3）DRD2重新編碼MφM1表型，下調IL-6和IL-10
據報道，DRD2可調節M1的極化。結果顯示，在DRD2表達水平較高的BrCa組織中，M1Mφ的浸潤增加，M2Mφ的浸潤減少(圖3A)。為進一步研究DRD2對TAMs的調控作用，構建了BrCa與Mφ共培養體系。當Mφ與表達DRD2的BrCa細胞共培養時，qRT-PCR顯示M1表型標記增加，M2Mφ標記下調(圖3B-C)。qRT-PCR也證實了載體轉染的BrCa細胞將Mφ調節為M2型(圖3C)[12]。WB結果顯示，表達DRD2的BrCa細胞上調M1標記iNOS，下調M2標記CD206(圖3D)。IF染色顯示，與表達DRD2的**細胞共培養后，Mφ表現為M1表型(圖3E)。上述結果表明，BrCa中的DRD2具有將Mφ重新編碼為M1表型的能力。為了探索使Mφ向M1表型分化的關鍵調控因子，我們進行了細胞因子陣列分析。結果表明，TNF-α和兩種誘導M1極化的經典細胞因子IFNγ均未增加。而與Mφ共培養后，DRD2***下調IL-6和IL-10(圖3F)。分析熒光值，進一步證實IL-6和IL-10下調(圖3F)。因此，DRD2可以將Mφ重新編碼為M1表型，并在crosstalk過程中***下調IL-6和IL-10。 ATM對PTEN的磷酸化導致PTEN在質膜上重新分布。湖北課題細胞實驗
與對照組相比，來自轉染miR101/miR-423模擬物的THP-1細胞上清液的外泌體***抑制Daoy細胞的增殖能力。我們用轉染miR-101-3p/miR-423-5p的THP-1單核細胞培養上清液進一步培養Daoy細胞，發現Daoy細胞的增殖能力受到***抑制，而在含GW4869的培養基中培養后則無明顯變化。這些結果表明，對細胞增殖的影響至少部分歸因于外泌體的存在，并且GW4869處理可部分逆轉這些影響。與THP-1細胞類似，我們發現HMO6細胞也能分泌含有miR-101-3p和miR-423-5p的外泌體， MB組織中存在CD68+細胞。***，我們從MB患者和健康對照者的外周血中分離CD14單核細胞。與對照組相比，在MB患者來源的CD14單核細胞培養上清中，外體miR-101-3p和miR-423-5p的表達更高?？傊?，這些結果表明MB患者的單核細胞-巨噬細胞分泌含有miR-101-3p和miR-423-5p的外泌體，這些外泌體可以轉移到MB細胞。安徽課題細胞實驗可以上傳原始的fast文件。
為了證實IRE1在誘導前致瘤極化中的作用，將LysM-Cre Cas9小鼠產生的BMDM分別用含有scramble guide RNAs (gRNAs)或IRE1靶向gRNAs的慢病毒轉導，以產生對照BMDM或IRE1缺陷BMDM。與對照組BMDM相比，IRE1缺陷BMDM中IRE1表達較低，研究發現CM誘導的致瘤前極化在IRE1缺陷BMDM中被抑制，這表明CM誘導的IRE1活性增強了巨噬細胞中致瘤前極化。傳統的內質網應力誘導劑，包括tunicamycin和thapsigargin在內，均能誘導內質網應激反應，但不能使BMDM分化為致瘤表型。以上表明，與傳統內質網應激反應相比，sXBP1控制的特殊信號級聯反應是加強巨噬細胞對**細胞衍生因子反應的免疫抑制活性所必需的。
3、細胞內脂質積累增加是抗27HC的一個特征，也和致瘤性有因果關系隨后探究27HC抵抗增加致瘤性和轉移性的生物化學機制。首先探討了27HC下調膽固醇/脂類合成的機制可能在抵抗細胞中被破壞的可能性。然而，基因表達分析顯示，在基礎條件下，編碼這些過程的關鍵調控步驟的mRNA變化不大，而且在敏感和耐藥細胞中，27HC仍然是它們表達的有效抑制劑。這表明在27HC抵抗細胞中，27HC對SREBP活性的負反饋保持完整。然而，使用BODIPY染色評估脂質含量時，發現所有27HCR細胞都積累了大量的中性脂質，以細胞質脂滴(LDs)的形式儲存。提示為了抵消27HC對膽固醇和脂類合成的抑制作用，27HCR細胞可能增加了它們攝取中性脂質的能力。為了直接解決這一問題，并確認積累的脂質的身份，對HCC1954細胞的27HCR和27HCS衍生物進行了***的脂質組學分析，發現細胞對27HC抗增殖作用的一個特點是脂質攝取增加和脂質生物合成的減少。阻斷atm依賴的磷酸化會損害DNA損傷后PTEN的亞細胞再分配。
9.阻斷SUMOylation抑制EVs介導的ELNAT1誘導的淋巴結轉移
用si-NC或si-UBC9#1轉染的對照或ELNAT1過表達UM-UC-3細胞分泌的EVs處理HLECs，結果顯示過表達ELNAT1***促進了體外BCa細胞分泌的EVs誘導淋巴血管生成，而沉默UBC9逆轉了這一作用（Figure9A-C）。IVIS證明UM-UC-3-EVELNAT1增強了體內腘窩淋巴結轉移，而沉默UBC9抑制了這種作用（Figure9D,E）。UM-UC-3-EVELNAT1+siUBC9#1組的腘窩LNs體積比UM-UC-3-EVELNAT1組?。‵igure9F）。與UM-UC-3-EVVector組相比，UM-UC-3-EVELNAT1增加了小鼠足底**的淋巴管數量，而下調UBC9的表達導致EVs介導的ELNAT1誘導的淋巴管數量逐漸減少（Figure9G,H）。此外，UM-UC-3-EVELNAT1+si-UBC9#1組的LN生成時間長于UM-UC-3-EVELNAT1組（Figure9I）。綜上所述，這些結果表明UBC9誘導的SUMOylation抑制EVs介導的ELNAT1誘導的BCa淋巴管生成和LN轉移。 致力于醫學相關領域的實驗技術服務和相關生物醫學課題的研究。安徽課題細胞實驗
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TGFBR1是RMRP促進增殖、侵襲和遷移的關鍵靶點
在我們之前的研究中，我們發現TGFBR1與NSCLC的增殖和轉移相關，GSEA結果顯示RMRP可能參與了TGFB通路。TCGA數據庫顯示TGFBR1與RMRP表達呈正相關。因此，我們假設RMRP可能以TGFBR1為靶點。此外，在A549或H1299細胞中，RMRP敲低或過表達后，TGFBR1的表達發生改變。在A549細胞中，下調RMRP后，TGFBR1的表達降低，BAX/Bcl-2升高，而TGFBR1過表達后，效果相反。在H1299細胞中，過表達RMRP后，TGFBR1的表達增加，BAX/Bcl-2的表達減少，而TGFBR1敲低后則相反。此外，我們還探索了TGFBR1參與RMRP促進NSCLC生長和增殖的機制。結果顯示，TGFBR1過表達后，shRMRP對NSCLC細胞生長和增殖的抑制作用得到恢復，而TGFBR1敲低后則相反 湖北課題細胞實驗
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