為了進(jìn)一步研究MAO-A是否作為巨噬細(xì)胞自主因子直接調(diào)控TAM極化從而影響抗**免疫，進(jìn)行了巨噬細(xì)胞過繼轉(zhuǎn)移**實驗。從Maoa WT和KO小鼠中獲取BM細(xì)胞，然后培養(yǎng)成骨髓源性巨噬細(xì)胞(bone marrow macrophages, BMDMs)。然后將這些Maoa WT或KO BMDMs與B16-OVA黑色素瘤細(xì)胞混合，皮下注射到BoyJ WT受體小鼠中建立實體**（圖2g）。在本實驗中，MAO-A缺乏的比較***于TAM細(xì)胞。在接受Maoa KO BMDMs小鼠中觀察到**生長抑制（圖2h-i），TAM免疫抑制markers下調(diào)（圖2j），免疫刺激markers上調(diào)（圖2k-l），以及增強(qiáng)**浸潤C(jī)D8+T細(xì)胞***（圖2m）。綜上所述，這些體內(nèi)研究表明MAO-A作為一種直接調(diào)節(jié)TAM極化的自主因子，從而影響T細(xì)胞抗**反應(yīng)性和影響**生長。
6.ELNAT1通過UBC9誘導(dǎo)的hnRNPA1的SUMOylation被封裝到EVs中
UBC9可以催化靶蛋白的SUMOylation來調(diào)節(jié)它們與生物分子的相互作用和細(xì)胞運輸。Figure6A顯示，通過co-IP分析，觀察到一個明顯的15~25kDa條帶被hnRNPA1特異性富集。此外，IP分析顯示UBC9過表達(dá)增強(qiáng)了hnRNPA1的SUMO2連接，表明UBC9誘導(dǎo)hnRNPA1的SUMOylation（Figure6B）。將hnRNPA1中SUMOylation修飾的位點賴氨酸3（K3）和賴氨酸113（K113）用精氨酸替代（Figure6C），并通過co-IP分析表明，證明了hnRNPA1中SUMOylation修飾的位點是K113（Figure6D）。ELNAT1過表達(dá)上調(diào)了hnRNPA1K113的SUMO化，而敲除UBC9則消除了這個影響（Figure6E）。 臨床醫(yī)學(xué)課題歡迎咨詢了解客戶的研究方向以及所能提供的樣本類型和樣本量確定研究思路。
qRT-PCR結(jié)果表明，暴露于miR-144模擬物處理的鼻咽*細(xì)胞的HUVECs中miR-144上調(diào)，而暴露于miR-144inhibitor處理的鼻咽*細(xì)胞的HUVECs中miR-144下調(diào)(圖3C)。Transwell實驗結(jié)果表明，miR-144過表達(dá)EVs足以增強(qiáng)HUVECs的遷移和侵襲，而miR-144抑制EVs則表現(xiàn)出相反的趨勢(圖3D和3E)。此外，我們還通過傷口愈合實驗檢測HUVECs的增殖和遷移能力(圖3F)。結(jié)果顯示，與NC模擬EV組相比，miR-144模擬EV組細(xì)胞的創(chuàng)面愈合率升高，說明C666-1-和SUNE1細(xì)胞來源的EVmiR-144均促進(jìn)HUVECs的增殖和遷移。與NC抑制EV組相比，miR-144抑制EV組的細(xì)胞創(chuàng)面愈合率降低，提示C666-1-和SUNE1EV細(xì)胞EVmiR-144抑制后，HUVECs的增殖和遷移受到抑制。
TransCirc數(shù)據(jù)庫整合了各種與翻譯相關(guān)的證據(jù)，檢索的結(jié)果能直觀的呈現(xiàn)翻譯產(chǎn)物的相關(guān)證據(jù)信息。數(shù)據(jù)共分析了328080種已知人類circRNA的翻譯潛能，有蛋白質(zhì)譜證據(jù)（MS）的circRNA有168個，核糖體印跡或多聚核糖體分析（RP/PP）的證據(jù)4284個circRNA，潛在翻譯產(chǎn)物序列分析（SeqComp）的301100個circRNA。有IRES預(yù)測結(jié)果的314138個circRNA，有m6A修飾位點信息的39397個circRNA，有翻譯起始位點信息（TIS）的9394個circRNA，有ORF信息的305016個circRNA。阻斷atm依賴的磷酸化會損害DNA損傷后PTEN的亞細(xì)胞再分配。
1、在響應(yīng)CDK4/6抑制中瘤內(nèi)記憶類CD8+T細(xì)胞的表現(xiàn)
