造血微環(huán)境損傷模型科研國家自然科學(xué)基金

利用METABRIC數(shù)據(jù)集，我們評估了1459例ER+乳腺*中17個常見Wnt/β-catenin通路基因的表達，包括幾個Wnt靶基因(圖7a)。為了確定INPP4B是否促進PI3K和Wnt/β-catenin通路之間的對話，我們用增加劑量的PI3K抑制劑BKM120(0.5和1 M)處理gfp載體和GFPINPP4B MCF-7細(xì)胞，并測量Wnt靶基因AXIN2、LEF1和MYCN的mRNA表達(圖7b d)。在gfp載體細(xì)胞中，低劑量的BKM120對Wnt靶基因表達的影響**小，而高劑量的Wnt基因表達降低。在GFP-INPP4B表達細(xì)胞中，低濃度的BKM120部分挽救了Wnt基因表達的增加，在更高濃度時進一步降低。總之，這些發(fā)現(xiàn)與INPP4B促進Wnt/β-catenin信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，從而通過增強晚期核內(nèi)體形成促進pik3a突變ER+乳腺*細(xì)胞的增殖的解釋相一致(圖7e)。英拜提供生命科學(xué)內(nèi)的一體化服務(wù)。造血微環(huán)境損傷模型科研國家自然科學(xué)基金

因此，我們使用了競爭結(jié)合試驗，其中滴定MAD2野生型(WT)或R133E/Q134A(RQ)，一個二聚體和p31結(jié)合缺陷的突變體，未能抑制rit1-p31conmet結(jié)合(圖1E)。由于RIT1g結(jié)構(gòu)域與其他Ras-GTPases，特別是它的鄰域RIT2之間的相似性，假設(shè)RIT1s的n端或c端延伸可能介導(dǎo)與MAD2和p31conmet的相互作用(圖1F)。隨后分析了RIT1N-或c-末端缺失突變體，證明了c-末端結(jié)構(gòu)域?qū)τ贛AD2和p31conmet星結(jié)合是必要和充分的(圖1G、1H和S1J)。

在間期，RIT1 s c端尾部介導(dǎo)質(zhì)膜(PM)結(jié)合然而，在分析有絲分裂細(xì)胞時，我們觀察到RIT1在細(xì)胞進入有絲分裂和進入中期并在后期快速易位到PM時的彌漫性胞質(zhì)分布(圖2A和2B)。同樣，在有絲分裂細(xì)胞裂解物中檢測到內(nèi)源性RIT1的主要胞質(zhì)分布(圖2C)。(S209D/E)磷酸化，而非(S209A)缺磷，突變破壞了RIT1-MAD2/p31conmet結(jié)合(圖2D)。RIT1磷酸化在有絲分裂過程中**為豐富(圖2E)。抑制CDK1***降低了重組RIT1的磷酸化(圖2F)。免疫印跡檢測和質(zhì)譜證實CDK1/CyclinB1磷酸化RIT1 S209，(圖2G和2H)。 靶基因芯片科研整體服務(wù)英拜有一支高精尖的團隊。

四、TEA-seq轉(zhuǎn)錄本、表位和可及性的三峰測量

A.隨著從單個核中同時捕獲RNA-seq和ATAC-seq的商業(yè)平臺的發(fā)布，我們推斷通透細(xì)胞可以用于同時捕獲三個主要的分子隔間:DNA可以用scATAC-seq捕獲，RNA可以用scRNA-seq捕獲，蛋白質(zhì)表位豐度可以用聚腺苷化抗體條形碼捕獲，我們根據(jù)轉(zhuǎn)錄本、表位表位和可及性將其稱為TEA-seq。經(jīng)過試驗和關(guān)鍵步驟的優(yōu)化后，我們能夠在10倍基因組MultiomeATAC+基因表達平臺上獲得文庫，該平臺使用46個低聚標(biāo)記抗體組合了數(shù)千個單細(xì)胞的所有三種測量結(jié)果.

B.D.在對裝入4孔的細(xì)胞進行初始數(shù)據(jù)處理后，我們鑒定出29264個通過上述scATAC-seqQC標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)胞條形碼，有2,500,500個獨特的ATAC-seq片段(中值=8762個獨特的ATAC片段)，有>500個基因被scRNA-seq檢測到(中值=2399個RNAUMIs;中位數(shù)=檢測到129,249個基因)，500個ADTUMIs.

