顯變化。 circNDUFB2敲低促進(jìn)這些表型。
IGF2BP結(jié)合區(qū)域包含“GGAC”N6-甲基腺苷（m6A）**基序。IGF2BPs是m6A結(jié)合蛋白。為了探索circRNA和IGF2BP之間的相互作用是否通過m6A依賴性的方式進(jìn)行調(diào)節(jié)，對(duì)circNDUFB2進(jìn)行了MeRIP，并觀察到circNDUFB2中m6A的顯著富集。敲低METTL3和METTL14顯著降低了circNDUFB2中m6A修飾的水平，并且沒有改變circNDUFB2的水平。METTL3/14敲低顯著削弱了circNDUFB2和IGF2BP之間的相互作用。這些數(shù)據(jù)表明，circNDUFB2以依賴于m6A的方式與三個(gè)IGF2BP物理相互作用。circNDUFB2過表后IGF2BPs的mRNA無(wú)***變化，蛋白質(zhì)水平***降低。此外，circNDUFB2突變體不影響IGF2BPs的蛋白質(zhì)水平。因此推測(cè)circNDUFB2可能通過相互作用使IGF2BP蛋白失穩(wěn)。發(fā)現(xiàn)circNDUFB2的過度表達(dá)***降低了IGF2BP蛋白的水平，這可以通過MG132（蛋白酶抑制劑）恢復(fù)。circNDUFB2***增加了IGF2BPs的泛素化水平，但這種作用因其突變而受損。這些結(jié)果表明circNDUFB2通過促進(jìn)泛素/蛋白酶體依賴性降解降低IGF2BPs的穩(wěn)定性。為了確定水蘇糖是否參與了Tempol對(duì)PCOS大鼠的有益作用.內(nèi)分泌標(biāo)書推薦咨詢
circNDUFB2通過增強(qiáng)泛素/蛋白酶體依賴性降解降低IGF2BPs的穩(wěn)定性。代謝標(biāo)書技術(shù)指導(dǎo)
如圖4所示，與LS相比，慢性O(shè)S降低了KLF2和KLF4的表達(dá)，同時(shí)誘導(dǎo)了EndMT標(biāo)記物(SNAI1和TAGLN)。重要的是，慢性O(shè)S誘導(dǎo)了兩個(gè)巨噬細(xì)胞標(biāo)記基因(C1QC和C5AR1)的表達(dá)，直接證明了OS可以在體外誘導(dǎo)EndICLT。此外，我們利用小鼠PCL模型進(jìn)行了一項(xiàng)en - face共免疫染色研究，以確定體內(nèi)CDH5+ ECs中是否表達(dá)巨噬細(xì)胞標(biāo)記蛋白。如圖4A-4D所示，C1QA和LYZ在LCA ECs中明顯被誘導(dǎo)，而在rca中沒有，這為血流誘導(dǎo)的eniclt提供了更有力的證據(jù)。我們分析了由基因本體結(jié)果確定的d-flow條件***的致***通路(圖2E)。代謝標(biāo)書技術(shù)指導(dǎo)
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4.二代測(cè)序：轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、smallRNA測(cè)序、snoRNA測(cè)序、TRF測(cè)序
5.芯片：信號(hào)通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實(shí)驗(yàn)：DNA甲基化實(shí)驗(yàn)（BSP,MSP，焦磷酸測(cè)序），RNA甲基化實(shí)驗(yàn)
7.實(shí)時(shí)定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(靶基因驗(yàn)證，過表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測(cè)，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)