食道*是世界上第六大**常見(jiàn)的**，據(jù)報(bào)道患者5年生存率只有12-20%。N6-甲基腺苷(m6A)修飾是真核生物mRNA中**豐富的RNA修飾，主要由m6A調(diào)節(jié)劑介導(dǎo)。m6A修飾調(diào)節(jié)RNA穩(wěn)定性和翻譯效率、染色質(zhì)狀態(tài)、替代聚腺苷酸化和前體mRNA剪接。***我們來(lái)講一篇刊登在NatureCommunications（IF=14.91）上的一篇文章，題名為METTL3promotestumourdevelopmentbydecreasingAPCexpressionmediatedbyAPCmRNAN6-methyladenosine-dependentYTHDFbinding。
上調(diào)METTL3與ESCC患者的不良生存相關(guān)為探討食管*中中METTL3的表達(dá)譜，分析了**基因組圖譜（TCGA）數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)與11個(gè)相鄰的正常食管上皮組織相比，95個(gè)食管*標(biāo)本中METTL3的表達(dá)***上調(diào)。對(duì)包含81對(duì)ESCC標(biāo)本和鄰近正常食管上皮組織的組織芯片進(jìn)行IHC染色顯示，ESCC組織中的METTL3表達(dá)水平***高于配對(duì)鄰近正常組織。Kaplan-Meier分析顯示，高表達(dá)METTL3的患者總生存時(shí)間比低表達(dá)METTL3的患者短。9種不同ESCC細(xì)胞系中METTL3mRNA和蛋白質(zhì)的表達(dá)水平高于Het-1a永生化正常食管上皮細(xì)胞。這些結(jié)果表明，METTL3在食管鱗*中表達(dá)上調(diào)，并與食管鱗*患者生存時(shí)間呈負(fù)相關(guān)。 提供***科研設(shè)計(jì)咨詢(xún)及輔助實(shí)驗(yàn)。安徽課題詢(xún)問(wèn)報(bào)價(jià)
接著，我們利用NMR進(jìn)一步研究了FTO和SsD之間的相互作用，在滴定過(guò)程中觀察到信號(hào)的劑量依賴(lài)性衰減(圖3E)。這些結(jié)果表明，F(xiàn)TO干擾了SsD的狀態(tài)。接下來(lái)，我們使用LC-MS/MS定量分析了細(xì)胞對(duì)SsD的攝取(圖3F)。在NB4和Kas-1細(xì)胞中，SsD在0.05-0.14 nmol/百萬(wàn)細(xì)胞中檢測(cè)到。HPLC顯示SsD對(duì)體外FTO去甲基化的抑制活性(圖3G)。此外，在無(wú)細(xì)胞系統(tǒng)中，斑點(diǎn)印跡試驗(yàn)證實(shí)了SsD介導(dǎo)的FTO活性競(jìng)爭(zhēng)性抑制(圖3H)。綜上所述， FTO是SsD的直接靶點(diǎn)，可能是SsD誘導(dǎo)的白血病細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用的主要介質(zhì)。安徽課題詢(xún)問(wèn)報(bào)價(jià)我們接下來(lái)研究了Pex對(duì)HSCs生物學(xué)行為的影響。
6）NOX4誘導(dǎo)的線粒體代謝損傷通過(guò)抑制人類(lèi)星形膠質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞抗氧化過(guò)程而誘導(dǎo)氧化應(yīng)激
我們研究了NOX4誘導(dǎo)的線粒體代謝損傷是否可以通過(guò)抑制人體星形膠質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞抗氧化過(guò)程來(lái)誘導(dǎo)氧化應(yīng)激。與對(duì)照組相比，NOX4的升高***降低了谷胱甘肽(GSH)水平和谷胱甘肽/氧化谷胱甘肽(GSSG)的比值(圖6A和B)。NOX4的升高也增加了GSSG的水平(圖6C)。由于NOX4導(dǎo)致GSH減少以及GSH/GSSG比值降低，我們接下來(lái)研究NOX4是否可以影響人類(lèi)星形膠質(zhì)細(xì)胞中NRF2信號(hào)通路，這是細(xì)胞抗氧化反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)控因子。與對(duì)照組相比，NOX4的升高抑制了NRF2在細(xì)胞質(zhì)中的核易位(圖6D)。此外，NRF2靶基因HO-1和GCL的水平和活性在人星形膠質(zhì)細(xì)胞中被NOX4過(guò)表達(dá)***抑制(圖6E和F)。這些結(jié)果表明，NOX4誘導(dǎo)的線粒體代謝損傷通過(guò)抑制人星形膠質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞抗氧化過(guò)程而誘導(dǎo)氧化應(yīng)激。
