現(xiàn)今研究表明tRNA-derivedsmallnoncodingRNAs（sncRNAs）主要分為兩類：tRNAhalves(tiRNAs)和fragments(tRFs)。前者在人類實體**中的的生物學功能吸引了越來越多的關(guān)注，但是其在**發(fā)生中的生物學機制仍知之甚少。tiRNAs和剪切相關(guān)蛋白之間的相關(guān)作用更是為未可知。本研究***發(fā)現(xiàn)一個5’-tRNAhalves，即tiRNA-Gly通過與RBM17結(jié)合誘導可變剪切進而促進**狀甲狀腺*（PTC）的增殖和遷移。本文于2021年7月發(fā)表在影響因子7.068的《JournalofExperimentalandClinicalCancerResearch》期刊上。m6A表達水平較高的**患者淋巴轉(zhuǎn)移***增加。細胞表面標志物科研中標率高
2、miR-138-5p介導*細胞誘導的巨噬細胞KDM6B表達抑制構(gòu)建了miR-138-5p過表達的乳腺*細胞系，取其培養(yǎng)基與巨噬細胞共培養(yǎng)，結(jié)果巨噬細胞中miR-138-5p表達***上調(diào)，同時KDM6B的表達***下降。證實miR-138-5p介導*細胞誘導的巨噬細胞KDM6B表達抑制。
3、*細胞來源的外泌體miR-138-5p下調(diào)KDM6B的表達
隨后為了判定上述巨噬細胞中miR-138-5p表達上調(diào)的原因，檢測了巨噬細胞中原代(pri-)和前體(pre-)miR-138的水平。結(jié)果顯示共培養(yǎng)和對照組間原代和前體miR-138的水平?jīng)]有差異，表明miR-138-5p是外源供應的（圖1A）。此外，使用RNaseA處理miR-138-5p水平不變，使用TritonX-100其水平***下降。提示miR-138-5p被膜狀結(jié)構(gòu)包裹（圖1B）。進一步分析表明使用外泌體抑制劑GW4869處理組和外泌體刪除組的培養(yǎng)基中miR-138-5p的表達***下降（圖1C）。表明外泌體來源于乳腺*細胞。 江蘇分子毒理通路發(fā)現(xiàn)者科研上海英拜生物設(shè)有專業(yè)的武漢技術(shù)中心。
miR-144在鼻咽*細胞釋放的EVs中高度富集
接下來，為了確定**分泌的miR-144是否具有通過EVs細胞外通信影響**-微環(huán)境串擾的能力，我們首先從C666-1、SUNE1和NP69細胞中分離EVs。透射電子顯微鏡(TEM)觀察發(fā)現(xiàn)，納米顆粒的直徑為30~100nm，每個囊泡呈杯狀(圖2A)。免疫印跡顯示，與相應的細胞裂解液相比，這些來自C666-1、SUNE1和NP69細胞的納米顆粒中存在常見的EVs特異性標記物，包括CD9、CD63和TSG101，而內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜蛋白calnexin明顯缺失(圖2B)。納米顆粒示蹤分析(NTA)進一步顯示EV的平均直徑為94.1nm(C666-1細胞)、90.5nm(SUNE1細胞)和68.5nm(NP69細胞)(圖2C)。此外，我們檢測了C666-1、SUNE1和NP69細胞衍生EVs的表面電荷(圖2D)。添加RNase對這三種細胞系的EVs中miR-144的表達沒有影響，而TritonX-100處理的細胞中miR-144的表達明顯降低，說明細胞膜對miR-144的表達具有保護作用(圖2E)。結(jié)果表明，這三種細胞系的EVs具有穩(wěn)定的膜態(tài)，對RNA具有保護作用。通過qRT-PCR檢測EVs中miR-144的表達，結(jié)果顯示miR-144在鼻咽*細胞EVs中表達高水平(圖2F)。這些發(fā)現(xiàn)為miR-144在npc細胞來源的ev中上調(diào)提供了證據(jù)。
miR-335-5p通過靶向RASA1促進CRC細胞的遷移和侵襲
