NPC-EVs通過轉染miR-144增強體外和體內HUVECs的血管樣管形成
我們評估NPC-EVs來源的miR-144對HUVECs血管樣管結構的影響，以闡明**分泌的miR-144在血管生成中的作用。基于基質膠的體外血管生成實驗(圖4A)表明，miR-144模擬物處理的鼻咽*細胞EVs***促進了體外HUVECs的血管樣管形成，這與miR-144抑制劑處理的鼻咽*細胞EVs的結果形成了鮮明對比。接下來，為了進一步證明NPC-EVs來源的miR-144的促血管生成活性，我們在裸鼠中進行了體內Matrigel實驗，以鑒定移植凝膠栓中新形成的血管(圖4B和4C)。我們發現，來自miR-144模擬處理的鼻咽*細胞的EVs增強了凝膠塞中新形成的增強血管，而來自miR-144抑制劑處理的鼻咽*細胞的EVs則降低了血管，這與體外基質凝膠血管生成實驗的結果一致。基于上述結果，NPC-EVs來源的miR-144增強了體外和體內HUVECs的血管樣管形成。 血清或尿液中尿酸濃度的升高與痛風腎臟和血管疾病密切相關。生物學科研分子生物學實驗
Circ-0004872(本研究稱為““circMAPK1”)來自MAPK1基因的第2-4個外顯子，形成一個490 nt的重疊環狀轉錄本(圖1e)。Sanger測序證實了擴增的circMAPK1的頭尾剪接(圖1f)。接下來，我們研究了circMAPK1在GC細胞系中的表達水平。如圖1g所示，與正常的胃粘膜上皮細胞系相比，培養的GC細胞系中circMAPK1表達***下調。另外，circMAPK1*從cDNA中擴增，而不是從gDNA中擴增(圖1h)，說明circMAPK1的環結構是由back-splicing產生的。然后我們進一步評估了circMAPK1的穩定性和定位。經過放線菌素D處理后，circMAPK1的半衰期明顯長于線性MAPK1(圖1i)。與MAPK1 mRNA的線性形式相比，circMAPK1對RNase R的降解具有抗性(圖1j)。隨后的細胞組分qRT-PCR分析(圖1k)和熒光原位雜交分析(圖1l)顯示，circMAPK1主要定位于細胞質而不是細胞核。科研服務兩年METTL14上調促進胰腺*生長和轉移。
如圖5所示，E8中的d-flow改變了白細胞流量和炎癥標志物(Il1β、Il6、Ccl2和Ccl3);ECM調節(Adamts4, Lamb1, Timp3，和Timp4);血管調節(Nos3, Ptgs2，和Edn1);和脂質代謝(Tm6sf2、Lsr和Mgll)，并與E2的s-flow進行比較(圖5A-5D)。這些結果表明，d-flow***了致***的內皮反應，同時通過改變轉錄和染色質可及性水平上的基因表達來抑制抗***通路。
三、體內血流依賴TF結合基序的鑒定
使用Signac和ChromVar軟件包通過我們的scATAC-seq數據集來識別流敏感的TF結合基序(圖6)。在每個內皮聚類(E1- E8)中識別出前20個TF結合基序，并繪制成熱圖(圖6A)。圖6B和6C顯示了TF結合基序和它們被發現的各自的細胞簇。
3.IRES序列
由于circRNA是共價閉環分子，沒有游離末端，因此circRNA的翻譯必須使用一種非經典的啟動機制，即不依賴5’-帽子的翻譯啟動。這種起始途徑往往通過IRES（內部核糖體進入位點）驅動，IRES是具有特殊二級結構的短RN**段。在病毒中發現并證明了大量的IRES元件，在一些特殊情況下，哺乳動物內源性的IRES元件也可以起始翻譯。作者團隊也曾針對circRNA中IRES元件進行了系統性的篩選驗證。數據庫也使用了所有可用的IRES信息作為支持circRNA翻譯的證據。 代謝變化被認為是腸病**重要的特征之一。
snoRNAs的生物學功能
snoRNAs與核糖體RNA加工
在核糖體RNA的加工過程中，核糖體RNA的2′-O–甲基化由C/DboxsnoRNAs來負責。C/DboxsnoRNAs包含有兩個短的序列元件，即位于5"末端的boxC(RUGAUGAR**A或G)和3"末端的boxD(CUGA)。多數boxC/DsnoRNAs基因的5"和3"末端都有4-5nt的反向重復序列，可以形成較為穩定的短莖結構，這一結構在snoRNAs的生物合成和核仁定位過程中起關鍵作用[7]。核糖體RNA的假尿嘧啶修飾主要是由H/ACAboxsnoRNAs來完成的。H/ACAboxsnoRNAs具有保守的“發夾-鉸鏈-發夾-尾”的二級結構。boxH(ANANNA，N**任一核苷酸)位于單鏈形式的鉸鏈區，ACA則一般位于3"末端上游3個核苷酸處。H/ACAboxsnoRNAs的指導序列位于單個或者兩個發夾內部的“假尿嘧啶化泡”內，它們可以與靶RNA上的被修飾位點兩翼序列各形成4-8nt的互補配對。 結腸炎也會導致促炎細胞因子或趨化因子的增加。胞質科研實驗外包
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4、miR-208b直接靶向和抑制CD4+T細胞中PDCD4的表達
為了進一步探究miR-208b的分子機制，探究了其下游靶基因機制，使用生信預測了其靶基因，**終挑選到PDCD4（圖5A）。熒光素酶進一步證實了miR-208b和PDCD4之間的結合（圖5C-D）。研究發現，T細胞中PDCD4的表達在SW480外泌體處理組***下降，而這個抑制作用在SW480-OXA組更加明顯，PCD表達在miR-208b缺失組則***升高（圖5E）。此外，加入miR-208bmimics后，PDCD4蛋白***降低，而抑制miR-208b后，PDCD4蛋白的表達相對增強,此外，PDCD4在mRNA水平的表達沒有明顯變化（圖5F）。然后，評估了miR-208b對CD4+T細胞擴增的影響。研究表明，轉染miR-208bmimics***增強了Treg的擴增，而抑制miR-208b水平則抑制了Treg的擴增（圖5G-H）。這些結果表明miR-208b直接靶向抑制PDCD4的表達，導致Treg分化。 生物學科研分子生物學實驗
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