MAD2和p31conmet調(diào)節(jié)SAC的持續(xù)時間，反過來，也調(diào)節(jié)有絲分裂的持續(xù)時間。這促使我們研究RIT1是否通過與MAD2和p31conmet的直接關(guān)聯(lián)來影響SAC。通過RNAi或crispr介導(dǎo)的敲除去除RIT1可延長有絲分裂進程(圖3A和S3A S3E)。此外，SAC的藥理抑制挽救了RIT1耗盡的作用，表明RIT1以SAC依賴的方式影響有絲分裂。此外，RIT1的缺失增加了染色體分離錯誤的發(fā)生率(圖3B)，這表明RIT1不僅對有絲分裂的及時進展至關(guān)重要，而且RIT1蛋白水平的失調(diào)也破壞了正常的SAC功能。LZTR1或RIT1M90I表達的缺失加速了異步生長細胞的有絲分裂進程，這一效應(yīng)依賴于PM釋放RIT1(圖3C、S3H和S3I)。同樣，RIT1 WT或M90I的過表達部分覆蓋了藥物誘導(dǎo)的SAC反應(yīng)(圖3D和S3J)。RIT1M90I的異位表達以依賴MAD2-和p31come結(jié)合的方式***增加了有絲分裂錯誤的發(fā)生率，包括滯后染色體和橋接染色體(圖3G和S3O)。因此，我們觀察到在表達RIT1M90I的細胞中非整倍體率增加，但在表達不能結(jié)合MAD2/p31conmet的突變體的細胞中卻沒有(圖3H和S3P)。這些結(jié)果表明，RIT1水平的增加會導(dǎo)致與MAD2和p31conmet的直接相互作用，從而降低有絲分裂的保真度。醫(yī)學(xué)整體課題外包服務(wù)。動物模型構(gòu)建服務(wù)
因為CXCL13是一種趨化劑，可以促進表達CXCR5的細胞趨化，使用IHC染色評估其在CRC中的表達，結(jié)果顯示CXCR-5在結(jié)直腸*組織中的染色強于正常組織，說明M2極化巨噬細胞分泌的CXCL13主要作用于CRC細胞（Fig. 7d）。PMA預(yù)處理后的THP-1細胞轉(zhuǎn)染miR-934 mimics，并與加入anti-CXCL13抗體或IgG的SW480細胞或RKO細胞共培養(yǎng)。此外，上述TPH-1細胞液與敲除CXCR5的細胞共培養(yǎng)。體外transwell實驗顯示，在與miR-934過表達PMA處理的THP-1細胞的CM共培養(yǎng)組中，anti-CXCL13抗體抑制了CRC細胞的遷移和侵襲；轉(zhuǎn)染了shCXCR5的SW480和RKO細胞與miR-934過表達PMA處理的THP-1細胞共培養(yǎng)時，遷移和侵襲能力降低（Fig. 7e, f）。此外，小鼠體內(nèi)肝轉(zhuǎn)移檢測表明，與對照組相比，用anti-CXCL13抗體或敲除CXCR5的CRC細胞的肝轉(zhuǎn)移菌落減少（Fig. 7g–i）。基質(zhì)蛋白酶動物建模模型實驗的整體服務(wù)。
RASA1的上調(diào)消除了外泌體miR-335-5p對CRC細胞遷移和侵襲的促進作用
為了進一步確定RASA1在CRC細胞中的潛在功能，使用慢病毒載體建立了過表達RASA1的穩(wěn)定SW480細胞系。如圖6A和6B所示，在用表達RASA1的慢病毒載體（lenti-RASA1；SW480-RASA1）轉(zhuǎn)染的SW480細胞中，實時PCR和蛋白質(zhì)印跡驗證了RASA1mRNA和蛋白質(zhì)的過表達。在過表達RASA1的細胞中，Ras和波形蛋白的蛋白質(zhì)水平顯著下調(diào)，而E-鈣粘蛋白上調(diào)。此外，與SW480載體對照相比，SW480-RASA1的遷移和侵襲能力顯著降低
編碼PI3Kαp110α亞基的PIK3CA在多達40%的乳腺*中發(fā)生突變，**常見的是雌***受體陽性(ER+)**。突變的PIK3CA在校正ER陽性等有利風(fēng)險變量時并不是預(yù)后的**標(biāo)記物，但它是改善晚期ER+乳腺*內(nèi)分泌和PI3K聯(lián)合***應(yīng)答的預(yù)測生物標(biāo)記物。有趣的是，與PTEN等其他PI3K通路改變的**相比，pikca突變ER+乳腺*顯示出極少的AKT***和對AKT信號的依賴。
NPP4B抑制AKT信號，并在三陰性(ER/PR/HER2)和基底樣乳腺*中表現(xiàn)出**抑制活性。此外，INPP4B蛋白在黑色素瘤、卵巢*和前列腺*中表達減少。在小鼠模型中，Inpp4b消融與Tp53/Brca1缺失共同增加了乳腺**外顯率，并與Pten雜合子缺失共同促進體內(nèi)甲狀腺**的發(fā)生和轉(zhuǎn)移。值得注意的是，INPP4B通過降解PI(3,4)P2，抑制早期核內(nèi)體的局部AKT2信號通路和EGFR降解。 按照實驗設(shè)計路線和實驗結(jié)果進行文章的構(gòu)思與潤色。
