在Fth- KO小鼠中， TBI后褪黑素對神經的保護作用被**取消
為了進一步探索神經元Fth的喪失是否影響褪黑素對TBI誘導的鐵死亡的影響，測量了鐵死亡的幾種假定的生物標志物。發現***KO小鼠上皮層非血紅素鐵的水平沒有影響。令人驚訝的是，盡管褪黑素***的和未***的Fth -KO小鼠的Tfr1 mRNA和蛋白表達水平沒有顯著差異，但是在褪黑素***的小鼠中，觀察到Fpn mRNA和蛋白表達水平顯著增加Fth- KO小鼠。值得注意的是，與未***的Fth- KO小鼠相比，用褪黑素***Fth- KO小鼠未能顯著改變mRNA（Slc7a11，Ptgs2）和蛋白質（xCT，Cox2、4HNE）的表達。另外，用褪黑素***Fth- KO小鼠并沒有統計學上降低GSH和MDA以及4HNE的水平，和FJB陽性細胞的數目。這些結果表明褪黑素沒有統計學上減少TBI引起的鐵死亡和神經元變性。 大黃酸處理沒有改變乳酸菌尿酸的產生。海南科研贈送提供技術路線
然后使用單細胞RNA-seq來描述移植后30天脾臟中存留的T細胞的轉錄譜（Fig. 4G）。使用pseudobulk RNA-seq分析和預轉移體外培養的基因比較，生成了持續細胞的基因標記，其標志是記憶相關基因(Sell，Foxp1，Tcf7，Cd7，Il7r，Klf2，Ccl5)的高表達和效應相關基因(Gzmd，Ifng，Prf1，Gzma，Gzmb)的低表達(Fig. 4H-I)。對先前的體外單細胞數據（Fig. 2H-J）的進一步分析顯示，CDK4/6i處理后，具有這種持續性特征的細胞頻率從7.5%增加至26.8%（Fig. 4J-K）。這些數據表明，抑制CDK4/6促進T細胞向真實的記憶表型分化，其特征是功能的長期持久性。醫學相關科研推薦咨詢上海英拜生物有經驗豐富的科研團隊。
1）UUO誘導的腎纖維化模型中TGF-β1的表達和外泌體的產生增加我們首先通過Masson三色染色、Sirius紅染色、westernblotting和免疫組化方法評估UUO-3d和UUO-7d模型腎纖維化和TGF-β1的表達。結果提示，TGF-β1表達和腎纖維化與梗阻天數呈正相關。為了進一步闡明外泌體是否在UUO模型中發揮作用，我們進行了透射電鏡、免疫熒光和westernblotting檢測。透射電鏡顯示UUO后細胞外囊泡分泌明顯增加。此外，許多細胞外囊泡的外泌體直徑為30-150nm。CD63和TSG101(外泌體標記物)的Westernblot和免疫染色顯示，外泌體在UUO-3d組中明顯增加，在UUO-7d組中進一步增加。此外，外泌體主要分布在腎小管上皮周圍。
4.篩選關鍵模塊（hubmodule）并進行富集分析分析發現，棕色模塊與CD8+T細胞***相關（R2=-0.05，P=9e-05），因此選擇棕色模塊為hubmodule進行富集分析。
5.在hubmodule中篩選出關鍵基因（hubgene）并驗證為了研究與樞紐模塊中CD8+T細胞浸潤相關的潛在樞紐基因，構建了蛋白質-蛋白質相互作用（PPI）網絡[臨界標準：reliability>0.7andconnectivity>15(node/edge)]將hubmodule中的基因識別為中心節點，并通過Cytoscape對其進行可視化;對hubmodule中所有基因進行基于TCGA數據的預后分析，八個基因（CLCN2，ERLIN2，F5，FAM107B，GFM1，HSPB3，METTL8和SYT3）與LSCC患者的預后相關，接下來對這8個基因進行差異表達分析，六個基因（GFM1，HSPB3，SYT3，ERLIN2，METTL8和CLCN2）在LSCC組織中顯著差異表達。
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Ran***1對Ran-GTP的水解對于核出口過程中貨物進入細胞質至關重要。Ran***1維持核/細胞質Ran梯度，其丟失會導致細胞死亡。在非tbi對照組大腦中，Ran***1在核膜內分布均勻，少數細胞表現出強烈的核信號。但tbi暴露后，Ran***1染色分布異常，細胞核和細胞質強度高(圖2E）。與對照組相比，腦外傷后Ran***1分布異常的細胞百分比明顯增高(圖2F）。反復的創傷損傷會干擾Ran***1在大腦中的定位。TBI大鼠損傷皮質(同側半球)下海馬區域的腦細胞表現出錯誤定位和/或聚集(箭頭)或強烈的Ran***1核染色(箭頭)，而假手術對照組主要是光滑的核周染色(圖2H)。與假對照相比，創傷性腦損傷大鼠的NUP62顯示了明顯的胞質(箭頭)和核(箭頭)錯位，假對照顯示了很少的胞質(而沒有核)錯位(圖2J)。創傷性腦損傷腦組織中NUP62病理細胞的百分比明顯高于假手術對照組(圖2K).英拜提供一年三節的購物卡津貼。云南科研地區科學基金
尿酸升高直接引起腸道屏障損傷。海南科研贈送提供技術路線
為了使細胞在G1/S檢查點同步，我們對它們施加雙胸腺嘧啶脈沖。這種處理有效地抑制了PTEN-WT和PTEN-398A細胞在G1/S邊界(圖4B)。然后在正常生長培養基中釋放細胞，在S期進展期間用IR處理，6小時后收集細胞，用流式細胞術分析細胞周期分布(實驗方案見補充圖7A)。大部分PTEN-WT細胞被阻滯在s期，而PTEN-398A細胞未能阻滯細胞周期，而是發展到G2/M期(圖4C)。通過測定表達磷酸化組蛋白H3(Ser10)的細胞比例，證實了這一觀察結果。磷酸化組蛋白H3(Ser10)標志著細胞處于有絲分裂階段。(圖4d)。海南科研贈送提供技術路線
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7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，FISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學實驗