三、高分辨率熔解曲線(HRM)法高分辨率熔解曲線分析技術(HighResolutionMelting),簡稱HRM，是近年來興起的一種檢測基因突變、進行基因分型而及甲基化檢測的新方法。基本原理是基于核酸分子由于片段長短、GC含量、GC分布及單個堿基差異等物理性質不同而造成DNA分子在加熱變性時都會有不同的熔解曲線的形狀和位置,并配合運用高濃度的飽和熒光染料,可以迅速的檢測出核酸片段中GC含量和單堿基的突變。近年來,公司引進了RocheLightCycler@480I1和ABIVIIA7全自動熒光定量PCR系統，為客戶提供專業化個性化的甲基化HRM檢測服務。操作流程:.待測基因序列片段或位點甲基化引物設計(300p以內)。.利用甲基化轉移酶修飾的DNA和非甲基化修飾的DNA制備標準品(0%，1%，5%。10%,20%,50%,100%梯度HRM標準曲線)●亞硫酸氫鹽處理樣品DNA.上機檢測●數據處理,形成報告(包括實驗過程、試劑耗材、熒光PCR儀原始文件、測序文件等)。課題免費設計:文獻搜索、查閱,分析實驗思路的合理性。江西實驗服務創新服務
數據分析：●數據產出統計及質量評估●Reads與參考基因組序列或轉錄組序列比對●Reads在基因組上的分布統計●轉錄組表達量的計算●基因差異表達分析●差異基因生物學通路分析●差異基因的GO分析●非編碼RNA(ncRNA)鑒定(轉綠本組裝、鑒定已知轉錄本及預測新轉錄本)●非編碼RNA(IncRNA)定量與差異表達分析●非編碼RNA(IncRNA)功能預測。長鏈非編碼RNAs(longnon-codingRNAS,IncRNAS)是一類長度大于200nt且不編碼蛋白質的RNAs(不含rRNA)。***存在于各種生物體內。IncRNAs參與表觀遺傳、轉錄以及轉錄后等多水平的調控過程,在生命活動中具有重要作用。本公司IncRNA測序服務使用高通量測序技術結合先進的生物信息學分析,一次性獲得樣本中幾乎全部的IncRNAs信息,為您***、深入地研究IncRNAs的功能提供了全新的工具。寧夏實驗服務中標率高本芯片包括參與NO生物合成、過氧化物代謝的基因和參與氧化應激反應的基因。
SNP主要應用領域：遺傳圖譜繪制的標記,疾病診斷和疾病易感基因的鑒別，藥物基因組學研究和新藥篩選藥物代謝和藥物遺傳學，法醫鑒定和個體識別，群體選傳學研究和遺傳多態性分析,物種鑒定、菌種鑒定等。
SNP檢測方法1.測序法:所有SNP的檢測方法中,對待檢測片段進行直接擴增、測序是**為準確的方法,也是SNP分析的金標準。純合型SNP位點的測序峰為單一峰型,而雜合型SNP位點的測序峰為套峰(如下圖),因而很容易將其區分開來。通過直接測序方法進行SNP檢測的檢出率接近100%。該技術主要通過直接測序的方法來確定位點的基因型,這種分型方法準確性比較高,但費用大。如果需要檢測的幾個SNP位點正好位于一個測序單元內(長度小于700bp),則單個位點的分型費用可***降低,這種分型技術不失為一種良好選擇。對于準確性要求特別高或樣本量特別小(幾個或幾十個)的項目,這種分型技術很適合。
焦磷酸測序(Pyrosequencing)技術是由4種酶(DNA聚合酶(DNApolymerase).ATP硫酸化酶(ATPsulfurytase).熒光素酶(ucifrase)和三磷酸腺苷雙磷酸酶(Apyrase))催化的同一反應體系中的酶級聯化學發光反應。每一輪測序反應體系中.只加入一種脫氧核苷酸三磷酸(dNTP)。如果該dNTP與模板配對,則會在DNA聚合酶的作用下,添加到測序引物的3'末端,同時釋放出一一個分子的焦磷酸(PPi)。摻入的dNTP和釋放的PPi是等量的。CpG甲基化焦磷酸測序檢測法基于引|物延伸的Pyrosequencing技術,通過將鏈合成過程中釋放出的焦磷酸(PPi)轉化成光信號來監測鏈的合成過程。通過檢測CpG對應位點上CT滲入的比例對目標位點的甲基化程度進行定量分析方法。通過檢測CpG對應位點上CT滲入的比例對目標位點的甲基化程度進行定量分析方法。
