MAP4K4是絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶家族的成員，可以通過磷酸蛋白MEKK1***MAPK通路。構建pCMV-NM_4834.4和pCMV-NM_1242560.1質粒，分別轉染K1細胞，并通過qRT-PCR驗證了其轉染效率（圖6E）。這兩種變異***增強了K1細胞的增殖和遷移。而截斷型(NM_4834.4)比長型(NM_1242560.1)對增殖和遷移的影響更強（圖6F-G）。此外，MEKK1、MKK4、JNK、MEK、ERK的總磷酸化水平未發生改變，而NM_4834.4和NM_1242560.1兩種變體轉染組的磷酸化水平均高于對照組。更重要的是，與NM_1242560.1相比，NM_4834.4對磷酸- MEKK1、MKK4、JNK、MEK、ERK的影響更強，這表明MAP4K4中第16外顯子的剪切影響了MAPK通路下游蛋白的磷酸化（圖6H）。體內小鼠模型結果證明，注射si-tiRNA-Gly組移植瘤中磷酸化蛋白水平明顯降低，而總蛋白水平與生理鹽水組相比沒有變化（圖6I）。這些結果表明，RBM17介導的tiRNA-Gly誘導的MAP4K4第16外顯子剪接可增強PTC細胞的增殖和遷移，并對MAPK通路下游蛋白進行磷酸化。
總之，本文闡明了tiRNA-Gly結合RBM17的UHM結構域并促進其易位，導致RBM17蛋白增加，從而誘導PTC細胞中靶基因的選擇性剪接，**終促進**進展。 英拜在全國各省會城市均有自己的**客戶。DNA 損傷信號通路科研
隨后，作者研究了YTHDC2是否通過SLC7A11抑制胱氨酸攝取。當YTHDC2在H1299細胞中過表達時，并過表達SLC7A11完全恢復了受損的胱氨酸攝取(圖4E-G)。ATF4是SLC7A11轉錄的關鍵轉錄因子，ATF4在H1299細胞中上調SLC7A11(圖4H、I)。過表達YTHDC2仍然拮抗ATF4的作用(圖4H-J)。因此，YTHDC2損害依賴于SLC7A11的胱氨酸攝取。結合臨床分析，YTHDC2表達下調，而SLC7A11表達上調(圖4K、L)，并且它們在**中呈負相關(圖4M)。
5.YTHDC2以m6A依賴的方式使SLC7A11mRNA不穩定
作者為研究YTHDC2是否在轉錄被阻斷后調控SLC7A11mRNA的穩定性，通過泛轉錄抑制劑ActD處理H1299和H1975細胞，發現YTH結構域對于YTHDC2縮短H1299細胞中SLC7A11mRNA的半衰期至關重要(圖5A)。在H1975細胞中，CRISPR/Cas9技術使YTHDC2功能喪失，然后YTHDC2重構，進一步證實YTHDC2加速了SLC7A11mRNA的衰變(圖5B)。EXOSC10是一種外切酶，負責3’-5’外切酶活性。EXOSC10的缺失，減弱了YTHDC2縮短SLC7A11mRNA半衰期的作用(圖5C、D)。在藥理學水平上，用兩種泛-RNase抑制劑DEPC和RNasin***H1299細胞，也阻斷了YTHDC2的功能(圖5D)。 廣州神經肌肉科研英拜生物提供生物科學內的專業的技術咨詢，技術合作。
4、外泌體miR-138-5p通過抑制KDM6B表達調節巨噬細胞極化
隨后，作者研究了在不同培養條件下TPH-1的表達譜。首先，和**細胞共培養抑制了M1相關基因的表達，IL-6，TNF-α，和IL-1β，但是增加了M2相關基因的表達CD163，Arg-1，IL-10,TGF-β和VEGFA。過表達KDM6B部分抑制了上述表現改變（圖4A-B）。流式檢測顯示乳腺*細胞和TPH-1的共培養增加了CD163陽性細胞數比例，但是過表達KDM6N可以抑制這種效果（圖6C）。類似的，過表達KDM6B抑制了miR-138-5p誘導的M2極化（圖4D-F）。與對照組相比，乳腺*來源的外泌體miR-138-5p降低了M1相關表型，相反，M2標志物增加并伴隨著CD163陽性細胞數的增加（圖6G-I）。用從乳腺*細胞中分離出來的外泌體處理THP-1細胞導致了M2極化，抑制miR-138-5p的表達可挽救這種極化（圖4J-L）。總之，這些結果表明外泌體miR-138-5p通過抑制KDM6B表達調節巨噬細胞極化。
三、SMARCA4調節AR靶基因的表達，參與細胞外基質組織和細胞粘附
