4、hnRNPA2B1在外泌體miR-934向巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用
據(jù)報道，外泌體RNA的分泌需要一種特定的RNA結(jié)合蛋白來轉(zhuǎn)運。通過RNApull-down分析和質(zhì)譜分析，鑒定了三種可能參與miR-934轉(zhuǎn)運的RNA結(jié)合蛋白，并發(fā)現(xiàn)敲除hnRNPA2B1可以降低外泌體miR-934的表達(dá)（Fig.4a,b）。hnRNPA2B1是一種RNA結(jié)合蛋白，通過與特定基序GGAG/CCCU結(jié)合，參與miRNAs的運輸和轉(zhuǎn)錄后調(diào)控。特別是，由于miR-934序列中有兩個GGAG基序，我們推測hnRNPA2B1可能通過與GGAG序列結(jié)合，介導(dǎo)miR-934包裝成外泌體的過程。此外，miRNApull-down分析顯示，在細(xì)胞質(zhì)和外泌體中，miR-934和hnRNPA2B1之間存在***的結(jié)合關(guān)系，然而，突變miR-934的結(jié)合序列(GGAG)可削弱這種結(jié)合（Fig.4c）。RNA免疫沉淀分析進(jìn)一步證明，無論是在CRC細(xì)胞及其外泌體裂解物中，miR-934在anti-hnrnpa2b1抗體組中比在anti-IgG抗體組中更***富集（Fig.4d）。此外，敲除hnRNPA2B1可以抑制外泌體miR-934從HCT8和LoVo細(xì)胞轉(zhuǎn)移到巨噬細(xì)胞的過程（Fig.4e）。因此，這些結(jié)果證實hnRNPA2B1可以通過與miR-934的GGAG序列結(jié)合，介導(dǎo)miR-934包裝到CRC細(xì)胞外泌體中，并將外泌體miR-934轉(zhuǎn)移到巨噬細(xì)胞中。 提供整體課題外包實驗構(gòu)思。帕金森小鼠模型
HoxBlinc在造血中的轉(zhuǎn)基因表達(dá)導(dǎo)致小鼠的AML樣致死疾病
已有研究表明，小鼠造血干細(xì)胞(HSCs)中人源化NPM1c+敲入等位基因(NPM1c/+)的***會導(dǎo)致Hox基因過度表達(dá)、增強self-real和骨髓增生擴(kuò)大，以及遲發(fā)性AML的發(fā)展。由于NPM1c+***HOXBLINC，而HOXBLINC對NPM1c+介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄程序和白血病發(fā)生至關(guān)重要，因此確定HOXBLINC的***是否足以導(dǎo)致異常造血和類似于NPM1c/+小鼠的髓系惡性**非常重要。HoxBlinc在長期(LT)和短期(ST)造血干細(xì)胞中表達(dá)高，在祖細(xì)胞(MPP,CMP和GMP)中表達(dá)降低，除了B220+B細(xì)胞，在成熟細(xì)胞系中進(jìn)一步降低（圖2a）。HoxBlinc在造血中的表達(dá)模式提示該lncRNA可能在調(diào)控HSPC功能中發(fā)揮重要作用。為了研究HoxBlinc活化對體內(nèi)正常造血和白血病發(fā)生的影響，構(gòu)建了HoxBlinc轉(zhuǎn)基因(Tg)小鼠模型，在Vav1啟動子和增強子(HS321/45-vav載體)的控制下，將全長小鼠HoxBlinccDNA插入小鼠基因組，以確保轉(zhuǎn)基因在造血系統(tǒng)中的特異性表達(dá)(圖2b)。獲得2只HoxBlincTg小鼠。將該轉(zhuǎn)基因插入到Tg第1系18q染色體上Bin1基因的內(nèi)含子中(圖2c)。BM細(xì)胞中HoxBlincRNA的表達(dá)水平分別是TgLine#1和#2內(nèi)源性HoxBlinc表達(dá)水平的18倍和3倍(圖2d)。 鐵死亡課題基礎(chǔ)實驗外包Pex衍生的CD44v6/C1QBP復(fù)合物介導(dǎo)了Pex對肝纖維化和PDAC肝轉(zhuǎn)移的積極作用。
