國自然課題設(shè)計實驗

4）miR-337-3p/miR-137在子宮內(nèi)膜*組織中表達較低，miR-337-3p/miR-137是MIR210HG的靶點

qPCR結(jié)果顯示，**組織中miR-337-3p和miR-137的表達明顯下調(diào)(圖4A)。此外，采用Pearson等級相關(guān)法分析miR-337-3p、miR-137與MIR210HG表達的相關(guān)性(圖4B)。隨后，我們分析了HMGA2與miR-337-3p/137表達的關(guān)系(圖4C)。我們進行了熒光素酶實驗，以確定MIR210HG是否可以直接靶向miR-337-3p和miR-137在預(yù)測的結(jié)合位點(圖4D)。為了確定MIR210HG是否與miRNA核糖**白復(fù)合物結(jié)合，我們使用抗AGO2抗體進行RIP實驗。與對照免疫球蛋白G免疫沉淀相比，lncRNAMIR210HG和miR-337-3p/miR-137在含AGO2的免疫沉淀中***富集(圖4E)。當MIR210HG在Ishikawa和HEC-1A細胞中過表達時，miR-337-3p和miR-137表達水平降低。相比之下，轉(zhuǎn)染sh-MIR210HG后，細胞中miR-337-3p和miR-137的表達水平***升高，說明MIR210HG可以調(diào)控miR-337-3p和miR-137的表達(圖4F)。隨后，我們研究了miR-337-3p和miR-137是否負調(diào)控MIR210HG的表達，發(fā)現(xiàn)過表達miR-337-3p/137會下調(diào)MIR210HG的表達，而敲除miR-337-3p/137會上調(diào)MIR210HG的表達(圖4G)。 可以推斷基因調(diào)控事件之間的關(guān)系。國自然課題設(shè)計實驗

二、INPP4B增強pik3a突變ER+乳腺*和乳腺上皮細胞增殖

GFP-INPP4B在MCF-7和T47D ER+乳腺*細胞中表達，這兩種細胞分別有PIK3CAE545K和PIK3CAH1047R高活化突變.*細胞進行非錨定細胞生長的能力是細胞轉(zhuǎn)化的一個標志。GFP-INPP4B***增加了軟瓊脂中MCF-7細胞集落大小(2.1倍)和T47D細胞集落大小(1.8倍)，但對集落數(shù)量沒有影響(圖2a-c)。與細胞增殖增加相一致。與載體對照相比，GFP-INPP4B在血清剝奪后增強了MCF-7細胞的增殖(1.7倍)(圖2d, e)，但不影響在含血清培養(yǎng)基中生長的MCF-7細胞的增殖。過表達GFPINPP4B的MCF-7細胞中，egf刺激的AKTS473和AKTT308磷酸化水平略有降低(圖2f-h)。 克羅恩課題協(xié)同創(chuàng)作英拜提供生物醫(yī)學課題外包服務(wù)。

測序類型：

轉(zhuǎn)錄組測序、small RNA測序、TRF測序、lncRNA測序、circRNA測序、單細胞測序、全轉(zhuǎn)錄組測序、DNA甲基化測序、微生物多樣性測序（16s/18s/ITS）、外顯子測序、人全基因組測序、chip-seq

高通量測序平臺illuminaHiseq2500、IlluminaHiseq4000、Miseq二代測序儀器……

分子生物學平臺DNA提取、載體構(gòu)建、SNP檢測、甲基化檢測、熒光定量PCR、CHIP、RIP、CHOP、FISH、雙熒光素報告基因?qū)嶒灐NApull-down、WB

細胞生物學平臺細胞培養(yǎng)（細胞株、原代培養(yǎng)）、細胞爬片

PTEN是一種**抑制因子，調(diào)節(jié)多種細胞功能，包括***，PI3K/AKT信號通路是PTEN通過其磷酸酶活性靶向的**重要通路之一。因此，推測PI3K/AKT信號通路可能參與CRC細胞來源的外泌體miR-934誘導(dǎo)M2巨噬細胞極化。WB結(jié)果顯示過表達PTEN可以部分減弱miR-934和HCT-8細胞源外泌體對p-AKT和p-PI3K表達的增強作用，而沉默PTEN則相反（Fig.5k）。更重要的是，當與HCT-8細胞來源的外泌體和PI3K抑制劑(LY294002)共培養(yǎng)時，PMA處理的THP-1細胞中p-AKT和M2標記物(CD206、arginase-1和CD163)的表達下調(diào)（Fig.5l,m）。綜上所述，CRC細胞來源的外泌體miR-934可以通過下調(diào)PTEN表達和***PI3K/AKT信號通路誘導(dǎo)M2巨噬細胞極化。Pex衍生的CD44v6/C1QBP復(fù)合物介導(dǎo)了Pex對肝纖維化和PDAC肝轉(zhuǎn)移的積極作用。