四、在體內(nèi)和體外，NUPs的上調(diào)導(dǎo)致TDP-43/TBPH定位錯誤和聚集
為了檢測Nup上調(diào)對Tbph (Drosophila TDP-43)病理的影響，我們建立了一個位點特異性Nup62過表達(Nup62 OE)蠅線，并對內(nèi)源性Tbph進行染色。在eGFP對照(以下稱為對照)表達的果蠅幼蟲VNC中，Tbph的分布以細胞核為主，而Nup62 OE幼蟲VNC***改變了Tbph的定位，出現(xiàn)細胞質(zhì)聚集(圖4A)。定量分析顯示，與對照組相比，Nup62 OE果蠅幼蟲或成年大腦中斑點Tbph***增加(圖4B）。與對照組相比，Nup62 OE vnc的核Tbph強度***降低(圖4C)。此外，核細胞質(zhì)(N/C)分割進一步證實，與對照組相比，Nup62 OE動物的Tbph N/C比值***降低(圖4D和E)，表明Nup62的上調(diào)改變了Tbph在體內(nèi)的亞細胞定位。Nup62表達引起的Tbph的錯位和聚集也讓我們檢測了Nup62表達是否影響Tbph的溶解度。 進一步了解阻斷atm依賴的PTEN磷酸化如何影響細胞對基因毒性損傷的反應(yīng)。修復(fù)甲基化
TIMEOR是***個基于 Web 的自適應(yīng)時間序列多組學(xué)管道方法。動物模型構(gòu)建服務(wù)
6）DRD2通過下調(diào)DDX5和eEF1A2來抑制NF-κB通路的***和**的發(fā)生
DRD2異位表達***抑制了p65和NF-κB靶基因IL-10的mRNA表達(圖6A)，表明在沒有配體***的情況下，DRD2是NF-κB通路的負調(diào)控因子。除了結(jié)合***β-arrestin2外，DRD2還可能通過其他方式抑制NF-κB信號通路。采用Co-IP法分離可能的結(jié)合蛋白，并采用質(zhì)譜法進行蛋白鑒定。MDA-MB231和BT549細胞的所有結(jié)合蛋白中，DDX5、eEF1A2和ICAM-1均被異位表達的DRD2下調(diào)(圖6B-C)。根據(jù)以往的研究，DDX5和eEF1A2是幾種**中的兩種致*基因。WB也證實了DDX5和eEF1A2蛋白水平下調(diào)(圖6D)。在293T和MDA-MB231中，通過Co-IP和IB實驗證實了DRD2、DDX5和eEF1A2的結(jié)合(圖6E)，表明這三種蛋白形成了一個復(fù)合物。根據(jù)以往的研究，DDX5可以結(jié)合p50，并協(xié)助IκB釋放p50。本研究還揭示了293T和MDA-MB231中DDX5與p50的結(jié)合(圖6E)。 動物模型構(gòu)建服務(wù)
公司特色是以各式高通量二代測序為基礎(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細胞實驗平臺，提供課題整體設(shè)計外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實驗平臺落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實驗平臺開放參觀，客戶可隨時參觀實驗并參與實驗課題的進度，保證您的實驗是在您的指導(dǎo)下完成。
1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計的課題均具有后續(xù)實驗課題的延展性，為您的標(biāo)書奠定較好的基礎(chǔ)
2.標(biāo)書申請：提供標(biāo)書課題設(shè)計、撰寫，標(biāo)書部分基礎(chǔ)實驗的開展，設(shè)計的標(biāo)書均符合科研前沿?zé)狳c，中標(biāo)率很高。
3.提供熱點**文獻技術(shù)支持，探討科研前沿?zé)狳c研究：trfRNA，DNA/RNA甲基化，外泌體，自噬，WNT等相關(guān)研究
4.二代測序：轉(zhuǎn)錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序
5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實驗：DNA甲基化實驗（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實驗
7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學(xué)實驗