浙江課題技術(shù)指導(dǎo)

7、CFL1/PLD1軸介導(dǎo)低氧誘導(dǎo)的HCC細(xì)胞中AKT途徑的***之前的一項(xiàng)研究表明，PLD1***AKT及其下游mTOR通路促進(jìn)HCC細(xì)胞增殖、侵襲。與此一致，作者觀察到CFL1敲除降低了p-AKT水平，在HCCLM3細(xì)胞中通過PLD1恢復(fù)增強(qiáng)了p-AKT水平（圖7A，C）。此外，PLD1沉默逆轉(zhuǎn)了CFL1誘導(dǎo)的Hep3B細(xì)胞中AKT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的活化（圖7B，D）。值得注意的是，CFL1或PLD1敲除抑制了肝*細(xì)胞中缺氧誘導(dǎo)的AKT通路***和EMT過程（圖7E，F(xiàn)）。之后，進(jìn)行拯救實(shí)驗(yàn)探討HIF-1α-CFL1-PLD1軸中PLD1的功能。在HCCLM3細(xì)胞中過表達(dá)的PLD1可以逆轉(zhuǎn)低氧條件下CFL1-shRNA引起的對(duì)AKT磷酸化或EMT過程的抑制（圖7G，H）。總的來說，證實(shí)CFL1/PLD1軸在缺氧誘導(dǎo)的HCC進(jìn)展中起重要作用。

總之，該研究表明HCC中過表達(dá)CFL1與較差的臨床病理學(xué)參數(shù)呈正相關(guān)。體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)CFL1是HCC**生長和轉(zhuǎn)移的驅(qū)動(dòng)因素。PDL1/AKT通路介導(dǎo)CFL1的致*功能。此外，CFL1是一個(gè)缺氧反應(yīng)基因，通過***PLD1/AKT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)參與缺氧誘導(dǎo)的HCC進(jìn)展（圖8）。綜上所述，該研究表明CFL1是低氧微環(huán)境與HCC進(jìn)展之間的一種新的連接體。 生命科學(xué)領(lǐng)域內(nèi)的精細(xì)研究。浙江課題技術(shù)指導(dǎo)

5）M1-Exos通過傳遞miR-155加重了EndoMT

為了研究外泌體miR-155在SCI后M1-Exos介導(dǎo)的BSCB破壞惡化中的作用，構(gòu)建miR-155過表達(dá)(miR-155OE)和敲低(miR-155KD)BMDMs，然后分離外泌體并處理bEnd.3細(xì)胞。如圖5A和B所示，miR-155OE-Exos組TEER值***降低，通透性***增加，而miR-155KD-Exos組則相反。加入miR-155OE-Exos后，ZO-1和Occludin的熒光強(qiáng)度明顯降低，而miR-155KD-Exos處理后，ZO-1和Occludin的表達(dá)***增強(qiáng)(圖5C和D)。此外，westernblot檢測(cè)TJs蛋白的表達(dá)，結(jié)果與上述討論的結(jié)果相似(圖5E)。miR-155OE-Exos可促進(jìn)細(xì)胞形態(tài)轉(zhuǎn)化，其分支更少，體細(xì)胞更長。miR-155KD-Exos處理后的結(jié)果則相反(圖5F)。miR-155OE-Exos暴露后，I型膠原蛋白、III型膠原蛋白和α-SMA蛋白水平上調(diào)，CD31蛋白水平下調(diào)，而miR-155KD-Exos作用相反(圖5G)。以上結(jié)果表明，外泌體miR-155在促進(jìn)bEnd.3細(xì)胞的EndoMT中起著至關(guān)重要的作用。 河北課題創(chuàng)新服務(wù)也是***PDAC肝轉(zhuǎn)移的潛在靶點(diǎn)。

蛋白質(zhì)生物標(biāo)志物

MarkerDB中142個(gè)蛋白質(zhì)生物標(biāo)志物覆蓋了160多種疾病。MarkerDB中的所有蛋白質(zhì)生物標(biāo)記物數(shù)據(jù)都是從OncoMX、CBD和UPBD原始文獻(xiàn)中提取的，結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)從蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫PDB收集。目前，MarkerDB中的所有蛋白質(zhì)標(biāo)記都有一個(gè)或多個(gè)疾病關(guān)聯(lián)，以及MarkerDB ID、序列、結(jié)構(gòu)、詳細(xì)的蛋白質(zhì)描述、蛋白質(zhì)名稱/同義詞、蛋白質(zhì)理化數(shù)據(jù)、疾病濃度、正常濃度、性別、年齡范圍，生物流體、一個(gè)或多個(gè)文獻(xiàn)參考和其他在線數(shù)據(jù)庫的外部超鏈接。

