神經(jīng)發(fā)現(xiàn)科研分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)

3.分析突變的LIR基序（LAMs）在泛*中的作用

使用TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)分析發(fā)現(xiàn)，STDB1在泛*中為抑制**；在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中為促進(jìn)**。

驗(yàn)證LIR基序突變影響自噬

在HEK293T細(xì)胞中進(jìn)行co-IP，結(jié)果表明STBD1LIR基序W203C是影響基因互作的重要結(jié)構(gòu)。

進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，STBD中W203C突變影響其與GABARAPL1的結(jié)合，進(jìn)而影響自噬指標(biāo)的表達(dá)。

5.  在臨床樣本中檢測(cè)STBD1的表達(dá)

在*組織、*旁中檢測(cè)STBD1的表達(dá)水平，結(jié)果表明STBD1在*組織中***下調(diào)，與之前的預(yù)測(cè)結(jié)果一致。

6.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究STBD1的功能

在多種*細(xì)胞中進(jìn)行細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)，STBD1抑制*細(xì)胞生長(zhǎng)，突變W203C會(huì)部分回復(fù)STBD1的抑制作用。

7.動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證STBD1的功能

裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)表明，STBD1抑制**生長(zhǎng)。

8.轉(zhuǎn)錄組、代謝組分析

在細(xì)胞中干擾STBD1，然后進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，分析表達(dá)水平***改變的基因，并進(jìn)行通路富集分析。分析發(fā)現(xiàn)，STBD1抑制**生長(zhǎng)可能是通過(guò)改變基因轉(zhuǎn)錄和重塑糖酵解/糖異生途徑。

為了進(jìn)一步驗(yàn)證STBD1是否重塑代謝，進(jìn)行代謝組分析。結(jié)果表明，STBD1敲除后糖酵解增強(qiáng)。

9.構(gòu)建LIRCP調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)

將LAMs對(duì)應(yīng)蛋白、自噬相關(guān)基因按照生物學(xué)功能聚類，構(gòu)建調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)，將自噬與**聯(lián)系起來(lái)。

英拜生物提供生物科學(xué)內(nèi)的專業(yè)的技術(shù)咨詢，技術(shù)合作。神經(jīng)發(fā)現(xiàn)科研分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)

為了進(jìn)一步鑒定IGF2BPs泛素化的E3連接酶，RNA pulldown質(zhì)譜結(jié)果中在156種潛在的相互作用蛋白中發(fā)現(xiàn)了兩種E3連接酶TRIM25和HECTD3。 使用WB分析， TRIM25與circNDUFB2特異性相關(guān)。 RIP分析進(jìn)一步證實(shí)了circNDUFB2與TRIM25的關(guān)聯(lián)。RNA FISH免疫熒光分析表明circNDUFB2與TRIM25在細(xì)胞質(zhì)***定位。進(jìn)行Co-IP結(jié)果顯示TRIM25與所有三個(gè)IGF2BP結(jié)合。免疫熒光分析表明TRIM25與所有三個(gè)IGF2BP蛋白共定位在細(xì)胞質(zhì)中。IGF2BPs的mRNA水平不受TRIM25的影響，但是在TRIM25敲低時(shí)，IGF2BPs的蛋白水平顯著增加，而在TRIM25的過(guò)表達(dá)中，IGF2BPs的蛋白水平分別降低。在TRIM25過(guò)表達(dá)的A549細(xì)胞中，IGF2BP的泛素化水平顯著增加。這些結(jié)果表明，TRIM25是E3泛素連接酶，可與IGF2BP蛋白相互作用，并通過(guò)泛素-蛋白酶體途徑降解NSCLC細(xì)胞。北京解剖學(xué)科研英拜提供春節(jié)回家探親車費(fèi)補(bǔ)貼。

2）阿爾茨海默病患者皮質(zhì)區(qū)受損星形膠質(zhì)細(xì)胞中氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的脂質(zhì)過(guò)氧化水平升高

由于NOX4蛋白水平在AD患者受損星形膠質(zhì)細(xì)胞中升高，我們研究NOX4在AD患者受損星形膠質(zhì)細(xì)胞氧化應(yīng)激中的作用。我們用免疫熒光染色法檢測(cè)了AD患者或非AD供者大腦顳葉皮質(zhì)組織中GFAP陽(yáng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞中4-HNE的蛋白水平(圖2A)。免疫熒光染色顯示，AD患者(AD)皮質(zhì)區(qū)分子層GFAP陽(yáng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞中4-HNE陽(yáng)性染色強(qiáng)度相對(duì)于非AD供者增加(圖2A、B)。此外，AD患者皮質(zhì)區(qū)ML中受損的GFAP陽(yáng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞4-HNE陽(yáng)性染色強(qiáng)度高于非AD供者(圖2A和B)。AD患者中4-HNE與GFAP亞細(xì)胞共定位陽(yáng)性的受損星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量***增加(圖2C)。此外，相對(duì)于非AD供體，4-HNE在AD患者的NOX4陽(yáng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞***定位(圖2D)。AD患者的NOX4和4-HNE陽(yáng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量相對(duì)于非AD供者***增加(圖2E)。這些結(jié)果提示AD患者受損星形膠質(zhì)細(xì)胞中氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的脂質(zhì)過(guò)氧化水平升高。

