piRNA-30473通過調控WTAP的表達介導m6A的甲基化
為了進一步探討piRNA-30473在DLBCL中轉錄組調控中的作用，我們在轉染antiagomir-30473后48h檢測m6A整體甲基化水平。結果顯示，轉染antiagomir-30473的細胞總體m6A水平降低(圖3A,3B)。METTL3,METTL14,WTAP,FTO和ALKBH5是關鍵的m6A甲基轉移酶或去甲基化酶，它們的失調可能導致DLBCL中m6A修飾譜異常。結果發現，抑制piRNA-30473降低了WTAP的表達(圖3C,3D)，而其他蛋白表達無明顯差異。同時，免疫共沉淀表明，antiagomir-30473處理降低了WTAP與METTTL3和METTTL14的相關性(圖3E)。接下來為了證明piRNA-30473在WTAPmRNA中是否存在結合位點，作者先使用miRNA特異性靶檢測算法確定假定的結合位點(圖3F)，后續實驗結果證明，piRNA-30473通過與WTAP的3’-UTR結合，降低了WTAPmRNA的衰減，進而增強了mRNA的穩定性(圖3G,3H)。 Tempol減輕PCOS大鼠腸道微生物失調.武漢褪黑素標書
褪黑素可減少TBI誘發的小鼠腦行為缺陷和病變體積
為了利用褪黑素對TBI誘導的神經系統結果和病變體積的影響，進行了行為分析以及HE染色。關于線握測試，與假手術組相比，TBI在第1-8天導致運動表現顯著下降，但與TBI組相比，褪黑素和Lip-1的***改善了第2-6天的運動表現。在MWM測試中觀察到，與假手術組相比，TBI在第10-15天導致潛伏期延長，但是褪黑素和Lip-1***的TBI小鼠均表現出比TBI小鼠明顯更短的逃避潛伏期。曠場試驗中，與假手術組相比，TBI組的動物的總距離、中心移動距離和花費時間明顯縮短。褪黑素***可顯著逆轉上述參。HE染色顯示，褪黑素和Lip-1***的TBI組在TBI后第16天的病變體積明顯小于TBI組。兩者合計，結果提供了褪黑素***小鼠中TBI后改善運動，記憶和焦慮結局以及病變體積的證據。 成都凋亡標書這些細胞表現出更強的攻擊性和增殖能力.
三、RIT1及時調節后期進入和染色體分離保真度
MAD2和p31conmet調節SAC的持續時間，反過來，也調節有絲分裂的持續時間。這促使我們研究RIT1是否通過與MAD2和p31conmet的直接關聯來影響SAC。通過RNAi或crispr介導的敲除去除RIT1可延長有絲分裂進程(圖3A和S3A S3E)。此外，SAC的藥理抑制挽救了RIT1耗盡的作用，表明RIT1以SAC依賴的方式影響有絲分裂。此外，RIT1的缺失增加了染色體分離錯誤的發生率(圖3B)，這表明RIT1不僅對有絲分裂的及時進展至關重要，而且RIT1蛋白水平的失調也破壞了正常的SAC功能。LZTR1或RIT1M90I表達的缺失加速了異步生長細胞的有絲分裂進程，這一效應依賴于PM釋放RIT1(圖3C、S3H和S3I)。同樣，RIT1 WT或M90I的過表達部分覆蓋了藥物誘導的SAC反應(圖3D和S3J)。RIT1M90I的異位表達以依賴MAD2-和p31come結合的方式***增加了有絲分裂錯誤的發生率，包括滯后染色體和橋接染色體(圖3G和S3O)。因此，我們觀察到在表達RIT1M90I的細胞中非整倍體率增加，但在表達不能結合MAD2/p31conmet的突變體的細胞中卻沒有(圖3H和S3P)。這些結果表明，RIT1水平的增加會導致與MAD2和p31conmet的直接相互作用，從而降低有絲分裂的保真度。
2）SsD響應相關基因和通路的鑒定
