下調(diào)MIR210HG可抑制子宮內(nèi)膜*細胞的增殖、遷移和侵襲
我們研究了MIR210HG在子宮內(nèi)膜*細胞中的生物學功能。我們發(fā)現(xiàn)MIR210HG的下調(diào)有效地降低了Ishikawa和HEC-1A細胞的增殖(圖2A和2B)。采用創(chuàng)面愈合實驗和Transwell實驗研究MIR210HG對**遷移和侵襲的影響。與sh陰性對照組(NC)相比，轉(zhuǎn)染sh-MIR210HG的細胞遷移和侵襲減少(圖2C和2D)。流式細胞術(shù)分析細胞周期分布(圖2E)。以上結(jié)果提示MIR210HG在子宮內(nèi)膜*中起致*基因的作用。
MIR210HG可能參與了由lncRNA-miRNA-mRNA調(diào)控網(wǎng)絡介導的子宮內(nèi)膜惡性生物學行為
利用TCGA數(shù)據(jù)集對子宮內(nèi)膜*樣本進行基因**富集分析，探索MIR210HG參與調(diào)控子宮內(nèi)膜*的生物學通路。MIR210HG的表達與TGF-b和Wnt通路***相關(guān)，而Smad3基因在這些關(guān)聯(lián)中發(fā)揮了重要作用(圖3A)。搜索工具STRING的分析也顯示SMAD3和HMGA2是強相關(guān)的(圖3B)。我們探究HMGA2是否為MIR210HG的下游基因，發(fā)現(xiàn)MIR210HG下調(diào)后HMGA2蛋白表達水平降低。相反，當MIR210HG高表達時，HMGA2的表達***增加(圖3C)。這表明MIR210HG可能通過上調(diào)HMGA2的表達來促進子宮內(nèi)膜*細胞的惡性生物學行為。 肺*是**常診斷的**之一也是大多數(shù)國家**死亡的主要原因。circRNA標書地區(qū)科學基金
三、INPP4B促進晚期核內(nèi)體上PI(3,4)P2到PI(3)P的轉(zhuǎn)化
使用了幾種基于無偏性蛋白質(zhì)組學的技術(shù)來表征INPP4B在pik3a突變ER+乳腺*中的下游信號功能。首先，利用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)進行全細胞蛋白質(zhì)組學研究，確定GFP-INPP4B與gfp載體表達MCF-7細胞中蛋白水平的差異(2倍)。功能注釋分析顯示，inpp4b過表達細胞中上調(diào)的蛋白與內(nèi)溶酶體系統(tǒng)密切相關(guān)，內(nèi)溶酶體系統(tǒng)是介導細胞外受體和貨物內(nèi)化和降解的囊泡運輸途徑(圖3a)。免疫沉淀質(zhì)譜(IP-MS)對受EGF刺激的MCF-7細胞進行GFP-INPP4B蛋白復合物的分析，以***I類PI3K信號。從該分析中鑒定出的**富集的結(jié)合伙伴是RAB7A (Rab7)，這是一種定位于晚期核內(nèi)體的小GTPase(圖3b)。GFP-INPP4B與內(nèi)源性Rab7的共免疫共沉淀證實了INPP4B與Rab7的結(jié)合(圖3c)。通過免疫電鏡進一步分析INPP4B定位于晚期核內(nèi)體，結(jié)果顯示GFPINPP4B定位于晚期核內(nèi)體的限制膜和內(nèi)膜(圖3d)，之前的研究已經(jīng)確定了PI(3,4)P2和PI(3)P。 rip標書江蘇檢測circNDUFB2是否作為miRNA海綿調(diào)節(jié)NSCLC的靶標.
