褪黑素可挽救TBI后皮層的鐵蓄積和神經元損傷
為了進一步研究褪黑素在TBI后鐵蓄積和神經元損傷中的假定作用，在TBI后第3天，在受傷的皮層中觀察到了Fe2 +，Fe3+，總鐵含量顯著增加。而褪黑素或Lip-1抑制TBI誘導的血清和同側皮層中鐵含量的上調的。Perls的藍色染色表明，TBI后第7天鐵陽性細胞的數量顯著增加，褪黑素或Lip-1***組的鐵陽性細胞少于對照組。鑒于TBI誘導的鐵超載伴隨著Fth表達的上調，使用免疫熒光染色觀察了TBI后神經元中Fth的表達。發現與假手術組相比，模型組中Fth陽性神經元的***增加，而褪黑素和Lip-1處理顯著降低了Fth陽性神經元。與假手術組相比，受傷的神經元的細胞體在TBI后7天出現胞質萎縮或核固縮。褪黑素和Lip-1處理可減輕這些組織病理學變化。TBI后第7天， FJB染色測定腦部神經元變性，發現TBI導致大腦皮層變性神經元的數量增加，但是褪黑素和Lip-1給藥明顯減少了變性神經元的數量。這些數據表明褪黑素可防止TBI誘導的鐵蓄積并防止同側皮質的神經元損傷。 FMT處理***增加了SCI小鼠腸道菌群的豐富度。推薦標書細胞實驗
外周血單個核細胞(PBMCs)梯度離心純化是研究人體免疫健康和疾病的臨床相關細胞的主要來源。像大多數其他人體組織一樣，PBMC是一種復雜的、異構的細胞類型混合物，來源于共同的干細胞祖細胞。盡管不同的PBMC細胞類型之間的基因組大部分是不變的，但每種免疫細胞類型執行重要的和不同的功能。理解控制細胞系規范、細胞成熟、***狀態和響應細胞內外信號的功能多樣性的基因組調控景觀，是理解健康和疾病中的免疫系統的關鍵.
**近單細胞基因組方法的改進使復雜細胞類型混合物的調控染色質景觀的輪廓成為可能。特別是，基于液滴的單核或單細胞轉座酶可及染色質分析(snATAC-seq, scATAC-seq, dscATAC-seq, mtscATAC-seq)允許在單細胞分辨率下分析開放染色質。有前景的新方法將scATAC-seq與同時測量核mRNA或與細胞表面表位結合。 推薦標書細胞實驗研究腸道微生物組和宿主循環代謝產物之間的關系。
4、hnRNPA2B1在外泌體miR-934向巨噬細胞轉移中發揮作用
據報道，外泌體RNA的分泌需要一種特定的RNA結合蛋白來轉運。通過RNApull-down分析和質譜分析，鑒定了三種可能參與miR-934轉運的RNA結合蛋白，并發現敲除hnRNPA2B1可以降低外泌體miR-934的表達（Fig.4a,b）。hnRNPA2B1是一種RNA結合蛋白，通過與特定基序GGAG/CCCU結合，參與miRNAs的運輸和轉錄后調控。特別是，由于miR-934序列中有兩個GGAG基序，我們推測hnRNPA2B1可能通過與GGAG序列結合，介導miR-934包裝成外泌體的過程。此外，miRNApull-down分析顯示，在細胞質和外泌體中，miR-934和hnRNPA2B1之間存在***的結合關系，然而，突變miR-934的結合序列(GGAG)可削弱這種結合（Fig.4c）。RNA免疫沉淀分析進一步證明，無論是在CRC細胞及其外泌體裂解物中，miR-934在anti-hnrnpa2b1抗體組中比在anti-IgG抗體組中更***富集（Fig.4d）。此外，敲除hnRNPA2B1可以抑制外泌體miR-934從HCT8和LoVo細胞轉移到巨噬細胞的過程（Fig.4e）。因此，這些結果證實hnRNPA2B1可以通過與miR-934的GGAG序列結合，介導miR-934包裝到CRC細胞外泌體中，并將外泌體miR-934轉移到巨噬細胞中。
2）circPDE4B調節軟骨細胞活力和ECM代謝
