隨后，作者研究了YTHDC2是否通過SLC7A11抑制胱氨酸攝取。當(dāng)YTHDC2在H1299細(xì)胞中過表達(dá)時(shí)，并過表達(dá)SLC7A11完全恢復(fù)了受損的胱氨酸攝取(圖4E-G)。ATF4是SLC7A11轉(zhuǎn)錄的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，ATF4在H1299細(xì)胞中上調(diào)SLC7A11(圖4H、I)。過表達(dá)YTHDC2仍然拮抗ATF4的作用(圖4H-J)。因此，YTHDC2損害依賴于SLC7A11的胱氨酸攝取。結(jié)合臨床分析，YTHDC2表達(dá)下調(diào)，而SLC7A11表達(dá)上調(diào)(圖4K、L)，并且它們?cè)?*中呈負(fù)相關(guān)(圖4M)。
5.YTHDC2以m6A依賴的方式使SLC7A11mRNA不穩(wěn)定
作者為研究YTHDC2是否在轉(zhuǎn)錄被阻斷后調(diào)控SLC7A11mRNA的穩(wěn)定性，通過泛轉(zhuǎn)錄抑制劑ActD處理H1299和H1975細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)YTH結(jié)構(gòu)域?qū)τ赮THDC2縮短H1299細(xì)胞中SLC7A11mRNA的半衰期至關(guān)重要(圖5A)。在H1975細(xì)胞中，CRISPR/Cas9技術(shù)使YTHDC2功能喪失，然后YTHDC2重構(gòu)，進(jìn)一步證實(shí)YTHDC2加速了SLC7A11mRNA的衰變(圖5B)。EXOSC10是一種外切酶，負(fù)責(zé)3’-5’外切酶活性。EXOSC10的缺失，減弱了YTHDC2縮短SLC7A11mRNA半衰期的作用(圖5C、D)。在藥理學(xué)水平上，用兩種泛-RNase抑制劑DEPC和RNasin***H1299細(xì)胞，也阻斷了YTHDC2的功能(圖5D)。 caspase-3抗體是一種***用于檢測凋亡細(xì)胞的標(biāo)志物。MCD誘導(dǎo)課題第三方實(shí)驗(yàn)室
我們發(fā)現(xiàn)，在circMAPK1穩(wěn)定下調(diào)的SGC7901和MGC803細(xì)胞中，與對(duì)照組相比，MAPK1-109aa與MEK1的結(jié)合明顯減少，而MAPK1與MEK1的結(jié)合增加(圖7f)。在MKN45和BGC823細(xì)胞中，IRES突變時(shí)MAPK1-109aa不翻譯。因此，MAPK1與MEK1的結(jié)合沒有明顯變化。然而，過表達(dá)circMAPK1后，MAPK1與MEK1的結(jié)合***減少，而MAPK1-109aa與MEK1的結(jié)合***增加(圖7g)。因此，以上結(jié)果表明MAPK1-109aa與MAPK1競爭結(jié)合MEK1。隨后的Western blot結(jié)果也證實(shí)，在過表達(dá)circMAPK1的細(xì)胞系中，MAPK1-109aa***升高，磷酸化的MAPK1/2降低，而在circMAPK1敲低的細(xì)胞中則相反(圖7h)。此外，MAPK1的下游效應(yīng)因子，如p-ELK1、p-c-Fos、p-c-JUN和p-RSK，也被過表達(dá)的circMAPK1***抑制(圖7i)。這些結(jié)果表明，circMAPK1編碼的MAPK1-109aa通過抑制MAPK1信號(hào)通路發(fā)揮抑*作用。pcr課題CRO生命科學(xué)領(lǐng)域內(nèi)的精細(xì)研究。
2、CDK4/6i介導(dǎo)的CD8+T細(xì)胞記憶獲得是細(xì)胞固有的
為了確定在CDK4/6i處理的**中觀察到的T細(xì)胞記憶是否由于CDK4/6在這些細(xì)胞內(nèi)的直接抑制，在體外將活化的小鼠CD8+T細(xì)胞暴露于CDK4/6i中，并監(jiān)測Tcm獲取和分裂數(shù)。***CDK4/6i暴露0、24、72h后，Tcm細(xì)胞平均分裂數(shù)減少，同時(shí)細(xì)胞比例增加，且呈劑量依賴性，*在24h內(nèi)發(fā)生(Fig.2A)。這表明CDK4/6i不是簡單地抑制分化，而是直接促進(jìn)記憶形成，表明細(xì)胞周期機(jī)制與分化之間存在方向性關(guān)系。通過3'RNA-seq進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，在CDK4/6i處理后，記憶相關(guān)轉(zhuǎn)錄本增加，GSEA分析證實(shí)了記憶相關(guān)特征的富集，以及細(xì)胞周期相關(guān)特征的減少，包括E2F靶點(diǎn)(Fig.2B-E)。矛盾的是，CDK4/6抑制也誘導(dǎo)了效應(yīng)相關(guān)轉(zhuǎn)錄本，包括Gzma、Gzmc和Pdcd1(Fig.2B-C)，這與之前CDK4/6i促進(jìn)T細(xì)胞活化的報(bào)道一致。
相反，miR-199a-5p抑制劑處理可提高WT小鼠脾CD4+T細(xì)胞中Sirt1的表達(dá)(圖5E)，并降低衰老標(biāo)志物p21,p16和乙酰p53水平(圖5F)。***，與MRL/lpr相比，hUC-MSCs可增加miR-199a-5p的產(chǎn)生，表明hUC-MSCs是miR-199a-5p來源的關(guān)鍵調(diào)控因子(圖5G)。在transwell系統(tǒng)中，hUC-MSCs與MRL/lpr脾CD4+T細(xì)胞共培養(yǎng)48h后，細(xì)胞內(nèi)miR-199a-5p升高，Sirt1基因表達(dá)降低，CD4+T細(xì)胞中衰老標(biāo)志物的表達(dá)水平恢復(fù)，而miR-199a-5p抑制劑處理后仍處于抑制狀態(tài)(圖5G-I)。總的來說，這些數(shù)據(jù)表明hUC-MSCs通過miR-199a-5p介導(dǎo)的Sirt1下調(diào)和隨后p53去乙酰化的減少，增加了脾臟CD4+T細(xì)胞的衰老。課題CRO服務(wù)找上海英拜。