使用RNA-seq研究了SMARCA4缺失對有DHT和沒有DHT的VCaP細胞基因表達的全基因組影響。后一組中，雄***(A)下調的基因占大多數(~70%)，而在前一組中，雄***(A)下調和上調的基因數量增加大致相等(圖4a) 。與具有DHT的siCTRL相比，siSMARCA4有931個差異表達基因(DEGs)，其中363個基因雄******調控(圖4b, c）。對差異雄***調節基因集進行metasscape分析。耗盡SMARCA4可增加雄***應答基因的表達，例如，分支結構的形態發生和參與分化的細胞形態發生，而耗盡SMARCA4可抑制嘌呤代謝和細胞對藥物的反應中富集的基因的表達(圖4d)。上述結果表明smarca4介導的染色質可及性變化促進了它們的表達。 促進胰腺*的生長和轉移。
意味著先前接受過CAR-T細胞***的小鼠的**控制***增強(Fig.5H-I)。值得注意的是，第30天的**大小與**侵襲前血液中CD3+T細胞的數量呈***負相關(Fig.5J)，表明CDK4/6i處理的CAR-T細胞的持久性增強是驅動**控制的關鍵因素。事實上，**接種后40天，接受預處理的CAR-T細胞的小鼠浸潤CD4+和CD8+CAR-T細胞的數量***增加(Fig.5K)。接下來通過將未處理或預處理的抗LeYCAR-T細胞轉移到OVCAR-3荷瘤小鼠體內，檢測了CDK4/6i預處理對CAR-T細胞急性療效的影響。用CDK4/6i預處理CAR-T細胞可***增強其抗**活性（Fig.5L-M)。與此一致，轉移后數周發現接受預處理細胞的小鼠血液中CD4+和CD8+細胞以及**中CD8+細胞數量***增高（Fig.5N-O)?？傊?，這些數據證明CDK4/6i體外***是增強CAR-T細胞表型和長期療效的穩健策略。降低腸上皮細胞尿酸的產生。造血微環境損傷模型科研分子生物學實驗
尿酸升高直接引起腸道屏障損傷。DNA 損傷信號通路科研
7）miR-155負調控SOCS6表達，***NF-κB通路
為了進一步探討外泌體miR-155誘導EndoMT和線粒體功能障礙的潛在機制，我們重點研究了miR-155的下游基因。首先，利用在線miRNA靶標數據庫預測了84個潛在靶基因。SOCS6是具有3’UTR的下游mRNA之一，可能與miR-155結合(圖7A)。結合GSE49329和GSE49330數據庫，我們發現miR-155的表達與SOCS6的表達呈負相關(圖7B)。為了進一步證實SOCS63’UTR是miR-155的直接靶標，我們根據預測的結合位點(圖7C)構建了SOCS63’UTR野生型(WT)和突變型(MUT)序列。熒光素酶報告實驗顯示，與對照組相比，共轉染SOCS6的WT-3’UTR時，miR-155過表達明顯降低了熒光素酶活性(圖7D)。qRT-PCR和westernblot進一步顯示，miR-155過表達導致SOCS6表達降低，而miR-155敲低上調SOCS6mRNA和蛋白水平(圖7E和F)。GO分析顯示miR-155可以負向調控細胞-細胞粘附，參與調控成纖維細胞增殖(圖7G)。從GO分析可知，miR-155可能介導NF-κB信號通路(圖7G)。過表達miR-155可***提高細胞質和細胞核中p65蛋白的水平，而敲低miR-155可起到相反的作用(圖7H)。 DNA 損傷信號通路科研
公司特色是以各式高通量二代測序為基礎，利用生物數據信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細胞實驗平臺，提供課題整體設計外包、撰寫SCI論文一站式服務。公司實驗平臺落座在漕河涇開發區浦江園區，實驗平臺開放參觀，客戶可隨時參觀實驗并參與實驗課題的進度，保證您的實驗是在您的指導下完成。
1.整體課題外包服務：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經典通路研究，設計的課題均具有后續實驗課題的延展性，為您的標書奠定較好的基礎
2.標書申請：提供標書課題設計、撰寫，標書部分基礎實驗的開展，設計的標書均符合科研前沿熱點，中標率很高。
3.提供熱點**文獻技術支持，探討科研前沿熱點研究：trfRNA，DNA/RNA甲基化，外泌體，自噬，WNT等相關研究
4.二代測序：轉錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序
5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實驗：DNA甲基化實驗（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實驗
7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，FISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學實驗