為了評估circPDE4B在ECM代謝中的作用，我們分別用三種circPDE4BsiRNA轉染HCs(圖2A)。我們使用CCK-8方法評估了circPDE4B對軟骨細胞活力的影響。結果顯示，敲低circPDE4B的表達降低了軟骨細胞的活力(圖2B)。此外，shRNA腺病毒抑制circPDE4B***提高了MMP3、MMP13和ADAMTS4的表達，而SOX9、COL2A1(或COL2蛋白)和aggrecan在HCs/MCs中的表達下調(圖2C和圖2D)。免疫熒光進一步證實，circPDE4B敲除影響了HCs/MCs的MMP3、MMP13、COL2和aggrecan水平(圖2E、F)。同時，HCs的阿爾新藍染色顯示，circPDE4B抑制導致軟骨細胞功能障礙，蛋白多糖藍染較少(圖2G)。然后通過CCK-8實驗(圖2H)發現，過表達circPDE4B增加了軟骨細胞的活力。在過表達circPDE4B-HCs中，MMP3、MMP13和ADAMTS4的mRNA和蛋白水平下調，SOX9、COL2A1(或COL2蛋白)和aggrecan的mRNA和蛋白水平上調(圖2I-L)。此外，HCs的阿爾新藍染色表明，與單獨IL-1β***相比，circPDE4B過表達和IL-1β共處理減少了軟骨破壞(圖2M)。這些數據表明，circPDE4B/circPde4b在HCs中可以促進細胞活力，抑制分解代謝作用。 FMT處理可能促進了創傷性脊髓損傷后神經元的存活和軸突再生。
6）M1-Exos通過傳遞miR-155上調ROS水平，損害bEnd.3細胞線粒體功能
我們研究了外泌體miR-155與bEnd.3細胞中線粒體功能的關系。我們發現，與miR-NCOE-Exos相比，miR-155OE-Exos處理上調了ROS水平(圖6A和B)，線粒體超氧化物水平(圖6C和D)和線粒體電位(圖6E)；然而，miR-155KD-Exos處理則顯示了相反的結果(圖6A-E)。此外，miR-155OE-Exos可使線粒體腫脹更大，形態更短，線粒體碎片細胞比例更高，而miR-155KD-Exos可減輕線粒體腫脹(圖6F和G)。miR-155OE-Exos處理后的OCR、基礎呼吸、ATP產生、呼吸能力和呼吸逆轉均明顯下降，而miR-155KD-Exos處理減輕了氧化呼吸功能障礙(圖6H和I)。這些結果表明，上調外泌體miR-155可導致過度ROS的產生和線粒體功能障礙。 在786-O細胞中穩定轉染靶向circSDHC的shRNA.內分泌標書國家自然科學基金
DHEA和tempol處理可影響腸道微生物的β-多樣性。推薦標書細胞實驗
為了探究MIR210HG是否參與了一個新的MIR210HG- miRNA -HMGA2調控網絡，我們使用TargetScan、miRanda、CLIP-Seq和miRDB生物信息學數據庫來預測與HMGA2結合的mirna(圖3F)。選擇3個軟件程序分析交叉處的miRNAs作為候選miRNAs。通過將野生型雙熒光素酶載體介導的HMGA2構建物共轉染HEK293T細胞，共鑒定和篩選了110個miRNAs。轉染后，23個miRNA轉染細胞的熒光素酶活性***降低(圖3G)。在上述23種miRNAs中，轉染miR-3373p、miR-137、let-7c-5p和miR-98-5p時，熒光素酶活性***降低，其中轉染miR-337-3p和miR-137時，熒光素酶活性降低**多。利用生物信息學數據庫TargetScan預測miR-337-3p和miR-137中與HMGA2結合的位點。雙熒光素酶基因報告基因檢測結果顯示，miR-337-3p和miR-137在其預測的結合位點上結合HMGA2(圖3H)。qPCR結果顯示，miR-337-3p和miR-137負調控HMGA2的表達(圖3I)。采用Pearson’s秩相關法分析MIR210HG與HMGA2表達的相關性，發現HMGA2的表達與MIR210HG呈正相關(圖3 J和K)。這些結果表明MIR210HG可能參與了新的MIR210HG-miR-337-3p/137-HMGA2調控網絡。推薦標書細胞實驗
公司特色是以各式高通量二代測序為基礎，利用生物數據信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細胞實驗平臺，提供課題整體設計外包、撰寫SCI論文一站式服務。公司實驗平臺落座在漕河涇開發區浦江園區，實驗平臺開放參觀，客戶可隨時參觀實驗并參與實驗課題的進度，保證您的實驗是在您的指導下完成。
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7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，FISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學實驗