利用序列捕獲技術將全基因組外顯子區域DNA捕捉并富集后進行高通量測序的基因組分析方法。是-種選擇基因組的編碼序列的高效策略,外顯子測序相對于基因組重測序成本較低,對研究已知基因的SNP.IndelI等具有較大的優勢。簡介:全外顯子組(Exome)是指基因組中全部外顯子區域的總和，人類的外顯子組約占基因組的1%~2%,包含了蛋白質合成，的重要信息,是基因行使功能**直接的體現。絕大部分疾病或性狀相關的變異位于外顯子區域,與全基因組重測序相比,全外顯子組測序*針對外顯子區域內部和邊界區域的DNA進行測序,覆蓋度更深,數據準確性更高,可更加經濟.高效地發現與疾病或表型相關的個體速傳變異及罕見突變。人全外顯子組測序技術已逐步應用到單基因致病基因和復雜疾病易感基因研究中。為在基因組范圍內快速研究任-物種已知的smallRNA的表達情況和預測挖掘新的smallRNA調控分子提供工具。江蘇實驗服務售后服務
了解這些機制可以幫助我們對藥物的化學結構進行修改來避免藥物的毒性反應。江西實驗服務創新服務
RNA甲基化修飾約占所有RNA修飾的60%以上，而N6甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m6A)是高等生物mRNA和IncRNAs.上**為普遍的修飾。目前發現microRNA,circRNA,lncRNA,rRNA,tRNA和snoRNA上都有發生m6A修飾。m6A修飾主要發生在RRACH序列中的腺嘌呤上，其功能由“編碼器(Writer)”、“消碼器(Eraser)”和“讀碼器(Reader)"7決定。“編碼器(Writer)”即甲基轉移酶，目前已知這個復合物的成分有METL3,METTIL14,WTAP和KIAA1429;而ALKBHS和FTO作為去甲基酶(消碼器)可逆轉甲基化;m6A由m6A結合蛋白識別，目前發現m6A結合蛋白(讀碼器)有YTH結構域蛋白(包括YTHDF1,YTHDF2.YTHDF3，YTHDC1和YTHDC2)和核不均一蛋白HNRNP家族(HNRNPA2B1和HNRNPC)。在基因表達、蛋白翻譯和RNA剪切等正常生物過程中具有重要作用。近來有研究顯示m6ARNA甲基化在乳腺*、惡性血液病、膠質母細胞瘤、宮頸*等多種**的發***展中具有重要作用。江西實驗服務創新服務
公司特色是以各式高通量二代測序為基礎，利用生物數據信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細胞實驗平臺，提供課題整體設計外包、撰寫SCI論文一站式服務。公司實驗平臺落座在漕河涇開發區浦江園區，實驗平臺開放參觀，客戶可隨時參觀實驗并參與實驗課題的進度，保證您的實驗是在您的指導下完成。
1.整體課題外包服務：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經典通路研究，設計的課題均具有后續實驗課題的延展性，為您的標書奠定較好的基礎
2.標書申請：提供標書課題設計、撰寫，標書部分基礎實驗的開展，設計的標書均符合科研前沿熱點，中標率很高。
3.提供熱點**文獻技術支持，探討科研前沿熱點研究：trfRNA，DNA/RNA甲基化，外泌體，自噬，WNT等相關研究
4.二代測序：轉錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序
5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實驗：DNA甲基化實驗（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實驗
7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，FISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學實驗