USF2促進circACTN4在BC中的表達為
了研究 circRNA 在 BC發展中的功能，利用芯片分析檢測了4對BC組織和*旁組織中circRNA表達特征。共發現85個***差異表達的circRNAs， 63 個上調和22個下調circRNAs。熱圖顯示了14個上調的circRNA，其中circACTN4是失調**嚴重的一個，差異高達10倍。根據circBase數據庫發現circACTN4來自位于人類19號染色體上的ACTN4基因，產生于ACTN4外顯子2至外顯子7（共571bp），通過 Sanger 測序驗證了反向剪接連接點。為了驗證circACTN4的環形結構，使用聚斂引物和發散引物擴增環狀 circACTN4 和線性 ACTN4。通過FISH和核質分離PCR觀察到circACTN4主要位于BC細胞的細胞核中， circACTN4在*組織中的表達高于*旁組織。 在786-O細胞中穩定轉染靶向circSDHC的shRNA.專業基金標書構思
2）circPDE4B調節軟骨細胞活力和ECM代謝
為了評估circPDE4B在ECM代謝中的作用，我們分別用三種circPDE4BsiRNA轉染HCs(圖2A)。我們使用CCK-8方法評估了circPDE4B對軟骨細胞活力的影響。結果顯示，敲低circPDE4B的表達降低了軟骨細胞的活力(圖2B)。此外，shRNA腺病毒抑制circPDE4B***提高了MMP3、MMP13和ADAMTS4的表達，而SOX9、COL2A1(或COL2蛋白)和aggrecan在HCs/MCs中的表達下調(圖2C和圖2D)。免疫熒光進一步證實，circPDE4B敲除影響了HCs/MCs的MMP3、MMP13、COL2和aggrecan水平(圖2E、F)。同時，HCs的阿爾新藍染色顯示，circPDE4B抑制導致軟骨細胞功能障礙，蛋白多糖藍染較少(圖2G)。然后通過CCK-8實驗(圖2H)發現，過表達circPDE4B增加了軟骨細胞的活力。在過表達circPDE4B-HCs中，MMP3、MMP13和ADAMTS4的mRNA和蛋白水平下調，SOX9、COL2A1(或COL2蛋白)和aggrecan的mRNA和蛋白水平上調(圖2I-L)。此外，HCs的阿爾新藍染色表明，與單獨IL-1β***相比，circPDE4B過表達和IL-1β共處理減少了軟骨破壞(圖2M)。這些數據表明，circPDE4B/circPde4b在HCs中可以促進細胞活力，抑制分解代謝作用。 國家自然科學基金標書 修改單細胞核測序能夠獲得組織的細胞圖譜.
為了表征RIT1相互作用組，我們進行了親和純化-質譜篩選(圖1A)，確定MAD2(MAD2L1)和p31conmet(也稱為MAD2L1結合蛋白)作為新的和選擇性的RIT1結合伙伴，不與其他RasGTPases相互作用(圖S1A和S1B)。MAD2參與了在未附著的動點處催化MCC形成的SAC信號放大，MCC由MAD2、CDC20、BubR1和Bub3.1組成。16MAD2和p31conmet二聚促使我們評估RIT1是否與MAD2和p31conmet直接相互作用。Pulldown分析顯示，這兩種相互作用都直接且**于MAD2和p31conmet二聚(圖1B)。此外，RIT1-MAD2相互作用在斑馬魚和果蠅中是保守的(圖1C)。為了確定RIT1與MAD2或p31conmet的結合是否受其GTPase周期的調控，我們評估了與GTPgS(一種不可水解的GTP類似物)加載的RIT1的結合。這表明這兩種相互作用都不依賴于RIT1的鳥苷核苷酸負載狀態(圖1D)。一致地，與MAD2和p31conmet的結合不受與疾病相關的RIT1突變的影響(圖S1C)。這些結果表明，結合界面位于對GDP/GTP結合敏感的RIT1s開關I和II結構域外，因此MAD2和p31conmet不是典型的RIT1效應蛋白。MAD2和p31conmet的結構相似性突出了RIT1的潛在結合競爭。
肝細胞*(HCC)是全球第四大致命惡性**類型。然而，參與HCC進展的確切分子機制尚不清楚。本研究發現缺氧誘導的CFL1通過***PLD1/AKT通路增加HCC的增殖、遷移、侵襲和EMT。本文于2021年3月發表在《Clinical and Translational Medicine》IF：7.919期刊上。
1、CFL1在HCC中高表達門靜脈瘤血栓(PVTT)是HCC預后不良的重要危險因素。取3對HCC和配對的PVTT組織進行iRTAQ檢測，挖掘到946個差異表達蛋白。圖1A列舉了*****上調的10個蛋白，其中CFL1在HCC中***高表達。WB和免疫組化表明CFL1在*旁組織，HCC和PVTT組織中表達逐漸上調（圖1B-C）。隨后在100對HCC和**組織，以及6株細胞系中檢測了CFL1的表達，證實CFL1在HCC中高表達。 circRNAs在腎細胞*(RCC)中的表達模式和生物學功能.
***KDM6B的組蛋白去甲基化酶活性可***其靶基因的轉錄。因此，使用雙熒光素酶實驗來分析M1靶基因的啟動子活性。KDM6B的過表達特異性地刺激了促炎因子IL-6、IL-1β和TNF-α編碼基因的啟動子活性（圖5A）。相反，沉默KDM6B活性則導致他們的啟動子活性***，而過表達KDM6B降低了H3K27me3的水平（圖5B）。ChIP檢測顯示，與對照相比，THP-1細胞中KDM6B的過表達或敲除***增加或減少了KDM6B啟動子在不同區域的占用(圖5C-D)。與此結果一致，啟動子區域H3K27me3的募**降低或增加當KDM6B過表達或沉默時（圖5E-F）。總之，下調KDM6B可提高H3K27me3水平和促炎因子編碼基因的轉錄活性，導致***M1極化。 RNA pull-down實驗探索circNDUFB2是否通過與蛋白質相互作用發揮功能。代謝標書服務價格
FMT處理對脊髓損傷后小鼠腸道屏障通透性有影響。專業基金標書構思
二、INPP4B增強pik3a突變ER+乳腺*和乳腺上皮細胞增殖
GFP-INPP4B在MCF-7和T47D ER+乳腺*細胞中表達，這兩種細胞分別有PIK3CAE545K和PIK3CAH1047R高活化突變.*細胞進行非錨定細胞生長的能力是細胞轉化的一個標志。GFP-INPP4B***增加了軟瓊脂中MCF-7細胞集落大小(2.1倍)和T47D細胞集落大小(1.8倍)，但對集落數量沒有影響(圖2a-c)。與細胞增殖增加相一致。與載體對照相比，GFP-INPP4B在血清剝奪后增強了MCF-7細胞的增殖(1.7倍)(圖2d, e)，但不影響在含血清培養基中生長的MCF-7細胞的增殖。過表達GFPINPP4B的MCF-7細胞中，egf刺激的AKTS473和AKTT308磷酸化水平略有降低(圖2f-h)。 專業基金標書構思
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5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實驗：DNA甲基化實驗（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實驗
7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，FISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學實驗