有趣的是，我們發(fā)現(xiàn)內(nèi)源性PGK1蛋白水平和LINC00926水平在5種乳腺*細(xì)胞系(MCF-7、T47D、ZR75-1、MDA-MB-453、MDA-MB-231)中均呈負(fù)表達(dá)。在相對(duì)轉(zhuǎn)移性細(xì)胞系MDA-MB-231中PGK1表達(dá)量比較高，LINC00926表達(dá)量比較低；而惡性程度較低的細(xì)胞系MCF-7中PGK1表達(dá)量較低，LINC00926表達(dá)量較高(圖1G)。敲除LINC00926后，MCF-7細(xì)胞中PGK1的表達(dá)***增加，而過(guò)表達(dá)LINC00926后，MDA-MB-231細(xì)胞中PGK1的表達(dá)***降低(圖1H)。這些結(jié)果表明，LINC00926下調(diào)PGK1的表達(dá)，可能與PGK1介導(dǎo)的乳腺*發(fā)展呈負(fù)相關(guān)。這些數(shù)據(jù)表明大黃酸***可以改善DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎。

PI3K-AKT信號(hào)通路PCR基因芯片可以同時(shí)檢測(cè)與PI3K-AKT信號(hào)通路相關(guān)的84個(gè)基因的表達(dá)。芯片中包括AKT(蛋白激酶B)和PI13K家族成員及他們的調(diào)節(jié)基因,這些基因參與許多生物學(xué)過(guò)程包括:Gsk3失活、β-catenin的沉積、肌動(dòng)蛋白的組裝調(diào)控及細(xì)胞遷移、BAD磷酸化等。IGF-1.mTOR和抗凋亡二信號(hào)通路相關(guān)的基因,調(diào)控elF4e和p70S6激酶活性的基因也包含其中。利用實(shí)時(shí)定量PCR,研究者可以方便并且可信地對(duì)與PI3K-AKT信號(hào)通路相關(guān)的基因進(jìn)行同時(shí)檢測(cè)。尿酸升高直接引起腸道屏障損傷。廣州突觸蛋白科研

降低腸上皮細(xì)胞尿酸的產(chǎn)生。神經(jīng)發(fā)現(xiàn)科研分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)

六、多組學(xué)方法分析表征近端小管細(xì)胞子集

Cicero研究了從PT到PT_VCAM1轉(zhuǎn)變過(guò)程中染色質(zhì)可及性的變化。VCAM1和TPM1轉(zhuǎn)錄增加(圖6a)與VCAM1基因體和啟動(dòng)子區(qū)域染色質(zhì)可及性增加相關(guān)(圖6b,c)。同樣，SLC5A12和SLC4A4轉(zhuǎn)錄降低(圖6c)與染色質(zhì)可及性降低相關(guān)(圖6c，補(bǔ)充圖15)。通過(guò)評(píng)估chromVAR轉(zhuǎn)錄因子的活性，我們發(fā)現(xiàn)了可能調(diào)節(jié)近端小管和PT_VCAM1之間過(guò)渡的轉(zhuǎn)錄因子。有趣的是，近端小管顯示出強(qiáng)大的HNF4A活性，該活性在PT_VCAM1簇中降低，并與增加的REL和RELA活性相一致(圖6d)。我們?cè)赑T_VCAM1細(xì)胞核中驗(yàn)證了減少的HNF4A蛋白表達(dá)(圖6e)。我們從VCAM1基因體中鑒定出一個(gè)約60kb的開(kāi)放染色質(zhì)區(qū)域，該區(qū)域包含一個(gè)與VCAM1啟動(dòng)子相互作用的RELA基序(通過(guò)ciscoaccessibilitynetwork)。實(shí)際上，ChIP-qPCR擴(kuò)增了該位點(diǎn)，使其能夠與RELA結(jié)合(圖6f，補(bǔ)充圖17b)，為該細(xì)胞類型中RELA調(diào)控VCAM1表達(dá)提供了實(shí)驗(yàn)證據(jù)。 神經(jīng)發(fā)現(xiàn)科研分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)

公司特色是以各式高通量二代測(cè)序?yàn)榛A(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過(guò)英拜生物自有的分子、病理以及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，提供課題整體設(shè)計(jì)外包、撰寫(xiě)SCI論文一站式服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)平臺(tái)落座在漕河涇開(kāi)發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實(shí)驗(yàn)平臺(tái)開(kāi)放參觀，客戶可隨時(shí)參觀實(shí)驗(yàn)并參與實(shí)驗(yàn)課題的進(jìn)度，保證您的實(shí)驗(yàn)是在您的指導(dǎo)下完成。

1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計(jì)的課題均具有后續(xù)實(shí)驗(yàn)課題的延展性，為您的標(biāo)書(shū)奠定較好的基礎(chǔ)

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4.二代測(cè)序：轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、smallRNA測(cè)序、snoRNA測(cè)序、TRF測(cè)序

5.芯片：信號(hào)通路pcr芯片蛋白芯片

6.表觀遺傳實(shí)驗(yàn)：DNA甲基化實(shí)驗(yàn)（BSP,MSP，焦磷酸測(cè)序），RNA甲基化實(shí)驗(yàn)

7.實(shí)時(shí)定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(靶基因驗(yàn)證，過(guò)表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測(cè)，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)