2、CFL1的高表達(dá)與HCC的不良預(yù)后相關(guān)單變量分析顯示，**大小、**數(shù)量、TNM分期、靜脈浸潤、HBV***和CFL1水平與HCC患者的總體生存率***相關(guān)（表2）。多變量分析顯示，***大小、**數(shù)量、靜脈浸潤和CFL1水平是HCC總體生存率的**預(yù)后指標(biāo)（表2）。并且，可以看出CFL1的高表達(dá)與HCC的不良預(yù)后相關(guān)。

3、CFL1促進(jìn)HCC的增殖，遷移和侵襲如圖2所示，在高表達(dá)CFL1的HCCLM3和MHCC97h細(xì)胞中，敲除CFL1(圖2A)。隨后實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)敲除CFL1后HCCLM3和MHCC97h細(xì)胞的增殖，遷移和侵襲能力被抑制，表明CFL1促進(jìn)HCC的增殖，遷移和侵襲。

使用motif和CHIP-seq預(yù)測(cè)影響基因簇表達(dá)的轉(zhuǎn)錄因子。

此外，GFP-INPP4B的表達(dá)在基礎(chǔ)和wnt刺激條件下降低了GSK3β蛋白水平，與GSK3β的增強(qiáng)破壞一致(圖6d)。通過Hrs shRNA消耗抑制晚期核內(nèi)體形成后，降低的GSK3β蛋白水平得以恢復(fù)(圖6f, g)。GFP-INPP4B而不是gfp載體細(xì)胞表現(xiàn)出明顯的GSK3β蛋白酶保護(hù)，這與GSK3β向晚期核內(nèi)體轉(zhuǎn)運(yùn)的增強(qiáng)相一致(圖6h)。免疫熒光證實(shí)了這一點(diǎn)，在GFP-INPP4B中觀察到RFP-GSK3與LysoTracker共定位，這是一種積累在晚期核內(nèi)體/溶酶體中的染料，而不是gfp載體細(xì)胞(圖6i)。

我們比較了Pex和Npex組間的HSC的RNA測(cè)序基因表達(dá)譜。河北課題創(chuàng)新服務(wù)

TRF測(cè)序課題整體服務(wù)。浙江課題技術(shù)指導(dǎo)

4、CLF1敲除抑制小鼠HCC的生長和肺部轉(zhuǎn)移隨后，作者在體內(nèi)進(jìn)一步驗(yàn)證CLF1的功能。結(jié)果如圖3所以，敲除CFL1后***降低了HCC細(xì)胞的**體積和**，并減少了肺轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)量。IHC表明CLF1的敲除也導(dǎo)致EMT相關(guān)蛋白的抑制。總之，CLF1敲除抑制小鼠HCC的生長和肺部轉(zhuǎn)移。

5、CFL1是HIF-1α在HCC細(xì)胞中的下游靶基因?yàn)榱岁U明低氧對(duì)HCC中CFL1表達(dá)的影響，將HCCLM3和Hep3B細(xì)胞在低氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h。結(jié)果發(fā)現(xiàn)低氧誘導(dǎo)導(dǎo)致CFL1的表達(dá)升高，但是當(dāng)HIF-1α敲除后，低氧誘導(dǎo)并不能提高CFL1的表達(dá)，并且使用HIF-1α的抑制劑處理HCCLM3和Hep3B細(xì)胞，也能降低因低氧誘導(dǎo)導(dǎo)致CFL1表達(dá)升高（圖4A-F）。ChIP-PCR檢測(cè)進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，HIF-1α和HIF-1β與HCC細(xì)胞CFL1啟動(dòng)子中的HRE直接結(jié)合（圖4G）。在低氧條件下，轉(zhuǎn)染HRE熒光素酶質(zhì)粒或CFL1啟動(dòng)子-熒光素酶質(zhì)粒的HEK293T細(xì)胞中熒光素酶報(bào)告基因活性升高（圖4H）。 浙江課題技術(shù)指導(dǎo)

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