CircACTN4 直接與 FUBP1 相互作用并*** MYC 的轉錄
為了探索circACTN4的分子機制，首先進行了pull down和質譜分析circACTN4結合蛋白，發現FUBP1在circACTN4上顯著富集。RIP 檢測進一步證實 FUBP1 可以通過qRT-PCR與BC細胞中的內源性circACTN4 特異性結合。FISH-IF 分析顯示 circACTN4和FUBP1共定位于細胞核中。但是circACTN4 的上調和敲低并沒有改變 FUBP1的表達水平，表明circACTN4不參與FUBP1的翻譯后調控。ChIP-PCR測定證實FUBP1與BC細胞中MYC啟動子結合。構建了 FUBP1 和 FIR 過表達和敲低質粒。通過qRT-PCR和蛋白質印跡確定轉染效率。qRT-PCR和WB的結果表明，FUBP1的上調或下調分別顯著增加或降低了BC細胞中MYC的表達水平。此外， qRT-PCR發現FUBP1在BC組織中的表達明顯高于鄰近正常組織中的表達。Pearson相關分析表明circACTN4的水平與BC組織中FUBP1的表達呈正相關。 這些數據表明大黃酸***可以消除尿酸引起的腸道通透性增強。通路分析科研實驗可參觀
此外，為進一步驗證ELNAT1與hnRNPA1相互作用區域，使用ELNAT1不同序列缺失進行RNA-pull down分析，以評估ELNAT1和hnRNPA1結合所需的區域。結果發現，ELNAT1序列中600-750 nt位置是其與hnRNPA1交互作用區域（Figure 4 G, H）。并通過POSTAR2預測ELNAT1在610-680 nt區域的莖環結構可能被hnRNPA1識別（Figure 4 I），而當這一區域缺失時，hnRNPA1減弱對ELNAT1的富集（Figure 4 J）。因此，這表明這些特定的序列（610-680 nt）對ELNAT1 hnRNPA1的相互作用至關重要。
METTL3促進小鼠ESCC細胞增殖和**生長為了確定METTL3在細胞增殖中的作用，通過轉染METTL3 shRNAs來去除ESCC細胞中的METTL3。發現METTL3缺失減少了這些細胞的增殖和集落數。通過在KYSE180和KYSE450中重組表達METTL3，這些抑制作用被消除。
接下來在KYSE450細胞中建立四環素誘導的METTL3表達。四環素***以劑量依賴的方式增加METTL3的表達，相應地引起細胞增殖水平的增加和集落形成水平的增加。與野生型（WT）METTL3的過表達相比，在ESCC細胞中METTL3非活性突變體的過表達未能促進細胞生長和增殖。這些結果有力地表明，METTL3促進**細胞增殖依賴于其表達水平和完整的活性。為了確定METTL3在小鼠**生長中的作用，將KYSE180或KYSE450細胞皮下注射到裸鼠體內，發現METTL3缺失降低了**大小、體積和重量。與表達METTL3非活性突變體引起的有限效應相比，WTMETTL3過表達極大地促進了**生長。這些結果表明METTL3的表達有助于小鼠**的生長。METTL3介導APCmRNA上的m6A上調
同樣，Transwell實驗(圖5h)也證明了**細胞的遷移能力。綜上所述，circMAPK1在沒有其編碼蛋白MAPK1-109aa的情況下，不能抑制GC細胞的惡性表型。隨后，為了進一步驗證MAPK1-109aa的功能，我們在SGC7901和MGC803細胞中恢復了MAPK1-109aa的表達，無論是否穩定敲除circMAPK1，Western blot驗證了這一點(圖6a)。將MAPK1-109aa質粒轉染到SGC7901和MGC803細胞株后，細胞的增殖能力(圖6b-g)和遷移能力(圖6h)得到了有效的抑制。在轉染了shcirMAPK1的細胞系中，恢復了MAPK1-109aa的表達也逆轉了穩定敲除circMAPK1所導致的惡性表型。綜上所述，上述結果表明circMAPK1對GC細胞惡性生物學行為的抑制作用依賴于其編碼蛋白MAPK1-109aa。英拜提供分子生物學以及免疫病理相關實驗。
為了檢測該多肽產物，我們使用了一種識別MAPK1中間部分的抗體(圖4d)。Western Blot檢測40對胃*組織(圖4e)和細胞系(圖4f)中MAPK1-109aa和MAPK1的水平。通過半定量分析，胃*組織中MAPK1-109aa水平較正常胃組織中降低。Kaplan-Meier生存分析顯示，MAPK1-109aa表達水平較高的胃*患者總生存期明顯長于MAPK1-109aa表達水平較低的胃*患者(圖4h)。一系列GC細胞系中MAPK1-109aa的含量也明顯低于正常胃粘膜細胞系GES-1。在內源性circMAPK1水平較低且幾乎沒有MAPK1-109aa表達的MKN45細胞中，轉染circMAPK1和MAPK1-109aa質粒均產生預測的MAPK1-109aa帶，而過表達circMAPK1 IRES突變質粒則沒有產生預測的MAPK1-109aa帶(圖4i)。相反，在內源性circMAPK1和MAPK1-109aa更高表達的GES-1細胞中，發現兩種特異性靶向circMAPK1連接的shRNA***降低了MAPK1-109aa的表達(圖4j)。使用anti-flag抗體進行免疫熒光檢測，證實MAPK1-109aa-Flag位于過表達MAPK1-109aa-Flag質粒的MKN45細胞的胞質中，如圖4k所示。大黃酸處理改變腸道菌群組成。重慶佝僂病大鼠模型科研
m6A表達水平較高的**患者淋巴轉移***增加。通路分析科研實驗可參觀
6）M1-Exos通過傳遞miR-155上調ROS水平，損害bEnd.3細胞線粒體功能
我們研究了外泌體miR-155與bEnd.3細胞中線粒體功能的關系。我們發現，與miR-NCOE-Exos相比，miR-155OE-Exos處理上調了ROS水平(圖6A和B)，線粒體超氧化物水平(圖6C和D)和線粒體電位(圖6E)；然而，miR-155KD-Exos處理則顯示了相反的結果(圖6A-E)。此外，miR-155OE-Exos可使線粒體腫脹更大，形態更短，線粒體碎片細胞比例更高，而miR-155KD-Exos可減輕線粒體腫脹(圖6F和G)。miR-155OE-Exos處理后的OCR、基礎呼吸、ATP產生、呼吸能力和呼吸逆轉均明顯下降，而miR-155KD-Exos處理減輕了氧化呼吸功能障礙(圖6H和I)。這些結果表明，上調外泌體miR-155可導致過度ROS的產生和線粒體功能障礙。 通路分析科研實驗可參觀
公司特色是以各式高通量二代測序為基礎，利用生物數據信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細胞實驗平臺，提供課題整體設計外包、撰寫SCI論文一站式服務。公司實驗平臺落座在漕河涇開發區浦江園區，實驗平臺開放參觀，客戶可隨時參觀實驗并參與實驗課題的進度，保證您的實驗是在您的指導下完成。
1.整體課題外包服務：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經典通路研究，設計的課題均具有后續實驗課題的延展性，為您的標書奠定較好的基礎
2.標書申請：提供標書課題設計、撰寫，標書部分基礎實驗的開展，設計的標書均符合科研前沿熱點，中標率很高。
3.提供熱點**文獻技術支持，探討科研前沿熱點研究：trfRNA，DNA/RNA甲基化，外泌體，自噬，WNT等相關研究
4.二代測序：轉錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序
5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實驗：DNA甲基化實驗（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實驗
7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，FISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學實驗