為了***評價CDK4/6抑制對抗**T細(xì)胞免疫的影響，使用多模式單細(xì)胞測序(CITE-seq)分析了CDK4/6抑制劑palbociclib或?qū)φ仗幚淼腗C38-OVA**小鼠的瘤內(nèi)T細(xì)胞群體(Fig.1A)。維度分析顯示MC38-OVA**中有10個不同的T細(xì)胞群(Fig.1B)。用CDK4/6i處理的**有較低頻率的CD4+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Foxp3+Tregs)，而CD8+記憶類T細(xì)胞頻率更高，以Tcf7、Sell、Bcl2和Cd7高表達(dá)為特征(Fig.1B-D)。CD8+T細(xì)胞池的基因動態(tài)表達(dá)揭示來源于CDK4/6i處理的小鼠的CD8+**免疫浸潤（TILs）向更早、更像干細(xì)胞的分化狀態(tài)傾斜(Fig.1E-F)。與此一致，較早出現(xiàn)假時間軌跡的細(xì)胞表達(dá)更高水平的記憶相關(guān)基因(Tcf7,Sell,Il7r)，和更低水平的效應(yīng)相關(guān)基因(Prf1,Gzmb)和耗損標(biāo)志物(PD-1,TIM3)(Fig.1G)。 提供分子生物以及到后續(xù)動物建模的一整套服務(wù)。臨床醫(yī)學(xué)課題實驗可參觀
也是***PDAC肝轉(zhuǎn)移的潛在靶點。課題動物模型構(gòu)建
接下來為了證明，SUMOylation對BCas誘導(dǎo)的淋巴內(nèi)皮管的形成和遷移作用，通過其特異性抑制劑阻斷SUMOylation （2D-08）明顯抑制了該誘導(dǎo)過程（Figure 1 G-I）。以上數(shù)據(jù)表明，UBC9異常高表達(dá)與膀胱*進(jìn)展和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移正相關(guān)，SUMOylation參與膀胱*的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。
2.EVs介導(dǎo)的ELNAT1過表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)
EVs介導(dǎo)的lncRNA轉(zhuǎn)運是**細(xì)胞與TME之間通過信號轉(zhuǎn)導(dǎo)發(fā)生的一個關(guān)鍵過程。作者采集各5例的健康志愿者與BCas患者的尿液，通過NGS測序確定了EVs中l(wèi)ncRNA的整體表達(dá)譜，結(jié)合與SUMOylation途徑的相關(guān)性，**終篩選出EVs中異常高表達(dá)的lncRNAELNAT1（Figure2A,B）。結(jié)合BCa與LN轉(zhuǎn)移，ELNAT1在BCa與LN轉(zhuǎn)移中高表達(dá)（Figure2C,D），并且ELNAT1過表達(dá)與BCa患者預(yù)后不良相關(guān)（Figure2E,F）。另外，在瘤內(nèi)和瘤旁區(qū)域ELNAT1的表達(dá)與淋巴管密度正相關(guān)（Figure2G,H），提示ELNAT1***參與BCa的淋巴管生成。 課題動物模型構(gòu)建
公司特色是以各式高通量二代測序為基礎(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細(xì)胞實驗平臺，提供課題整體設(shè)計外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實驗平臺落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實驗平臺開放參觀，客戶可隨時參觀實驗并參與實驗課題的進(jìn)度，保證您的實驗是在您的指導(dǎo)下完成。
1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計的課題均具有后續(xù)實驗課題的延展性，為您的標(biāo)書奠定較好的基礎(chǔ)
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6.表觀遺傳實驗：DNA甲基化實驗（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實驗
7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實驗