1.熒光素酶報告基因載體①螢火蟲熒光素酶報告基因載體pGL3LuciferaseReporterVector具有螢火蟲熒光素酶報告基因，但該報告基因不含啟動子，不能表達螢火蟲熒光素酶。在該報告基因前導入外來啟動子，相應轉錄因子與外來啟動子結合，影響熒光素酶報告基因的表達。我們首先根據需要檢測的轉錄因子(TF，transcriptionfactor)，選擇與之對應的promotor/TRE(transcriptionresponseelement)，并將這個promotor/TRE的啟動序列克隆到載體上（位置與報告基因相鄰），然后將載體質粒轉入細胞，如果細胞內TF具有活性，TF與promotor/TRE結合，熒光素酶報告基因得到表達，熒光強度發生變化；反之，如果細胞內相應的TF沒有活性，熒光素酶報告基因在細胞內不表達。我們利用靈敏的Bethord公司的LumatLB9507熒光檢測儀來檢測細胞內報告基因的熒光強度，從而對轉錄因子進行活性分析。②海腎熒光素酶報告基因載體phRL-SV40Vector具有海腎熒光素酶報告基因，該報告基因含SV40的啟動子及增強子，能高水平表達海腎熒光素酶基因。可作為檢測轉染頻率的內對照，使實驗值可以規一化。細胞轉染準備將含目的microRNA靶基因的報告基因載體、內參質粒和microRNAmimics或|共轉染293T或Hela細胞。臨床醫學技術服務分子生物學實驗
人原代細胞分離技術：***系統的組織是由2類細胞組成,可大致分為神經元和神經膠質細胞。神經元是大腦的解剖、功能和營養單元。盡管大小和形狀有很大的變化,所有的神經元有著共同的形態特征,是一個高度復雜通信網絡的關鍵組分。作為神經系統的主要信號單元,神經元是動態極化的細胞。人類大腦中包含約1x1011神經元,每個神經元可以接觸至少10000個其他神經元。HN-mb分離自人的中腦，原代凍存，冰凍運輸。每管細胞密度超過5x105/ml。細胞經neurofilament.MAP2和B-tubulinIl的免疫熒光鑒定。本細胞經檢測不含HNV-1.HBV.HCV.支原體、細菌、酵母菌和***。HN-mb不推薦長期培養或增值培養。自噬醫學相關技術服務整體服務b。用甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳。檢測RNA純度和完整性。
原位雜交（insituhybridization,ISH）是用標記的DNA或RNA為探針，根據堿基互補配對原則，在原位檢測組織細胞內特定核酸序列的方法。根據探針的標記物是否直接被檢測，原位雜交可分為直接法和間接法。直接法主要用放射性同位素、熒光及某些酶標記的探針與靶核酸進行雜交，通過放射自顯影、熒光顯微鏡術或成色酶促反應直接顯示。間接法用半抗原標記探針，通過免疫組織化學法對半抗原定位，間接顯示探針與靶核酸形成的雜交體。非放射性標記的原位雜交具有安全、經濟、靈敏度高等優點，因而生物素標記探針digaoxin標記探針迅速發展。標記探針迅速發展。
英拜為您提供的實時熒光定量PCR技術服務，全部實驗皆使用進口試劑完成；主要實驗步驟如下：1.設計并合成RealtimePCR引物。2.引物溶解后使用Promega的TaqDNA聚合酶進行含SG（SYBR®Green）的PCR反應的優化。3.客戶樣品RNA抽提4.RNA質量檢測a．紫外吸收測定法測定RNA在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，以計算其濃度并評估RNA純度。b．使用甲醛電泳試劑（ambion）進行變性瓊脂糖凝膠電泳，檢測RNA純度及完整性。5.按照逆轉錄酶（Invitrogen或Promega）使用說明將樣品RNA逆轉錄為cDNA。6.制備標準曲線樣品：進行相對定量，需要先將樣品的目的基因以及管家基因進行PCR擴增，其產物進行梯度稀釋用于做標準曲線。7.標準曲線樣品和待測樣品分別加入到含SG的RealTimePCR反應液中（其中TaqBeadTM熱啟動聚合酶來自Promega公司），進行RealTimePCR擴增和檢測。8.檢測結果進行標準曲線分析，以對待測樣品的目的基因進行定量。相對定量實驗需要進一步用樣品的目的基因測得值除以管家基因測得值以校正誤差，所得結果**某樣品的目的基因相對含量。9.提供實驗報告，包括詳細的實驗方法及實時熒光定量PCR實驗結果及相關圖表。2)進行多重LDR(MultiplexLDR)進行特異性分型檢測。3)通過測序儀電泳讀取檢測結果。
人原代細胞分離技術：神經元是大腦的解剖、功能和營養單元。盡管大小和形狀有很大的變化,所有的神經元有著共同的形態特征，是一個高度復雜通信網絡的關鍵組分。作為神經系統的主要信號單元,神經元是動態極化的細胞。人類大腦中包含約1x1011神經元，每個神經元可以接觸至少10000個其他神經元。腦干神經元主要通過調節心率、呼吸、睡眠循環、意識、意識等功能,提供主要的運動和感覺神經支配和綜合功能。分離出的不同腦區的神經元作為區域特定的疾病和變性研究的***模型,可用于神經毒理學和大腦發育研究HN-bs分離自人的腦干,原代凍存,冰凍運輸。每管細胞密度超過5x105/ml.細胞經neurofilament.MAP2和B-tubulinIl的免疫熒光鑒定。本細胞經檢測不含HIV-1.HBV.HCV.支原體、細菌、酵母菌和***。HN-bs不推薦長期培養或增值培養。每管細胞密度超過1x106/ml.細胞經neurofilament.MAP2和-ulinlI的兔疫熒光鑒定。河南技術服務實驗可參觀
免疫組織化學（Immunohistochemistry，IHC），即免疫組化，是利用免疫學中抗原抗體特異性結合的原理。臨床醫學技術服務分子生物學實驗
microRNA靶點的預測利用Targetscan,miRanda,PicTar軟件得到目的microRNA的預測靶點序列(客戶提供)。獲得microRNA靶點序列根據提供的靶序列，合成兩條互補的單鏈DNA模板。或者,設計引物PCR打增目的microRNA靶基因3"UTR序列。microRNA靶序列克隆將合成的兩條單鏈退火成雙鏈(具有粘性末端),或將PCR產物雙酶切,后連入經過同樣雙酶切的miR-reporter載體中,連接產物轉化大腸桿菌DH5a。陽性克隆鑒定。挑選轉化的菌落,PCR篩選含有插入片段的陽性克隆,測序驗證克隆的序列和目的microRNA靶序列一致。
臨床醫學技術服務分子生物學實驗
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4.二代測序：轉錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序
5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實驗：DNA甲基化實驗（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實驗
7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，FISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學實驗