2）阿爾茨海默病患者皮質(zhì)區(qū)受損星形膠質(zhì)細(xì)胞中氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的脂質(zhì)過氧化水平升高
由于NOX4蛋白水平在AD患者受損星形膠質(zhì)細(xì)胞中升高，我們研究NOX4在AD患者受損星形膠質(zhì)細(xì)胞氧化應(yīng)激中的作用。我們用免疫熒光染色法檢測了AD患者或非AD供者大腦顳葉皮質(zhì)組織中GFAP陽性星形膠質(zhì)細(xì)胞中4-HNE的蛋白水平(圖2A)。免疫熒光染色顯示，AD患者(AD)皮質(zhì)區(qū)分子層GFAP陽性星形膠質(zhì)細(xì)胞中4-HNE陽性染色強(qiáng)度相對(duì)于非AD供者增加(圖2A、B)。此外，AD患者皮質(zhì)區(qū)ML中受損的GFAP陽性星形膠質(zhì)細(xì)胞4-HNE陽性染色強(qiáng)度高于非AD供者(圖2A和B)。AD患者中4-HNE與GFAP亞細(xì)胞共定位陽性的受損星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量***增加(圖2C)。此外，相對(duì)于非AD供體，4-HNE在AD患者的NOX4陽性星形膠質(zhì)細(xì)胞***定位(圖2D)。AD患者的NOX4和4-HNE陽性星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量相對(duì)于非AD供者***增加(圖2E)。這些結(jié)果提示AD患者受損星形膠質(zhì)細(xì)胞中氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的脂質(zhì)過氧化水平升高。 課題外包服務(wù)找英拜放心安心。星形膠質(zhì)細(xì)胞
TRF測序課題整體服務(wù)。MCD誘導(dǎo)課題第三方實(shí)驗(yàn)室
Il4ra缺陷小鼠的M2 樣巨噬細(xì)胞減少和再生失調(diào)
為了探索再生過程中胰腺巨噬細(xì)胞的調(diào)節(jié)機(jī)制，我們進(jìn)行了基因集富集分析 (GSEA) 以比較第 3 天和第 1 天巨噬細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄組譜。巨噬細(xì)胞的 M2 ***和 IL4 刺激特征從第 3 天開始富含巨噬細(xì)胞。我們發(fā)現(xiàn)，表達(dá)IL-4和IL-13分別提高在第1天，和表達(dá)Il4ra自第1天升高，達(dá)到峰值在第3天。為了進(jìn)一步確定受體和配體的細(xì)胞來源，在 AP 損傷后***從胰腺中分離并比較了 CD45.2 +和 CD45.2 -細(xì)胞，有趣的是，Il4ra1被顯性免疫細(xì)胞上表達(dá)（CD45.2 +），而IL4和IL13中主要表達(dá)于實(shí)質(zhì)細(xì)胞（CD45.2 - ）。此外，通過使用Il4ra 缺陷小鼠，我們證明了 IL4Rα 信號(hào)在 AP 損傷后胰腺修復(fù)/再生過程中介導(dǎo)了 M2 巨噬細(xì)胞的極化。值得注意的是，與它們的對(duì)應(yīng)物相比，來自Il4ra -/-小鼠的胰腺在第 3 天和第 5 天具有更多的 ADM 結(jié)構(gòu)。總的來說，這些發(fā)現(xiàn)表明 IL4/IL4Rα 軸是 AP 恢復(fù)過程中胰腺巨噬細(xì)胞 M2 極化所必需的，發(fā)揮***功能來控制 ADM 形成的程度。 MCD誘導(dǎo)課題第三方實(shí)驗(yàn)室
公司特色是以各式高通量二代測序?yàn)榛A(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，提供課題整體設(shè)計(jì)外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)平臺(tái)落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實(shí)驗(yàn)平臺(tái)開放參觀，客戶可隨時(shí)參觀實(shí)驗(yàn)并參與實(shí)驗(yàn)課題的進(jìn)度，保證您的實(shí)驗(yàn)是在您的指導(dǎo)下完成。
1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計(jì)的課題均具有后續(xù)實(shí)驗(yàn)課題的延展性，為您的標(biāo)書奠定較好的基礎(chǔ)
2.標(biāo)書申請(qǐng)：提供標(biāo)書課題設(shè)計(jì)、撰寫，標(biāo)書部分基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)的開展，設(shè)計(jì)的標(biāo)書均符合科研前沿?zé)狳c(diǎn)，中標(biāo)率很高。
3.提供熱點(diǎn)**文獻(xiàn)技術(shù)支持，探討科研前沿?zé)狳c(diǎn)研究：trfRNA，DNA/RNA甲基化，外泌體，自噬，WNT等相關(guān)研究
4.二代測序：轉(zhuǎn)錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序
5.芯片：信號(hào)通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實(shí)驗(yàn)：DNA甲基化實(shí)驗(yàn)（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實(shí)驗(yàn)
7.實(shí)時(shí)定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(靶基因驗(yàn)證，過表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)