三、RIT1及時調節后期進入和染色體分離保真度
MAD2和p31conmet調節SAC的持續時間，反過來，也調節有絲分裂的持續時間。這促使我們研究RIT1是否通過與MAD2和p31conmet的直接關聯來影響SAC。通過RNAi或crispr介導的敲除去除RIT1可延長有絲分裂進程(圖3A和S3A S3E)。此外，SAC的藥理抑制挽救了RIT1耗盡的作用，表明RIT1以SAC依賴的方式影響有絲分裂。此外，RIT1的缺失增加了染色體分離錯誤的發生率(圖3B)，這表明RIT1不僅對有絲分裂的及時進展至關重要，而且RIT1蛋白水平的失調也破壞了正常的SAC功能。LZTR1或RIT1M90I表達的缺失加速了異步生長細胞的有絲分裂進程，這一效應依賴于PM釋放RIT1(圖3C、S3H和S3I)。同樣，RIT1 WT或M90I的過表達部分覆蓋了藥物誘導的SAC反應(圖3D和S3J)。RIT1M90I的異位表達以依賴MAD2-和p31come結合的方式***增加了有絲分裂錯誤的發生率，包括滯后染色體和橋接染色體(圖3G和S3O)。因此，我們觀察到在表達RIT1M90I的細胞中非整倍體率增加，但在表達不能結合MAD2/p31conmet的突變體的細胞中卻沒有(圖3H和S3P)。這些結果表明，RIT1水平的增加會導致與MAD2和p31conmet的直接相互作用，從而降低有絲分裂的保真度。 外泌體CD44v6和C1QBP可能是預測PDAC患者預后的有前途的生物標志物。浙江課題國家自然科學基金
但tbi暴露后，Ran***1染色分布異常，細胞核和細胞質強度高(圖2E）。與對照組相比，腦外傷后Ran***1分布異常的細胞百分比明顯增高(圖2F）。反復的創傷損傷會干擾Ran***1在大腦中的定位。TBI大鼠損傷皮質(同側半球)下海馬區域的腦細胞表現出錯誤定位和/或聚集(箭頭)或強烈的Ran***1核染色(箭頭)，而假手術對照組主要是光滑的核周染色(圖2H)。與假對照相比，創傷性腦損傷大鼠的NUP62顯示了明顯的胞質(箭頭)和核(箭頭)錯位，假對照顯示了很少的胞質(而沒有核)錯位(圖2J)。創傷性腦損傷腦組織中NUP62病理細胞的百分比明顯高于假手術對照組(圖2K).上海課題創新服務可以上傳原始的fast文件。
1）LINC00926被篩選為PGK1負調控的lncRNA，與乳腺*臨床結果相關
為了探索負調控PGK1的lncRNAs，我們根據圖1A所示的篩選策略對乳腺*的三個數據庫進行了分析。我們鑒定了3個lncRNA，LINC00926，LINC01089和LINC00324與PGK1呈負相關，且表現出良好的臨床結果(圖1B-1D)。為了研究鑒定出的lncRNAs是否下調了PGK1的表達，我們分別用這三個lncRNAs分別轉染了乳腺*細胞。我們的結果表明，在mRNA水平不變的情況下，只有LINC00926導致MCF-7和MDA-MB-231細胞中PGK1蛋白水平***下降(圖1E)，表明LINC00926下調了乳腺*細胞中PGK1的表達。此外，與非**組相比，13/14(92.9%)例乳腺*患者的LINC00926表達降低，12/14(85.7%)例乳腺*患者的PGK1表達上調。
8）在AKI期間上調UCP1減少脂質積累，可通過AMPK/ULK1途徑促進體內自噬
我們發現UCP1在體外通過***自噬來影響AKI中的細胞功能，我們探討了這種情況在體內是否也會發生。結果表明，在動物模型中上調UCP1也能******AMPK/ULK1/自噬通路(圖8A)，免疫熒光和免疫組化分析進一步證實了這一點(圖8B-C)。***，CL316243上調UCP1后，AMPK/ULK1/自噬通路也被******(圖8D-F)。綜上所述，我們的研究構建了AKI中脂質積累***的模型，且這種積累的脂質與UCP1呈負相關。通過上調UCP1來***AKI中積累的脂質，可以***AMPK/ULK1/自噬通路來抑制疾病進展(圖9)。
結論：UCP1直接調控AKI中的脂質積累，***細胞自噬，從而***抑制疾病進展。這為AKI的***提供了新的思路和靶點。 ATM對PTEN的磷酸化導致PTEN在質膜上重新分布。
4、外泌體miR-138-5p通過抑制KDM6B表達調節巨噬細胞極化
隨后，作者研究了在不同培養條件下TPH-1的表達譜。首先，和**細胞共培養抑制了M1相關基因的表達，IL-6，TNF-α，和IL-1β，但是增加了M2相關基因的表達CD163，Arg-1，IL-10,TGF-β和VEGFA。過表達KDM6B部分抑制了上述表現改變（圖4A-B）。流式檢測顯示乳腺*細胞和TPH-1的共培養增加了CD163陽性細胞數比例，但是過表達KDM6N可以抑制這種效果（圖6C）。類似的，過表達KDM6B抑制了miR-138-5p誘導的M2極化（圖4D-F）。與對照組相比，乳腺*來源的外泌體miR-138-5p降低了M1相關表型，相反，M2標志物增加并伴隨著CD163陽性細胞數的增加（圖6G-I）。用從乳腺*細胞中分離出來的外泌體處理THP-1細胞導致了M2極化，抑制miR-138-5p的表達可挽救這種極化（圖4J-L）。總之，這些結果表明外泌體miR-138-5p通過抑制KDM6B表達調節巨噬細胞極化。 進一步了解阻斷atm依賴的PTEN磷酸化如何影響細胞對基因毒性損傷的反應。青海課題細胞實驗
Pex衍生的CD44v6/C1QBP復合物介導了Pex對肝纖維化和PDAC肝轉移的積極作用。浙江課題國家自然科學基金
8、CXCL13/CXCR5/NFκB/p65/miR-934正反饋環路在CRLM期間介導M2巨噬細胞和CRC細胞之間的相互作用
如Fig.8a所示，WB顯示，與對照組相比，SW480和RKO細胞中，CXCL13促進p65磷酸化，NFκB、MMP2和MMP9的表達上調而IκBα的表達下調。CXCR5表達下調可部分減弱CXCL13的增強作用。此外，PMA處理的THP-1細胞用miR-934mimics預處理，然后與SW480細胞或RKO細胞與anti-CXCL13抗體共培養，或與shCXCR5共培養。我們發現CRC細胞中的anti-CXCL13抗體或CXCR5敲低可以抑制miR-934過表達誘導的NFκB信號通路的活化（Fig.8b）。值得注意的是，helenalin抑制NFκB/p65信號后，SW480和RKO細胞中miR-934、MMP2和MMP9的表達***低于對照組（Fig.8c），這表明miR-934也可能通過正反饋回路被NFκB/p65信號正調控。 浙江課題國家自然科學基金
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5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實驗：DNA甲基化實驗（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實驗
7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，FISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學實驗