7）NOX4通過氧化應激誘導的人體星形膠質細胞的脂質過氧化促進鐵死亡
為了探討NOX4調控AD星形膠質細胞氧化應激誘導的細胞死亡的分子機制，我們檢測NOX4的升高是否能通過氧化應激誘導的人星形膠質細胞脂質過氧化促進鐵死亡。我們用免疫熒光染色法測定了4-HNE在人星形膠質細胞中的蛋白水平。免疫熒光染色顯示，與對照組相比，NOX4的升高增加了4-HNE蛋白的水平，增加了質膜中脂質過氧化源性液滴的含量，細胞的形狀出現收縮(圖7A)。NOX4過表達使4-HNE陽性細胞數量***增加(圖7B)。NOX4過表達增加了4-HNE水平和MDA水平(圖7C)。值得注意的是，與對照組相比，NOX4的升高增加了鐵的積累，這是鐵死亡的特異性標志(圖7D)。 英拜提供可靠的技術咨詢。血細胞科研實驗外包
對于我們檢測到的與血漿外泌體相關的大多數細胞因子，BC 外泌體的蛋白質組學評估并未識別出同源受體。然而，分析我們的質譜數據，我們發現了大量的硫酸乙酰肝素 (HS) 和硫酸軟骨素 (CS) 蛋白聚糖，包括 CD44、HSPG2、glypican-1（GPC -1）、多聚糖（VCAN）和 syndecan-1（SDC1），在 BC 外泌體中。有趣的是，兩種鼠 BC 細胞來源的 EO771 和 PyMT 外泌體的蛋白多糖譜非常不同。定量地，ELISA 分析顯示 MDA-MB-231 細胞衍生的外泌體表現出與 EO771 相似的蛋白聚糖譜。GAG的存在于蛋白聚糖已顯示出結合細胞因子在不同細胞背景。因此，我們評估了這種結合在外泌體環境中是否也可能存在，并表明 versican、syndecan-1 和 CD44，以及 HSPG2，與外泌體結合的 CCL2 共沉淀。此外，添加分別催化蛋白聚糖的 HS 和 CS 鏈降解的肝素酶 III (HepIII) 和軟骨素酶 ABC (ChABC) 裂解酶，減少了 CCL2 與外泌體的結合。總體而言，這些數據表明細胞外細胞因子可以通過蛋白聚糖的外泌體表面 GAG 側鏈與*細胞分泌的外泌體結合。
METTL14作用于ELMO13'utr區特定的m6A修飾位點
作者進一步研究了METTL14如何加快ELMO1mRNA的看降解。CLIP-PCR結果顯示，ELMO1在METTL14組比IgG組更富集，提示METTL14能特異性結合MSC中ELMO1mRNA轉錄本。先前的一項研究表明METTL14主要與mRNA的3'UTR結合，促進mRNA變性。在雙熒光素酶報告基因實驗中，與對照組相比，野生型中帶有ELMO13’utr的報告基因質粒的熒光素酶活性明顯降低，而突變型METTL14則沒有。接下來，作者構建了帶有突變ELMO13'UTR的報告質粒用來驗證ELMO1的m6A修飾位點。發現與對照組相比，只有突變的1型ELMO13’UTR的報告質粒的熒光素酶活性恢復到正常水平。進行2，3型ELMO13’UTR突變的報告質粒的熒光素酶活性與野生型ELMO13’UTR報告質粒的熒光素酶活性相當。通過CLIP檢測，發現ELMO1mRNA結合得失YTHDF2和YTHDF3，而不是YTHDF1、YTHDC1和YTHDC2。
qRT-PCR結果表明，暴露于miR-144模擬物處理的鼻咽*細胞的HUVECs中miR-144上調，而暴露于miR-144inhibitor處理的鼻咽*細胞的HUVECs中miR-144下調(圖3C)。Transwell實驗結果表明，miR-144過表達EVs足以增強HUVECs的遷移和侵襲，而miR-144抑制EVs則表現出相反的趨勢(圖3D和3E)。此外，我們還通過傷口愈合實驗檢測HUVECs的增殖和遷移能力(圖3F)。結果顯示，與NC模擬EV組相比，miR-144模擬EV組細胞的創面愈合率升高，說明C666-1-和SUNE1細胞來源的EVmiR-144均促進HUVECs的增殖和遷移。與NC抑制EV組相比，miR-144抑制EV組的細胞創面愈合率降低，提示C666-1-和SUNE1EV細胞EVmiR-144抑制后，HUVECs的增殖和遷移受到抑制。大黃酸處理改變腸道菌群組成。
circPDE3B/miR-4766-5p/LAMA1軸通過***EMT促進ESCC進展
我們研究了circPDE3B/miR-4766-5p/LAMA1軸參與ESCC進展的基本機制。KEGG分析、GSVA、GSEA表明LAMA1高表達與EMT***密切正相關，提示EMT可能是LAMA1在ESCC中致*作用的原因。正如預期的那樣，westernblotting顯示，LAMA1敲低后，MMP2/7/9、N-cadherin、Snail、Slug和vimentin的蛋白水平降低，E-cadherin的蛋白水平升高。此外，circPDE3B沉默后也觀察到類似的抑制作用。拯救實驗發現，miR-4766-5pinhibitor共轉染***逆轉了circPDE3B沉默誘導的EMT抑制作用，然而LAMA1siRNA共轉染***逆轉了circPDE3B過表達誘導的EMT促進作用。總之，circPDE3B/miR-4766-5p/LAMA1軸通過***EMT促進ESCC進展。 英拜生物提供生物科學內的專業的技術咨詢，技術合作。成都眼缺血綜合癥科研
METTL14是其***的潛在靶點。血細胞科研實驗外包
以上數據提示，miR-934異常高表達與結直腸***進展及肝轉移***相關。生存分析顯示，與miR-934表達較低的患者相比，miR-934表達較高的患者總生存期(OS)和無病生存期(DFS)較低（Fig.1f,g）。因此，在CRLM患者中，miR-934高表達與CRLM進展和預后不良呈正相關。
2、miR-934存在于CRC細胞衍生的外泌體中
miR-934在HCT-8和LoVo的CM中的表達***高于其它細胞（Fig.2a）。隨后，研究發現HCT-8和LoVo的CM中miR-934的表達***高于細胞核和細胞質（Fig.2b,c）。并且，miR-934在CM中的表達不隨RNaseA的處理而改變，而隨RNaseA+TritonX-100的處理***下降（Fig.2d），這表明細胞外的miR-934被膜包裹，而不是直接分泌。因此，推測miR-934可能是被外泌體傳輸。電鏡和納米顆粒追蹤分析表明，miR-934表達水平較高的CRC細胞分泌的外泌體比miR-934表達水平較低的CRC細胞分泌的外泌體更多（Fig.2e,f）。各組外泌體標志物CD9，ALIX，TSG101均被WB檢測到（Fig.2g）。為了闡明miR-934是否主要來源于CRC細胞的外泌體，使用GW4869抑制CRC細胞的外泌體分泌，發現miR-934在CRC細胞來源的外泌體中的表達水平明顯高于外泌體耗盡的CRC細胞（Fig.2h）。
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