G.H.更敏感的蛋白質(zhì)豐度測量允許檢測許多附加的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，例如CCR2/CD192.

I.J.一種單核細(xì)胞上表達的趨化因子受體和CD38，一種表達于多種免疫細(xì)胞表面的糖蛋白.

6、外泌體miR-138-5p促進乳腺*肺轉(zhuǎn)移

極化的巨噬細(xì)胞在決定**細(xì)胞的表型中起著重要的作用。因此，探究M2巨噬細(xì)胞外泌體miR-138-5p處理是否有助于乳腺*小鼠異**模型的**轉(zhuǎn)移。使用氯膦酸鈉***小鼠巨噬細(xì)胞，然后轉(zhuǎn)移使用過表達miR-138-5p的T47D或T47D細(xì)胞來源的外泌體處理的Raw264.7細(xì)胞。小鼠模型通過尾靜脈注射4T1-熒光素酶細(xì)胞構(gòu)建（圖6A）。結(jié)果顯示，外泌體miR-138-5p處理組***促進小鼠體內(nèi)乳腺*細(xì)胞的**體積和肺轉(zhuǎn)移，同時增加了CD206和Arg-1陽性細(xì)胞數(shù)（圖6B-E）。這些結(jié)果表明外泌體miR-138-5p誘導(dǎo)的M2巨噬細(xì)胞促進乳腺*的肺轉(zhuǎn)移。 這些數(shù)據(jù)表明大黃酸***可以改善DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎。

六、THDF1通過FZD7調(diào)控Wnt/b-catenin通路

A，典型Wnt/b-catenin通路示意圖。B, YTHDF1敲低或過表達MGC-803和HGC-27細(xì)胞中總(B -catenin)和非磷酸化(Ser33/37/Thr41, activated B -catenin) B -catenin的蛋白水平。C, IF染色分析YTHDF1敲低、過表達或突變過表達的MGC-803和HGC-27細(xì)胞中總(紅色)和***的(綠色)  b-catenin的亞細(xì)胞定位。D，免疫印跡分析b-catenin靶基因、HMGA2、cyclin D、CDC25A、COX2、SOX9、VEGFA在YTHDF1敲低、過表達或突變過表達MGC-803和HGC-27細(xì)胞中的表達。E，定量分析YTHDF1敲低和過表達MGC- 803和HGC-27細(xì)胞中b-catenin靶基因的RNA水平(n =3)。 英拜的員工福利待遇很好。北京異丁醇科研

英拜生物是國內(nèi)承接各類高通量測序科研項目以及一站式的測序文章發(fā)表服務(wù)的公司之一。造血微環(huán)境損傷模型科研國家自然科學(xué)基金

此外，為進一步驗證ELNAT1與hnRNPA1相互作用區(qū)域，使用ELNAT1不同序列缺失進行RNA-pull down分析，以評估ELNAT1和hnRNPA1結(jié)合所需的區(qū)域。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，ELNAT1序列中600-750 nt位置是其與hnRNPA1交互作用區(qū)域（Figure 4 G, H）。并通過POSTAR2預(yù)測ELNAT1在610-680 nt區(qū)域的莖環(huán)結(jié)構(gòu)可能被hnRNPA1識別（Figure 4 I），而當(dāng)這一區(qū)域缺失時，hnRNPA1減弱對ELNAT1的富集（Figure 4 J）。因此，這表明這些特定的序列（610-680 nt）對ELNAT1 hnRNPA1的相互作用至關(guān)重要。造血微環(huán)境損傷模型科研國家自然科學(xué)基金

公司特色是以各式高通量二代測序為基礎(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細(xì)胞實驗平臺，提供課題整體設(shè)計外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實驗平臺落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實驗平臺開放參觀，客戶可隨時參觀實驗并參與實驗課題的進度，保證您的實驗是在您的指導(dǎo)下完成。

1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計的課題均具有后續(xù)實驗課題的延展性，為您的標(biāo)書奠定較好的基礎(chǔ)

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5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片

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7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實驗