為了確定METTL3促進**細胞增殖的機制，檢測了METTL3在ESCC細胞上轉錄調節中的作用。METTL3缺失降低了KYSE180細胞中m6A的總豐度。甲基化RNA免疫沉淀（MeRIP）和m6A特異性抗體，然后進行RNA測序（MeRIP-seq），發現KYSE180的mRNA中鑒定的m6A位點與RRACH序列一致。m6A信號在mRNAs的終止密碼子和3′-非翻譯區富集。在MeRIP-seq中METTL3缺失減少了1101個基因的mRNAs中1199個m6A峰。轉錄組測序發現METTL3缺失調節2973個基因的表達。二者取交集發現共有93個基因重疊。MeRIP-seq中細胞成分（CC）項的基因本體（GO）富集分析表明，在METTL3缺失的KYSE180細胞中，β-連環蛋白降解復合物（的基因組（包括APC）中m6A水平***降低。英拜生物對整體實驗實施的全局把控。基礎分子實驗課題代發服務
8）SOCS6通過泛素化和降解p65抑制NF-κB信號通路
鑒于miR-155通過增強細胞質和細胞核中p65的表達負調控SOCS6的表達，并***NF-κB信號通路，我們下一步研究SOCS6與p65之間潛在的相互作用。首先，我們在bEnd.3細胞中過表達或下調SOCS6。發現p65表達與SOCS6水平呈負相關(圖8A)。DiscoveryStudio?分析的3D對接也表明SOCS6可能與p65相互作用(圖8B)。此外，熒光共定位實驗表明，SOCS6與p65在細胞質***定位(圖8C和D)，Co-IP實驗進一步揭示了SOCS6與p65的相互作用(圖8E)。值得注意的是蛋白酶體MG132可以部分逆轉SOCS6過表達對p65蛋白水平的抑制作用(圖8F)。同時，在環己酰亞胺的情況下，SOCS6的沉默***延緩了內源性p65的降解速率，而過表達SOCS6則***加速了p65的降解(圖8G)。***，通過泛素化實驗驗證SOCS6是否通過蛋白酶體降解誘導p65失穩。我們發現過表達SOCS6增加了bEnd.3細胞中p65多聚泛素化。沉默SOCS6則相反(圖8H)。綜上所述，這些結果表明SOCS6可以與p65結合并誘導其多聚泛素化和蛋白酶體降解。 RNA PULLdown課題產學研合作ATM對PTEN的磷酸化導致PTEN在質膜上重新分布。
上海英拜生物一直致力于醫學相關領域的實驗技術服務和生物醫學課題的研究。為了廣大醫學領域的研究者能夠在繁忙的工作中提供生物的科研設計咨詢及輔助實驗，相關文獻查閱，實驗可行性分析，實驗流程設計，課題項目申請，整體實驗事實，數據分析與處理，論文潤色。
服務內容：
1，課題設計階段交流：了解客戶的研究方向以及所能提供的樣本類型跟樣本量
2，查閱相關文獻：根據客戶的研究方向，查閱相關文獻
3，設計實驗路線：根據客戶的要求和提供的樣本類型，樣本量設計實驗
4，實驗操作：按照實驗方案實施實驗
5，整理實驗結果：完成實驗，對實驗結果進行整理
6，數據統計與分析處理：對實驗結果進行生物學分析
7，論文：按照實驗設計路線和實驗結果進行文章的構思與潤色。
另外，之前報道過hnRNPA1將miR-196a和miR-320加載到EVs中，本研究ELNAT1表現出的EVs-細胞比率與miR-196a和miR-320相當（Figure 6 F）。hnRNPA1沉默***抑制了ELNAT1在BCa細胞分泌的EVs中的富集（Figure 6 G）。此外，缺失的ELNAT1（包含hnRNPA1結合位點的610-680 nt）主要保留在BCa細胞中（Figure 6 H），證實了ELNAT1通過與hnRNPA1的相互作用被加載到EVs中。
驗證SUMOylation是否有助于hnRNPA1介導的EVs包裹ELNAT1。在BCa細胞中，hnRNPA1中K113位點突變使BCa細胞分泌的EVs中ELNAT1表達降低，沉默UBC9降低了BCa細胞分泌的EVs中ELNAT1的富集（Figure 6 I, J）。與hnRNPA1 WT沉默相比，hnRNPA1沉默后，轉染hnRNPA1K113R并不能恢復EVs介導的ELNAT1下調（Figure 6 K）。共聚焦顯微鏡顯示，在UBC9沉默或hnRNPA1K113R突變后，ELNAT1在CD36標志的多囊泡（MVBs）中的積累明顯下降（Figure 6 L），表明ELNAT1進入EVs受hnRNPA1的SUMO化調控。 表達PTEN- 398A的細胞中上調的基因與G1/S檢查點的***有關。
盡管轉錄組學技術在過去幾十年中發展迅速，但由于芯片和RNA-seq之間固有的可變性差異，對混合數據的綜合分析仍然具有挑戰性。本文提出了Rank-In（/rank-in/）來糾正兩種技術之間的非生物效應，從而能夠自由混合數據以進行整合分析。網站首頁如下，支持上傳用戶自己的芯片、轉錄組數據。該網頁**終會給出調整后的矩陣、差異基因列表以及聚類結果圖第一步：上傳表達文件表達文件格式如下，需上傳***行為樣本名、***列為基因名的表達矩陣轉錄組數據表達量可以使用FPKM、TPM或TMM；芯片數據使用基因表達強度；如果下載GEO數據，需要對探針注釋為基因，然后上傳注釋后的表達文件。第二步：上傳分組文件分組文件***列文樣本名，第二列為分組。“1”表示來自正常組織的樣本，“2”表示**亞型1的樣本，“3”表示**亞型2的樣本，依此類推 提供生物醫學領域內的課題思路設計。凋亡課題一站式
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CircACTN4 直接與 FUBP1 相互作用并*** MYC 的轉錄
為了探索circACTN4的分子機制，首先進行了pull down和質譜分析circACTN4結合蛋白，發現FUBP1在circACTN4上顯著富集。RIP 檢測進一步證實 FUBP1 可以通過qRT-PCR與BC細胞中的內源性circACTN4 特異性結合。FISH-IF 分析顯示 circACTN4和FUBP1共定位于細胞核中。但是circACTN4 的上調和敲低并沒有改變 FUBP1的表達水平，表明circACTN4不參與FUBP1的翻譯后調控。ChIP-PCR測定證實FUBP1與BC細胞中MYC啟動子結合。構建了 FUBP1 和 FIR 過表達和敲低質粒。通過qRT-PCR和蛋白質印跡確定轉染效率。qRT-PCR和WB的結果表明，FUBP1的上調或下調分別顯著增加或降低了BC細胞中MYC的表達水平。此外， qRT-PCR發現FUBP1在BC組織中的表達明顯高于鄰近正常組織中的表達。Pearson相關分析表明circACTN4的水平與BC組織中FUBP1的表達呈正相關。 基礎分子實驗課題代發服務
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7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，FISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學實驗