作者使用TargetScan、miRDB和miRTarBasemiR-335-5p三種生物信息學算法預測潛在的靶基因。從TCGA下載的數(shù)據(jù)分析表明，RASA1的表達與CRC患者的miR-335-5p水平顯著相關(guān)。通過生物信息學分析確定的RASA13'UTR中的假定的miR-335-5p靶位點。使用野生型(WT)RASA13'UTR在SW480細胞中進行的熒光素酶報告實驗，結(jié)果表明轉(zhuǎn)染miR-335-5p模擬物后熒光素酶活性顯著降低。相比之下，突變(mut)RASA1序列的報告基因的熒光素酶活性不受miR-335-5p的影響，表明miR-335-5p直接靶向RASA13'UTR的特定區(qū)域。為了確定miR-335-5p對RASA1的影響，使用Lipofectamine3000將miR-335-5p模擬物瞬時轉(zhuǎn)染到SW480和SW620細胞中。用定量逆轉(zhuǎn)錄酶PCR(qRT-PCR)和蛋白質(zhì)印跡進行評估表明mRNARASA1和蛋白質(zhì)水平在模擬轉(zhuǎn)染細胞中顯著下調(diào)。此外，miR-335-5p轉(zhuǎn)染增加了Ras蛋白的表達。miR-335-5p的上調(diào)可能伴隨著EMT***，如SW480和SW620細胞中波形蛋白表達增加和E-鈣粘蛋白表達降低所證明的。此外，miR-335-5p水平升高顯著促進遷移和侵襲，而用miR-335-5p抑制劑抑制miR-335-5p顯著抑制CRC細胞的遷移和侵襲。 增加乳酸桿菌水平導致尿酸水平下降。
6）FPN蛋白在肺*細胞中的穩(wěn)定性需要USP35
USP35屬于DUBs家族，在控制各種蛋白質(zhì)的Ub依賴性降解中起關(guān)鍵作用。此外，F(xiàn)PN泛素化和隨后的內(nèi)吞作用導致鐵超載和鐵死亡。因此，我們研究了USP35是否通過影響其蛋白質(zhì)穩(wěn)定性來調(diào)節(jié)FPN表達。如圖8A所示，USP35敲除增加，而USP35過表達降低泛素化FPN水平。用MG132蛋白酶體抑制劑***后，shUSP35***細胞的全部或膜裂解物中FPN水平的降低被阻止(圖8B)。隨后，我們檢查了USP35是否是FPN的直接結(jié)合伙伴。IP分析的數(shù)據(jù)揭示了內(nèi)源性USP35和FPN之間的聯(lián)系(圖8C)。總之，這些數(shù)據(jù)表明USP35可以直接與FPN相互作用，并作為deubiquitinase發(fā)揮作用，以保持其蛋白質(zhì)穩(wěn)定性。 英拜有一支高精尖的團隊。豐度科研
專注于生命科學內(nèi)的前沿研究。細胞表面標志物科研中標率高
4）circPDE4B促進了RIC8A和MID1之間的三元配合物的形成，促進了RIC8A的降解
我們試圖鑒定參與RIC8A蛋白酶體降解的E3連接酶。有趣的是，MS結(jié)果顯示circPDE4B也結(jié)合了兩個E3連接酶，包括RNF2和MID1。然而，由于RNF2定位于細胞核內(nèi)，我們選擇MID1進行進一步研究。實際上，通過免疫沉淀分析，MID1被發(fā)現(xiàn)與RIC8A結(jié)合(圖4A)。RIC8A和MID1的免疫熒光染色也證實了它們在HCs***定位(圖4B)。IP結(jié)果表明，MID1敲低有效地削弱了RIC8A和MID1過表達的泛素化作用，增加了RIC8A泛素化作用(圖4C)。Co-IP實驗也顯示，與對照組相比，circPDE4B敲低細胞中RIC8A和MID1的結(jié)合減少，而過表達circPDE4B則有相反的作用(圖4D)。 細胞表面標志物科研中標率高
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5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實驗：DNA甲基化實驗（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實驗
7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學實驗