褪黑素不能挽救Fth 敲低HT-22細胞中機械性損傷引起的鐵死亡
為了進一步證實褪黑素對Tth小鼠在Fth- KO小鼠中的上述作用，將HT-22細胞系用siRNA轉染，然后在體外進行機械刮擦損傷。siRNA敲低Fth可以降低Fth的蛋白質水平。鑒于脂質過氧化是鐵死亡的標志，使用DCF和BODIRY 581/591 C11作為評估了溶質ROS。與對照組+刮擦損傷組相比，siFth +刮擦損傷組細胞的熒光強度顯著增加，表明siFth增強了HT-22細胞中機械刮擦損傷引起的ROS產生的上調。重要的是，與未經***的siFth組相比，用褪黑素處理siFth轉染的HT-22細胞未能顯著減少刮擦損傷后ROS的上調。 2108年俞立團隊明確闡述了收集和檢測遷移體的實驗方法。蛋白組學科研動物模型構建
B16F10、Py230、MDAMB436、HCC1954和4T1細胞對GPX4的直接抑制劑(RSL3和ML210)和xc轉運體(erastin)的抗性明顯增強。這些藥物對所有27HCS細胞活力的影響被ferroptosis抑制劑ferrostatin逆轉，證實鐵死亡確實是這些藥物靶向的目標。進一步研究表明GPX4抑制劑(RSL3和ML210)導致27HCS細胞中脂質過氧化物大量增加，但在27HCR細胞系中沒有觀察到。結論是，在適應脂質誘導的代謝應激中，細胞可以通過穩定GPX4的表達，增加GPX4依賴的抗氧化系統的活性，或減少脂質過氧化物的產生來避免鐵死亡，進而產生對27HC的抗性。自噬醫學相關科研贈送提供技術路線鑒定的前列腺瘤細胞內源性雄***受體網絡。
HoxBlinc在造血中的轉基因表達導致小鼠的AML樣致死疾病
已有研究表明，小鼠造血干細胞(HSCs)中人源化NPM1c+敲入等位基因(NPM1c/+)的***會導致Hox基因過度表達、增強self-real和骨髓增生擴大，以及遲發性AML的發展。由于NPM1c+***HOXBLINC，而HOXBLINC對NPM1c+介導的轉錄程序和白血病發生至關重要，因此確定HOXBLINC的***是否足以導致異常造血和類似于NPM1c/+小鼠的髓系惡性**非常重要。HoxBlinc在長期(LT)和短期(ST)造血干細胞中表達高，在祖細胞(MPP,CMP和GMP)中表達降低，除了B220+B細胞，在成熟細胞系中進一步降低（圖2a）。HoxBlinc在造血中的表達模式提示該lncRNA可能在調控HSPC功能中發揮重要作用。為了研究HoxBlinc活化對體內正常造血和白血病發生的影響，構建了HoxBlinc轉基因(Tg)小鼠模型，在Vav1啟動子和增強子(HS321/45-vav載體)的控制下，將全長小鼠HoxBlinccDNA插入小鼠基因組，以確保轉基因在造血系統中的特異性表達(圖2b)。獲得2只HoxBlincTg小鼠。將該轉基因插入到Tg第1系18q染色體上Bin1基因的內含子中(圖2c)。BM細胞中HoxBlincRNA的表達水平分別是TgLine#1和#2內源性HoxBlinc表達水平的18倍和3倍(圖2d)。
circNDUFB2觸發NSCLC細胞的免疫防御反應
為了研究參與circNDUFB2的信號通路，使用RNA測序（RNA-seq）進行了轉錄組分析。結果表明circNDUFB2過表達影響934個基因的表達水平，其中743個基因上調，191個基因被下調?；虮倔w生物學過程（GO_BP）和KEGG途徑富集分析表明circNDUFB2觸發了免疫防御和I型干擾素（IFNs）信號傳導。基因集富集分析（GSEA）也表明目標基因的信號傳導途徑參與了免疫反應。確認了在circNDUFB2過表達的NSCLC細胞中一組免疫基因表達被上調，而circNDUFB2敲低降低了NSCLC細胞中這些基因的水平。這些結果表明，過量表達circNDUFB2，而不是其具有相同序列的線性RN**段，導致免疫基因上調。 酶聯免疫吸附試驗（ELISA）證實circNDUFB2過表達顯著增加了細胞培養上清液中CXCL10，CXCL11，CCL5和IFNβ的水平，而circNDUFB2敲低降低了細胞培養上清液中這些細胞因子的水平。這些結果證明circNDUFB2在NSCLC細胞中引發免疫應答。 降低腸上皮細胞尿酸的產生。
接下來，研究了CRC細胞來源的外泌體對巨噬細胞M2極化的影響。如Fig.3e所示，當與巨噬細胞共培養時，標記有DiO(綠色)的CRC細胞來源的外泌體被未染色的巨噬細胞內化。相比于低表達miR-934的細胞的外泌體孵育的巨噬細胞或PBS孵育的細胞，M2標記物(CD206,arginase-1,IL10和CD163)的表達在高表達miR-934的CRC細胞的外泌體孵育的巨噬細胞中***增加，而M1標記物(iNOS和IL-1β)幾乎無差異（Fig.3f,g）。
為了確定CRC細胞來源的外泌體miR-934是否誘導巨噬細胞的M2極化，首先生成了miR-934mimics和anti-miR-934來過表達或抑制miR-934的表達。與對照組相比，轉染miR-934mimics的巨噬細胞M2標記物(CD163、CD206、arginase-1和IL10)的表達明顯增加（Fig.3h,i）。此外，用anti-miR-934、miR-934mimics或其陰性對照載體轉染HCT-8和HT29細胞，提取其外泌體并添加到PMA處理的THP-1細胞中。結果顯示，轉染anti-miR-934或miR-934mimics的CRC細胞的外泌體中M2標記物(CD206、arginase-1、IL10和CD163)在PMA處理的THP-1細胞中表達明顯低于或高于載體對照組（Fig.3j,k）。綜上所述，證實CRC細胞來源的外泌體miR-934可以誘導巨噬細胞M2極化。 上海英拜生物提供可視化實驗過程參觀。黑龍江科研服務兩年
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為了驗證circMYH9是否通過p53途徑調節SG的合成。qRT-PCR和WB證明了circMYH9對p53的負調節。Nutlin-3可***p53。Nutlin-3處理過表達circMYH9的LoVo細胞逆轉了p53和MDM2的下調，并抑制了SG生物合成途徑基因表達和細胞增殖。而circMYH9耗盡的HCT116細胞中的p53沉默則顯示出相反的效果。還在過度表達circMYH9的LoVo細胞中用shRNA敲低了PHGDH。PHGDH抑制顯示出與Nutlin-3處理類似的效果，但不影響p53表達。此外，與對照細胞相比，具有circMYH9敲除的體內異種移植物的IHC顯示出更高的p53表達和更低的PHGDH和PSPH表達。相比之下，circMYH9過表達異種移植物的IHC顯示p53的表達較低，而PHGDH和PSPH的表達高于載體細胞的表達。這些結果證實了circMYH9在p53通路和從頭SG代謝的調節中的主要作用。蛋白組學科研動物模型構建
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