接下來，我們合成了野生型HuR蛋白(WT)和HuR蛋白的截短突變體（即分別為單獨HuR的RNA識別基序(RRM)1的突變體B1、單獨HuRRRM2的突變體B2和單獨HuRRRM3的突變體B3）（圖4C）。同時，我們設(shè)計并合成了生物素標(biāo)記的或未標(biāo)記的探針，分別特異性靶向lnc-PMIF的中心-莖環(huán)和生物素標(biāo)記的或未標(biāo)記的探針，特異性靶向之前報道的與HuR蛋白相互作用的β-actinmRNA的序列。RNA電泳遷移率變動分析(EMSA)發(fā)現(xiàn)只有當(dāng)生物素標(biāo)記的lnc-PMIF探針與WTHuR或截短突變體B3共孵育時，才能檢測到lnc-PMIF-HuR復(fù)合物，這表明HuR的RRM3可介導(dǎo)HuR和lnc-PMIF之間的相互作用。lnc-PMIF與β-actinmRNA競爭與HuR相互作用。過表達(dá)HuR-RRM3后細(xì)胞中β-actin的mRNA和蛋白表達(dá)下降***上調(diào)，遷移活性增強。所有這些表明lnc-PMIF可與HuR的RRM3結(jié)合，中斷HuR-β-actin的相互作用，抑制β-actin的表達(dá)，抑制OPC的遷移。
6.分析hubgene與臨床免疫指標(biāo)的相關(guān)性根據(jù)cBioPortal數(shù)據(jù)庫、TIMER數(shù)據(jù)庫對上述6基因進(jìn)行進(jìn)一步分析，并且計算了與CD8+T細(xì)胞浸潤水平的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)METTL8，HSPB3和ERLIN2）浸潤水平之間的***相關(guān)。
7.鑒定預(yù)后標(biāo)志物通過基于GENT2數(shù)據(jù)庫的Meta生存分析，分析了METTL8，HSPB3和ERLIN2。結(jié)果表明，METTTL8和HSPB3的有較大的預(yù)后價值。使用Kaplan–Meier檢測了METTL8，HSPB3和ERLIN2的預(yù)后價值，結(jié)果表明METTL8和ERLIN2與負(fù)面預(yù)后***相關(guān)。接下來，選擇METTL8作為預(yù)后的生物標(biāo)志物，以進(jìn)行進(jìn)一步的分析。
8.預(yù)后標(biāo)志物METTL8基因富集分析根據(jù)METTL8表達(dá)水平的中位數(shù)，將基于TCGA數(shù)據(jù)庫的LSCC表達(dá)圖譜分為高水平組和低水平組以進(jìn)行GSEA分析。
9.預(yù)后標(biāo)志物METTL8的功能驗證在細(xì)胞中進(jìn)行METTL8的敲低，結(jié)果表明METTL8的敲低可能抑制細(xì)胞凋亡、增殖能力，影響細(xì)胞周期。
在小鼠異種移植成瘤實驗中，進(jìn)行METTL8的干擾，結(jié)果表明METTL8的敲低抑制**生長，一直細(xì)胞增殖和周期。
在正常肺組織與LSCC組織中檢測相關(guān)指標(biāo)表達(dá)情況，與正常組織相比，LUSC組織中METTL8***高表達(dá)，CD8***低表達(dá)。
綜上， METTL8在LSCC**的免疫浸潤中起關(guān)鍵作用。 按照實驗設(shè)計路線和實驗結(jié)果進(jìn)行文章的構(gòu)思與潤色。
OARSI分級(圖6E)進(jìn)一步提示小鼠SHAM+載體和DMM+circPde4b組軟骨降解較少，而DMM+載體和DMM+circPde4b+RIC8A組軟骨降解情況相反。熱板試驗、膝關(guān)節(jié)伸展試驗和電擊刺激跑步機試驗顯示，DMM+載體組和DMM+circPde4b+RIC8A組的不適和膝關(guān)節(jié)疼痛多于SHAM+載體組和DMM+circPde4b組(圖6F)。小鼠膝關(guān)節(jié)的三維微CT重建顯示，DMM+NC組和DMM+circPde4b+RIC8A組比SHAM+載體和DMM+circPde4b組有更多的骨贅(圖6G)。此外，四組中RIC8A和p-p38標(biāo)記的免疫組化染色顯示過表達(dá)circPde4b下調(diào)了RIC8A和p-p38的表達(dá)，從而抑制了DMM手術(shù)引起的OA進(jìn)展(圖6H，I)。綜上所述，在小鼠中，circPde4b和RIC8A參與了OA的發(fā)病機制（圖6J）。