4）M1-BMDMs來源的外泌體在體內(nèi)阻礙脊髓損傷后的運動功能恢復(fù)和破壞BSCB

為了進一步研究巨噬細胞在SCI微環(huán)境中的作用及其對血管內(nèi)皮細胞的潛在影響，我們提取并鑒定了來自M1-BMDMs(M1-Exos)的外泌體。脊髓損傷后立即注射外泌體，在指定時間進行一系列行為評估(圖4A)。BMS行為分析表明，M1-Exos注射可導(dǎo)致脊髓損傷后后肢運動功能評分降低(圖4B)。足跡分析、電生理測試和游泳測試顯示了類似的結(jié)果，M1-Exos處理導(dǎo)致更短的步幅(圖4C)，更低的MEPs振幅(圖4D)，更傾斜的身體角度，更下垂的尾巴(圖4E)。EB外滲實驗顯示，M1-Exos處理組有更多EB染料滲漏到間隙中(圖4F)，TEM下血管TJs的電子密度遠低于PBS組，兩內(nèi)皮細胞之間的間隙也更明顯(圖4G)。此外，注射M1-Exos后，脊髓病變中血管ZO-1的熒光強度***減弱(圖4H)；TJs蛋白表達水平也明顯下調(diào)(圖4I)。我們還發(fā)現(xiàn)，M1-Exos給藥后，病變區(qū)域更多的α-SMA與CD31共存(圖4J)；I型膠原、III型膠原和α-SMA蛋白水平上調(diào)，CD31表達降低(圖4K)。以上結(jié)果表明，M1-Exos可能誘發(fā)EndoMT加重脊髓損傷后BSCB的損傷，阻礙運動功能恢復(fù)。 IGF-1信號在Pex誘導(dǎo)的肝纖維化中起重要作用。CRO課題整包服務(wù)

致力于醫(yī)學相關(guān)領(lǐng)域的實驗技術(shù)服務(wù)和相關(guān)生物醫(yī)學課題的研究。國自然課題設(shè)計實驗

病理上，脊髓損傷(SCI)后血脊髓屏障(BSCB)破裂導(dǎo)致大量周圍巨噬細胞浸潤到損傷區(qū)域，并在新生血管周圍聚集。M1極化的巨噬細胞在SCI過程中起著至關(guān)重要的作用。***小編給大家介紹于2020年3月發(fā)表在影響因子為9.986的“Redox Biology”上的文章“Exosomal miR-155 from M1-polarized macrophages promotes EndoMT and impairs mitochondrial function via activating NF-κB signaling pathway in vascular endothelial cells after traumatic spinal cord injury”。本研究旨在探討M1極化的骨髓源性巨噬細胞(M1-BMDMs)對血管內(nèi)皮細胞的影響及其機制。在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)SCI后巨噬細胞浸潤可通過傳遞外泌體miR-155促進血管內(nèi)皮細胞內(nèi)內(nèi)膜結(jié)構(gòu)和損害線粒體功能，從而加重BSCB完整性破壞，miR-155隨后通過抑制SOCS6誘導(dǎo)的p65降解，***NF-κB通路。國自然課題設(shè)計實驗

公司特色是以各式高通量二代測序為基礎(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細胞實驗平臺，提供課題整體設(shè)計外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實驗平臺落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實驗平臺開放參觀，客戶可隨時參觀實驗并參與實驗課題的進度，保證您的實驗是在您的指導(dǎo)下完成。

1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計的課題均具有后續(xù)實驗課題的延展性，為您的標書奠定較好的基礎(chǔ)

2.標書申請：提供標書課題設(shè)計、撰寫，標書部分基礎(chǔ)實驗的開展，設(shè)計的標書均符合科研前沿熱點，中標率很高。

3.提供熱點**文獻技術(shù)支持，探討科研前沿熱點研究：trfRNA，DNA/RNA甲基化，外泌體，自噬，WNT等相關(guān)研究

4.二代測序：轉(zhuǎn)錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序

5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片

6.表觀遺傳實驗：DNA甲基化實驗（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實驗

7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學實驗