METTL3增強(qiáng)APCmRNA的m6A和隨后的YTHDF結(jié)合抑制APC表達(dá)YTHDF1-3介導(dǎo)mRNA降解，針對(duì)YTHDF1的抗體進(jìn)行RIP分析，實(shí)時(shí)定量PCR分析顯示，在KYSE180中，與APCmRNA結(jié)合的YTHDF2的數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于YTHDF1和YTHDF3的數(shù)量，并且由于METTL3缺失而減少。這些結(jié)果表明METTL3增加了APCmRNA的m6A，在很大程度上促進(jìn)了YTHDF2與APCmRNA的結(jié)合。為了研究YTHDF2與APCmRNA結(jié)合在APC表達(dá)中的作用，我們?nèi)コ薡THDF2，這增加了KYSE450細(xì)胞中APC的mRNA（圖5d和補(bǔ)充圖5e）和蛋白質(zhì)表達(dá)。YTHDF1–3的聯(lián)合缺失進(jìn)一步增加了這些細(xì)胞中APC的mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)。此外，還進(jìn)行了熒光素酶報(bào)告子分析，結(jié)果表明，缺失YTHDF2增強(qiáng)了由含m6A的WTAPCCDS序列驅(qū)動(dòng)的熒光素酶活性，而突變的APC增強(qiáng)了熒光素酶活性，并使該活性抵抗了YTHDF2缺失的調(diào)節(jié)。此外，METTL3過(guò)表達(dá)抑制由WTAPCCDS序列驅(qū)動(dòng)的熒光素酶活性通過(guò)YTHDF2耗竭恢復(fù)，其不影響突變的APC增強(qiáng)的熒光素酶活性。這些結(jié)果表明METTL3增加了APCmRNA的m6A，隨后的YTHDF結(jié)合抑制了APC的表達(dá)。動(dòng)物建模模型實(shí)驗(yàn)的整體服務(wù)。
ChIP分析結(jié)果表明，高濃度si-circ#2轉(zhuǎn)染后FIR和FUSE的結(jié)合水平高于低濃度si-circ#2轉(zhuǎn)染后FIR和FUSE的結(jié)合水平。此外，沉默 FIR 顯著增強(qiáng)了 MYC 的表達(dá)，而過(guò)表達(dá) FIR 通過(guò) qRT-PCR 和 BC 細(xì)胞中的蛋白質(zhì)印跡降低了 MYC 的水平。OE-FIR 或 sh-FIR 與 circACTN4 或 si-circ#2 共轉(zhuǎn)染后，我們發(fā)現(xiàn)過(guò)表達(dá) FIR 可以逆轉(zhuǎn) circACTN4 對(duì) MYC 表達(dá)的增強(qiáng)作用，而 FIR 敲低可以抵消下調(diào)的抑制作用qRT-PCR 在 MYC 水平上檢測(cè)到 circACTN4。總之，這些結(jié)果表明circACTN4可以抑制FIR和FUBP1的結(jié)合以減輕FIR的抑制作用，從而促進(jìn)MYC轉(zhuǎn)錄。生命科學(xué)領(lǐng)域內(nèi)的精細(xì)研究。貴州課題創(chuàng)新服務(wù)
致力于醫(yī)學(xué)相關(guān)領(lǐng)域的實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)和相關(guān)生物醫(yī)學(xué)課題的研究。安徽課題詢(xún)問(wèn)報(bào)價(jià)
與HuR的RRM3結(jié)合，中斷HuR-β-actinmRNA相互作用，抑制β-actin表達(dá)，抑制OPC遷移
為闡明lnc-PMIF如何與HuR相互作用調(diào)節(jié)β-actin表達(dá)和OPC遷移，首先通過(guò)生物信息學(xué)分析預(yù)測(cè)了lnc-PMIF的二級(jí)結(jié)構(gòu)，并合成生物素化的全長(zhǎng)lnc-PMIF（WT）和截短的lnc-PMIF突變體，分別為突變體A1（無(wú)5’莖環(huán)的正義）、突變體A2（有中心莖環(huán)和3’莖環(huán)的正義）和突變體A3（*有3’莖環(huán)的正義1100-1455bp），轉(zhuǎn)染MC3T3-E1細(xì)胞，并進(jìn)行標(biāo)記RNA鏈霉親和素下拉試驗(yàn)。蛋白免疫印跡分析顯示，HuR存在于轉(zhuǎn)染W(wǎng)Tlnc-PMIF、截短lnc-PMIF突變體A1或截短lnc-PMIF突變體A2的細(xì)胞的下拉部分中，但在轉(zhuǎn)染截短lnc-PMIF突變體A3的細(xì)胞的下拉部分中不存在。這些數(shù)據(jù)表明，lnc-PMIF的中心莖環(huán)足以實(shí)現(xiàn)lnc-PMIF和HuR之間的相互作用。 安徽課題詢(xún)問(wèn)報(bào)價(jià)
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