4）DRD2重編程的Mφ誘導**細胞的焦亡
如HE所示，來自小鼠模型的**承載DRD2顯示**細胞死亡增加(圖4A)。在免疫組化染色中，表達DRD2的4T1**樣本中pMLKL表達較高(圖4A)。根據(jù)TUNEL實驗，DRD2也促進了體內(nèi)細胞凋亡(圖4B)。DRD2上調(diào)GSDME而不是GSDMD(圖4C)。在crosstalk過程中，Mφ進一步促進了DRD2轉(zhuǎn)染的BrCa細胞中GSDME的表達(圖4C)。在表達DRD2的BrCa細胞中，Mφ也能上調(diào)IL-1β(圖4C)。WB結(jié)果表明，DRD2誘導了MLKL的磷酸化，而在共培養(yǎng)過程中，MLKL被Mφ抑制(圖4D)。此外，DRD2表達***了caspase-8，而***被Mφ抑制(圖4D)。假設，DRD2可能在與Mφcrosstalk時誘發(fā)焦亡。BrCa細胞中與Mφ共培養(yǎng)時，NLRP3在表達DRD2的BrCa細胞中被觸發(fā)。***的caspase-1蛋白水解也能誘導IL-1β和IL-18的成熟(圖4D)。在共培養(yǎng)過程中，Cleavedcaspase-3表達上調(diào)(圖4D)。此外，在共培養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)表達DRD2的BrCa細胞中，GSDME的N端發(fā)生了剪切(圖4D)。為了確定是否由M1Mφ引起焦亡，我們使用了LPS誘導的M1Mφ培養(yǎng)基，結(jié)果表明，在表達DRD2的BrCa細胞中，M1Mφ*觸發(fā)NLRP3組裝并剪切GSDME(圖4E)。以上結(jié)果提示，M1Mφ以DRD2依賴的方式觸發(fā)BrCa細胞的焦亡。
判定上述巨噬細胞中miR-138-5p表達上調(diào)的原因，檢測了巨噬細胞中原代(pri-)和前體(pre-)miR-138的水平。結(jié)果顯示共培養(yǎng)和對照組間原代和前體miR-138的水平?jīng)]有差異，表明miR-138-5p是外源供應的（圖1A）。此外，使用RNaseA處理miR-138-5p水平不變，使用TritonX-100其水平***下降。提示miR-138-5p被膜狀結(jié)構(gòu)包裹（圖1B）。進一步分析表明使用外泌體抑制劑GW4869處理組和外泌體刪除組的培養(yǎng)基中miR-138-5p的表達***下降（圖1C）。表明外泌體來源于乳腺*細胞。類似的，外泌體抑制劑GW4869處理導致共培養(yǎng)的巨噬細胞中miR-138-5p的水平***下降，而KDM6B的水平***上升（圖1D-E）。乳腺*細胞外泌體增加TPH-1細胞中miR-138-5p的表達但***KDM6B的表達，但這種作用被miR-138-5p抑制劑處理廢除（圖3F-G）。轉(zhuǎn)染miR-138-5pmimic的乳腺*細胞增加了外泌體miR-138-5p的水平（圖3H）。過表達miR-138-5p的乳腺*細胞外泌體增加了miR-138-5p水平，***了THP-1細胞中KDM6B的表達（圖3I-J）。總之，這些結(jié)果表明，*細胞分泌的外泌體miR-138-5p被傳遞到巨噬細胞中。 RNA pull-down實驗探索circNDUFB2是否通過與蛋白質(zhì)相互作用發(fā)揮功能。
此外，生存分析顯示，EV中CD44v6和C1QBP高表達的患者的生存結(jié)局明顯較差(圖7F)。循環(huán)外泌體的隨訪數(shù)據(jù)也顯示了一致的結(jié)果。PDAC患者中循環(huán)外泌體CD44v6和C1QBP的表達明顯高于健康對照組(圖7G)， PDAC伴有肝轉(zhuǎn)移的患者中循環(huán)外泌體CD44v6和C1QBP的表達明顯高于無肝轉(zhuǎn)移的患者(圖7G)。免疫電子顯微鏡顯示，CD44v6和C1QBP在PDAC患者的循環(huán)外泌體***表達(圖7H)。高循環(huán)外泌體表達CD44v6和C1QBP的患者比其他患者更容易發(fā)生肝轉(zhuǎn)移 (圖7I)。然而，高表達循環(huán)外泌體CD44v6和C1QBP的患者生存率明顯較差(圖7J)。總之，我們的研究結(jié)果證實了CD44v6和C1QBP在組織源性EV和循環(huán)外泌體中的表達可以預測PDAC患者的預后和肝轉(zhuǎn)移。
結(jié)論：我們揭示了原代PDAC細胞和HSCs之間通過PDAC來源的外泌體進行遠距離的細胞通信。此外，Pex通過促進肝纖維化微環(huán)境的形成來指示肝特異性轉(zhuǎn)移。更重要的是，我們發(fā)現(xiàn)外泌體CD44v6/C1QBP復合物傳遞到HSC的質(zhì)膜上誘導IGF-1信號通路的***。外泌體CD44v6和C1QBP可能是預測PDAC患者預后的有前途的生物標志物，也是***PDAC肝轉(zhuǎn)移的潛在靶點。 在786-O細胞中穩(wěn)定轉(zhuǎn)染靶向circSDHC的shRNA.壞死標書省自然科學基金
circNDUFB2可能在NSCLC的進展中起***作用。circRNA標書地區(qū)科學基金
細胞周期蛋白依賴性激酶4和6(CDK4/6)的藥理學抑制劑是***受體陽性乳腺*的獲批***藥物，目前正在其他**類型的數(shù)百項臨床試驗中進行評價。這些抑制劑的臨床成功在很大程度上歸因于定義明確的**內(nèi)在細胞抑制機制，而其作為免疫調(diào)節(jié)劑的新作用知之甚少。本研究利用整合的表觀基因組、轉(zhuǎn)錄組學和蛋白質(zhì)組學分析，證明了CDK4/6抑制劑在促進免疫T細胞記憶的表型和功能獲得中的新作用。本文的機制見解拓寬了CDK4/6抑制劑作為增強抗**T細胞免疫的臨床工具的前瞻性效用。本研究于2021年5月14日發(fā)表在《Cancer Discovery》IF:29.497期刊上。circRNA標書地區(qū)科學基金
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