3）RIC8A與circPDE4B相互作用，參與OA
為了鑒別與circPDE4B相互作用的蛋白，我們采用RPD-MS(圖3A)，共鑒定出112個與circPDE4B相互作用的蛋白(圖3B)，確定RIC8A。HCs中的RNA-蛋白共定位證實了RIC8A和circPDE4B之間的相互作用(圖3C)。RPD實驗表明，體外線性轉錄的circPDE4B能拉下重組RIC8A(圖3D)。然后，我們使用catRAPID工具預測circPDE4B和RIC8A的相互作用區域(圖3E)。為了識別預測的結合位點，我們將FLcircPDE4B截短為3個片段。據預測，RIP結果顯示有FL和S3被RIC8A拉下(圖3F)。有綜合來看，這些結果表明circPDE4B在HCs中與RIC8A相互作用。我們進一步的研究表明，circPDE4B調控RIC8A蛋白水平，而不是mRNA水平或穩定性(圖3G-I)。我們還阻斷了RIC8A蛋白的合成，并觀察到sh-陰性對照(NC)和sh-circPDE4B的HCs之間的RIC8A蛋白半衰期有明顯差異(圖3J)，說明circPDE4B降低了RIC8A蛋白的穩定性。經PS341處理后，RIC8A在circPDE4B過表達和下調細胞中均未發生變化(圖3K,L)，表明circPDE4B通過蛋白酶體活性調節RIC8A。無論內源性還是外源性RIC8A,RIC8A的多泛素化在circPDE4B耗盡后均下降，在過表達circPDE4B后則上升(圖3O)。綜上，circPDE4B翻譯后影響蛋白酶體介導的RIC8A的降解和周轉。 課題外包服務找英拜放心安心。急性腎損傷
六、原始亞型預示著對激酶抑制劑的敏感性增加
生成各化合物的藥物劑量響應曲線，并比較各亞型間曲線下面積(areaunderthecurve,AUCd)(單個藥物劑量響應曲線見圖6、)。體外藥物篩選顯示，原始聚類患者樣本對索拉非尼、舒尼替尼和魯索利替尼的敏感性高于合并亞型(Wilcoxon秩和檢驗p-value分別=2E5、0.02和0.01;在UHN患者樣本中，Quizartinib的亞型間差異反應較弱，而伊馬替尼和達沙替尼的亞型間無差異(補充圖27)。使用BeatAML33數據集，驗證原始和committed亞型對激酶抑制劑的反應之間的聯系，該數據集包含npm1突變AML患者樣本的體外藥物篩選。我們觀察到UHN和BeatAML數據集之間的良好一致性，原始聚類中的樣本對Sorafenib和Sunitinib表現出更高的敏感性(圖6)。有趣的是，Quizartinib在UHN隊列中有微弱的差異反應，但在BeatAML隊列中卻有統計學意義的差異。 帕金森小鼠模型課題表達PTEN- 398A的細胞中上調的基因與G1/S檢查點的***有關。
circ_0072083 與 miR-1252-5p 相互作用以調節 TMZ 抗性
神經膠質瘤細胞中的 ALKBH5/NANOG 軸和 TMZ 抗性為了分析circ_0072083如何調節ALKBH5/NANOG軸，探索了潛在的 miRNA作為串擾。基于Circinteractome和starBase的數據庫，維恩圖顯示只有一種miRNA（miR-1252-5p）可以與circ_0072083、ALKBH5和NANOG結合。 miR-1252-5p 表達在 TMZ 抗性組織和細胞中顯著降低。為了驗證它們的相互作用，構建了野生型和突變型熒光素酶報告載體。miR-1252-5p 過表達明顯降低了野生型組（WT-circ_0072083、WT-NANOG 3'UTR 和 WT-ALKBH5 3'UTR）的熒光素酶活性，而沒有改變突變組（MUT -circ_0072083，MUT-NANOG 3'UTR 和 MUT-ALKBH5 3'UTR）。