為了進一步確定可能與白血病細胞中SsD敏感性相關的潛在靶點，我們對SsD處理過的NB4細胞進行了RNA測序。我們共發現3732個上調基因和3442個下調基因(圖2A)。為了揭示SsD的潛在機制，我們進行了富集分析并研究了差異基因相關的通路。我們篩選了上調和下調基因富集的**個通路(圖2B)。此外，我們使用GSEA研究SsD處理影響的信號通路(圖2C)。我們的數據顯示，SsD處理導致MYC靶點、E2F靶點和G2M檢查點信號級聯受到抑制。有趣的是，這些發現與FTO抑制劑和內源性FTO的下調抑制的信號通路相一致。因此，SsD的抑制作用可能有助于FTO抑制細胞周期和增殖(圖2D-E)。此外，絕大多數通過FTO敲低而上調的信號通路對SsD富集，同樣，絕大多數被SsD抑制的信號通路也被FTO敲低而抑制(圖2F)。更重要的是，SsD介導的m6A相關基因的變化具有***的一致性(圖2G)。綜上所述，SsD可能參與了FTO介導的m6ARNA甲基化途徑。 腸道微生物發酵的某些**終產物可進入血液影響宿主***系統的生理功能。
Ran***1對Ran-GTP的水解對于核出口過程中貨物進入細胞質至關重要。Ran***1維持核/細胞質Ran梯度，其丟失會導致細胞死亡。在非tbi對照組大腦中，Ran***1在核膜內分布均勻，少數細胞表現出強烈的核信號。但tbi暴露后，Ran***1染色分布異常，細胞核和細胞質強度高(圖2E）。與對照組相比，腦外傷后Ran***1分布異常的細胞百分比明顯增高(圖2F）。反復的創傷損傷會干擾Ran***1在大腦中的定位。TBI大鼠損傷皮質(同側半球)下海馬區域的腦細胞表現出錯誤定位和/或聚集(箭頭)或強烈的Ran***1核染色(箭頭)，而假手術對照組主要是光滑的核周染色(圖2H)。與假對照相比，創傷性腦損傷大鼠的NUP62顯示了明顯的胞質(箭頭)和核(箭頭)錯位，假對照顯示了很少的胞質(而沒有核)錯位(圖2J)。創傷性腦損傷腦組織中NUP62病理細胞的百分比明顯高于假手術對照組(圖2K).探討SCI腸道微生物失調與神經炎癥之間的分子相互作用。SNP檢測標書國家自然科學基金
生物素標記的miR-127-3p比陰性對照探針捕獲的circSDHC.武漢褪黑素標書
3）DRD2重新編碼MφM1表型，下調IL-6和IL-10
據報道，DRD2可調節M1的極化。結果顯示，在DRD2表達水平較高的BrCa組織中，M1Mφ的浸潤增加，M2Mφ的浸潤減少(圖3A)。為進一步研究DRD2對TAMs的調控作用，構建了BrCa與Mφ共培養體系。當Mφ與表達DRD2的BrCa細胞共培養時，qRT-PCR顯示M1表型標記增加，M2Mφ標記下調(圖3B-C)。qRT-PCR也證實了載體轉染的BrCa細胞將Mφ調節為M2型(圖3C)[12]。WB結果顯示，表達DRD2的BrCa細胞上調M1標記iNOS，下調M2標記CD206(圖3D)。IF染色顯示，與表達DRD2的**細胞共培養后，Mφ表現為M1表型(圖3E)。上述結果表明，BrCa中的DRD2具有將Mφ重新編碼為M1表型的能力。為了探索使Mφ向M1表型分化的關鍵調控因子，我們進行了細胞因子陣列分析。結果表明，TNF-α和兩種誘導M1極化的經典細胞因子IFNγ均未增加。而與Mφ共培養后，DRD2***下調IL-6和IL-10(圖3F)。分析熒光值，進一步證實IL-6和IL-10下調(圖3F)。因此，DRD2可以將Mφ重新編碼為M1表型，并在crosstalk過程中***下調IL-6和IL-10。 武漢褪黑素標書
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