浙江tiRNA贈送提供技術路線

來源: 發布時間:2021-12-12

實時熒光定量PCR技術是在普通PCR反應體系中加入熒光試劑,利用熒光信號實時檢測PCR進程,***通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR能夠專一、靈敏、快速、高重復性地精確定量起始模板濃度。tRF & tiRNA是由tRNA切割產生,長度約15-45個核苷酸的小RNA。由于tRF & tiRNA長度太短,且與tRNA序列完全重疊,不能通過傳統的實時定量PCR進行檢測。本公司通過在tRF & tiRNA兩端引入人工合成序列(adaptor), 設計特殊的跨連接位點的定量PCR引物,可以精確檢測微量樣品中tRF & tiRNA表達水平。當tRNAs被切割為tRFs&tiRNAs時,這些修飾(包括甲基化修飾、氨酰基末端修飾)會全部或部分的保留下來。浙江tiRNA贈送提供技術路線

tRFs和tiRNAs作為sncRNA執行多種生物學功能 。它們能夠作為miRNA行使RNA干擾;替換與mRNA結合的翻譯起始因子eIF4G,直接抑制蛋白的翻譯過程4,5;結合某些蛋白因子,例如YBX1,影響mRNA的穩定性;與細胞色素C相互作用,調控細胞凋亡6;在應激條件下促進應激顆粒 (Stress Granules, SGs) 的組裝 ;敏化細胞氧化應激誘導的p53***以及p53依賴的細胞死亡7;作為父**觀遺傳因子,改變子代基因轉錄級聯過程8,9。tRFs具有許多microRNA的功能特性,例如,Dicer依賴的生物發生,與Argonaute蛋白形成RISC復合體以及RNA沉默。某些收錄的miRNA直接與tRFs匹配浙江tiRNA贈送提供技術路線經過精確剪切過程產生的tRNA可分為兩類:tiRNA和tRFs。

microRNA-circRNA(lncRNA)靶基因驗證實驗環狀RNA(circRNA)和長鏈非編碼RNA(lncRNA)是一類非編碼RNA,不翻譯蛋白。但在細胞中它們能夠調控其他基因的表達變化。近年的研究表明circRNA和lncRNA分子富含microRNA結合位點,在細胞中起到miRNA海綿(miRNAsponge)的作用,進而解除miRNA對其靶基因的抑制作用,升高靶基因的表達水平,這一作用機制被稱為競爭性內源RNA(ceRNA)機制。因此,通過與疾病關聯的miRNA相互作用,circRNA和lncRNA在疾病中發揮著重要的調控作用。研究cirRNA、lncRNA的調控機制需要先找到與cirRNA、lncRNA相互作用的miRNA,而熒光素酶報告基因實驗可以用來證明miRNA與circRNA,miRNA與lncRNA的直接相互作用。

tiRNA和tRF是近期發現的一類來源于tRNA的新型小RNA,長度在16-50 nt。tiRNA是來源于成熟tRNA的半分子,血管生成素會在壓力應激下介導tRNA切割成5’-和3’-tRNA半分子,長度約30-35nt。tRFs是來源于成熟tRNA或前體tRNA的小片段,根據其在tRNA上對應的位置可進一步分為tRF-5,tRF-3, tRF-1和i-tRF等,長度約為15-30nt。據報道,tiRNA和tRF可以microRNA的方式參與RNA干擾,另外可結合諸如YBX1蛋白因子調控靶mRNA的穩定性。tiRNA和tRF不僅可作為疾病診斷的生物標志物,還具有***潛能。云序生物tiRNA測序采用獨有的﹑***的tiRNA和tRF數據庫進行分析,并額外附送miRNA表達譜分析。tRF&tiRNA是由tRNA切割產生,長度約15-45個核苷酸的小RNA。

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tiRNA測序采用tiRNA和tRF數據庫進行分析,并額外附送miRNA表達譜分析。浙江tiRNA贈送提供技術路線

tRF&tiRNA實時定量PCR

實時熒光定量PCR技術是在普通PCR反應體系中加入熒光試劑,利用熒光信號實時檢測PCR進程,***通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR能夠專一、靈敏、快速、高重復性地精確定量起始模板濃度。tRF & tiRNA是由tRNA切割產生,長度約15-45個核苷酸的小RNA。由于tRF & tiRNA長度太短,且與tRNA序列完全重疊,不能通過傳統的實時定量PCR進行檢測。本公司通過在tRF & tiRNA兩端引入人工合成序列(adaptor),設計特殊的跨連接位點的定量PCR引物,可以精確檢測微量樣品中tRF & tiRNA表達水平。 浙江tiRNA贈送提供技術路線

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