白血病發生需要增強由致*基因引起的自我更新。其潛在的分子機制尚不完全清楚。本文確定C/D box snoRNAs和rRNA甲基化是白血病干細胞活性的關鍵決定因素。Aes基因在有融合基因AML1-ETO, PML-RARα和PLZF-RARα的白血病中高表達，但是其功能和機制一直是未知的。研究者通過老鼠模型和細胞系實驗，發現Aes對**細胞的自我更新能力是至關重要的。研究者通過RNA-seq對比Aes（*基因）缺失前后轉錄組的變化，意外發現大量的snoRNA下調，而在過表達Aes后snoRNA表達量***上升，這說明Aes能影響snoRNA的表達。有趣的是，研究者利用CRISPR技術敲除snoRNA后，發現即使是敲除單個snoRNA，rRNA的甲基化***降低，并且抑制白血病細胞的克隆形成能力。這說明，snoRNA不僅是一類受*細胞調控的非編碼RNA，更參與了**的發***展。AES通過與RNA解旋酶DDX21相互作用誘導snoRNA/RNP形成。提供分子生物以及到后續動物建模的一整套服務。
鑒于以上結果，作者想進一步探究tiRNA-Gly與RBM17作用的分子結果。結果顯示，tiRNA-Gly可提高總RBM17蛋白的水平，但是不影響RBM17的mRNA水平（圖3H-I）。隨后，用蛋白質合成抑制劑環己胺(CHX)處理細胞，tiRNA-Gly轉染后增加了K1細胞內源性RBM17蛋白的半衰期，而β-actin作為對照（圖3J）。此外，蛋白酶體抑制劑MG132處理后，內源性RBM17在轉染tiRNA-Gly的K1細胞中的積累量**高于轉染siRNA-NC的K1細胞，表明tiRNA-Gly抑制了蛋白酶體依賴性的PTC細胞中RBM17的降解（圖3K）。此外，tiRNA-Gly的過表達***抑制了泛素化RBM17的水平（圖3L）。綜上所述，tiRNA-Gly可以穩定RBM17蛋白通過泛素/蛋白酶體依賴性降解。也是***PDAC肝轉移的潛在靶點。骨質疏松癥
可以推斷基因調控事件之間的關系。急性腎損傷
5、外泌體miR-934通過下調PTEN表達和***PI3K/AKT信號通路誘導巨噬細胞M2極化
進一步探索**來源的外泌體miR-934誘導M2巨噬細胞極化的機制。miR-934序列與PTEN的3'-UTR序列存在比對，提示miR-934可能靶向PTEN誘導M2巨噬細胞極化（Fig.5a）。如Fig.5b所示，將miR-934mimics或anti-miR-934及其控制載體轉染到PMA處理的THP-1細胞中，發現分別轉染miR-934mimics或anti-miR-934和PTEN野生型結合位點組中PTEN的3’-UTR熒光素酶活性***降低或升高（Fig.5b）。有趣的是，當細胞與轉染了anti-miR-934、miR-934mimics或其對照載體的HCT-8或HT29細胞的外泌體共培養時，熒光素酶活性模式顯示出與上述趨勢相同（Fig.5c）。此外，PMA處理的THP-1細胞轉染miR-934mimics或anti-miR-934，與各自的對照細胞相比，分別在mRNA和蛋白水平下調或上調了PTEN的表達（Fig.5d）。類似的，分別用轉染anti-miR-934或miR-934mimics的CRC細胞的外泌體孵育PMA處理的THP-1細胞，結果發現PTEN，PI3K/AKT的表達明顯高于或低于各自的對照組（Fig.5e,f）。這些表明在PMA處理的THP-1細胞中，外泌體來源的miR-934可以通過靶向其3'-UTR和***PI3K/AKT通路來下調PTEN的表達。 急性腎損傷
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