結(jié)論：我們的研究描述了一種新的circRNA在OA中的機制。我們發(fā)現(xiàn)circPDE4B可以作為蛋白質(zhì)降解的支架，在OA的進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。在臨床前動物模型中，CircPDE4B被發(fā)現(xiàn)調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)代謝，阻止軟骨基質(zhì)的形成，證實了其對OA發(fā)生的潛在***作用。機制上，circPDE4B可作為促進(jìn)RIC8A-MID1結(jié)合的支架，降低RIC8A依賴的p38信號通路的***，從而調(diào)節(jié)OA的進(jìn)展。 課題外包服務(wù)找英拜放心安心。巨噬細(xì)胞課題基礎(chǔ)實驗外包
英拜生物對實驗可行性分析。帕金森小鼠模型
女性生殖系統(tǒng)的疾病即為婦科疾病，包括外陰疾病、陰道疾病、子宮疾病、輸卵管疾病、卵巢疾病等。婦科疾病是女性常見病、多發(fā)病。但由于許多人對婦科疾病缺乏應(yīng)有的認(rèn)識，缺乏對身體的保健，加之各種不良生活習(xí)慣等，使生理健康每況愈下，導(dǎo)致一些女性疾病纏身，且久治不愈，給正常的生活、工作帶來極大的不便。英拜生物推出的婦科疾病風(fēng)險評估檢測通過風(fēng)險評估模型來評估個體疾病的發(fā)病風(fēng)險，其意義在于趨利避害，用于進(jìn)行個性化健康管理：個性化保健、個性化用藥、個性化預(yù)防、個性化體檢及采取個性化的行為生活方式等，**終達(dá)到遠(yuǎn)離婦科疾病的目的。英拜生物提供婦科疾病風(fēng)險評估8項檢測：妊娠糖尿病、子宮內(nèi)膜異位、多囊卵巢綜合征等。技術(shù)原理：基因芯片(genechip)是目前生物芯片家族中**完善、應(yīng)用*****的芯片，將許多特定的寡聚核苷酸或DN**段(稱為探針)固定在芯片的每個預(yù)先設(shè)置的區(qū)域內(nèi)，將待測樣本標(biāo)記后同芯片進(jìn)行雜交，利用堿基互補配對原理進(jìn)行雜交，通過檢測雜交信號并進(jìn)行計算機分析，從而檢測對應(yīng)片段是否存在、存在量的多少，以用于疾病的臨床診斷和檢測等眾多方面。運用縮微技術(shù)，基因芯片能夠同時分析成千上萬個生物樣本。帕金森小鼠模型
公司特色是以各式高通量二代測序為基礎(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細(xì)胞實驗平臺，提供課題整體設(shè)計外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實驗平臺落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實驗平臺開放參觀，客戶可隨時參觀實驗并參與實驗課題的進(jìn)度，保證您的實驗是在您的指導(dǎo)下完成。
1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計的課題均具有后續(xù)實驗課題的延展性，為您的標(biāo)書奠定較好的基礎(chǔ)
2.標(biāo)書申請：提供標(biāo)書課題設(shè)計、撰寫，標(biāo)書部分基礎(chǔ)實驗的開展，設(shè)計的標(biāo)書均符合科研前沿?zé)狳c，中標(biāo)率很高。
3.提供熱點**文獻(xiàn)技術(shù)支持，探討科研前沿?zé)狳c研究：trfRNA，DNA/RNA甲基化，外泌體，自噬，WNT等相關(guān)研究
4.二代測序：轉(zhuǎn)錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序
5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實驗：DNA甲基化實驗（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實驗
7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實驗