4.Caspase-11缺失抑制MCD誘導(dǎo)的肝臟炎癥
接下來(lái)，我們?cè)u(píng)估了Caspase-11缺乏對(duì)MCD誘導(dǎo)炎癥的影響。首先，我們比較了野生型和Caspase-11缺陷小鼠肝臟白細(xì)胞浸潤(rùn)情況。在正常情況下，野生型小鼠和caspase-11缺陷小鼠肝臟中CD45細(xì)胞的比例相似(圖4A和B)。MCD***導(dǎo)致野生型小鼠肝臟中CD45細(xì)胞的比例增加。相比之下，MCD****輕微增加了Caspase11缺陷小鼠肝臟中CD45細(xì)胞的比例。與MCD處理的野生型小鼠相比，MCD處理的Caspase-11缺陷小鼠肝臟中CD45細(xì)胞的比例明顯下降(圖4A和B)，表明MCD處理后Caspase-11缺陷導(dǎo)致肝臟中白細(xì)胞浸潤(rùn)減少。相應(yīng)地，我們發(fā)現(xiàn)了MCD***促進(jìn)肝臟F4/80的表達(dá)而Caspase-11缺乏則抑制MCD誘導(dǎo)的F4/80上調(diào)(圖4C)。我們進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)MCD***誘導(dǎo)野生型小鼠肝臟中TNF-α(圖4D)、IL-1β(圖4E)和CCL2(圖4F)的表達(dá)。相比之下，與MCD處理的野生型小鼠相比，MCD處理的Caspase-11缺陷小鼠肝臟中TNF-α(圖4D)、IL-1β(圖4E)和CCL2(圖4F)蛋白水平***降低。這些結(jié)果表明Caspase-11缺陷抑制了MCD誘導(dǎo)的肝臟炎癥。 注射circSDHC敲低*細(xì)胞的小鼠比對(duì)照組表現(xiàn)出更少的惡病質(zhì).上海chip標(biāo)書(shū)
在Jurkat和小鼠T細(xì)胞中檢測(cè)到多個(gè)肽上特異性磷酸化位點(diǎn)的***缺失，包括典型的CDK4/6靶標(biāo)RB和RBL 1/2 (Fig. 3D-F)。值得注意的是，RB在兩種細(xì)胞蛋白組學(xué)中重疊，并且是全基因組CRISPR/Cas9篩選*****的（Fig. 3B，3G），表明CDK4/6i介導(dǎo)的記憶形成是由RB介導(dǎo)。因此，靶向敲除RB1，可以消除CD62L的表達(dá)上調(diào)(Fig. 3H)。3’RNA-seq分析顯示RB缺失廢除了轉(zhuǎn)錄對(duì)CDK4/6i的響應(yīng)，包括SELL，其被CDK4/6i誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄改變被RB缺失所大幅度減弱了(Fig. 3I)。與此一致，靶向敲除RB1也廢除了***的初級(jí)小鼠CD8+T細(xì)胞的Tcm形成(Fig. 3J)。WNT標(biāo)書(shū)地區(qū)科學(xué)基金TRIM25是介導(dǎo)IGF2BPs泛素化的E3連接酶。
急性髓系白血病(AML)的靶向***的實(shí)施一直具有挑戰(zhàn)性。FTO是一種m6A去甲基酶，作為一種致*基因，促進(jìn)白血病*基因介導(dǎo)的細(xì)胞轉(zhuǎn)化和白血病發(fā)生。因此為大家介紹于2021年3月發(fā)表于影響因子為8.579的Theranostics上文章“Saikosaponin D exhibits anti-leukemic activity by targeting FTO/m6A signaling”。在這里，我們研究了Saikosaponin-d (SsD)在AML中***的抗增殖作用中的作用，并通過(guò)靶向SsD的FTO來(lái)評(píng)估m(xù)6A去甲基化活性。SsD在體外和體內(nèi)均能***抑制AML細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期阻滯。機(jī)制上，SsD直接靶向FTO，從而增加了m6A RNA的甲基化，降低了下游基因轉(zhuǎn)錄本的穩(wěn)定性，導(dǎo)致相關(guān)通路的抑制。重要的是，SsD還克服了FTO/m6A介導(dǎo)的白血病對(duì)酪氨酸激酶抑制劑的耐藥性。總之，F(xiàn)TO依賴(lài)的m6A RNA甲基化介導(dǎo)了SsD的抗白血病作用，使SsD成為一種***白血病的藥物。
5.沉默lnc-PMIF促進(jìn)老年OPCs向骨形成表面遷移，促進(jìn)老年小鼠骨形成
BMSCs中沉默lnc-PMIF，增殖無(wú)變化，OPCs成骨能力不改變，細(xì)胞遷移數(shù)量高，表明沉默lnc-PMIF可增強(qiáng)老年OPCs的遷移能力，而不干擾老年OPCs的體外增殖和成骨分化。接受si-PMIF處理的老年BMSCs的小鼠中骨形成表面Dil+細(xì)胞數(shù)***升高，提示沉默lnc-PMIF可促進(jìn)老年OPCs在體內(nèi)向骨形成表面遷移，大部分遷移的Dil+細(xì)胞中檢測(cè)到Runx2表達(dá)，表明si-PMIF處理的老年BMSCs遷移到骨形成表面發(fā)生正常的成骨分化，這將有助于小鼠的骨形成。接受si-PMIF處理的老年BMSCs小鼠骨表面TGF-β+細(xì)胞的平均積分光密度***更高，而TRAP+面積無(wú)***差異，表明si-PMIF處理的老化BMSCs可能影響細(xì)胞募集，而不是骨吸收。上述si-PMIF或si-NC處理的老年BMSCs對(duì)老年雄性小鼠進(jìn)行脛骨內(nèi)注射，4周后接受si-PMIF處理的老年BMSCs的小鼠骨量更高，脛骨干骺端微結(jié)構(gòu)更好，BMD和BV/TV更高，MAR和BFR/BS更高。這些結(jié)果證明，老年BMSCs敲低lnc-PMIF可促進(jìn)骨形成。 circSDHC通過(guò)充當(dāng)miR-127-3p的海綿促進(jìn)ccRCC的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移.
4）DRD2重編程的Mφ誘導(dǎo)**細(xì)胞的焦亡
如HE所示，來(lái)自小鼠模型的**承載DRD2顯示**細(xì)胞死亡增加(圖4A)。在免疫組化染色中，表達(dá)DRD2的4T1**樣本中pMLKL表達(dá)較高(圖4A)。根據(jù)TUNEL實(shí)驗(yàn)，DRD2也促進(jìn)了體內(nèi)細(xì)胞凋亡(圖4B)。DRD2上調(diào)GSDME而不是GSDMD(圖4C)。在crosstalk過(guò)程中，Mφ進(jìn)一步促進(jìn)了DRD2轉(zhuǎn)染的BrCa細(xì)胞中GSDME的表達(dá)(圖4C)。在表達(dá)DRD2的BrCa細(xì)胞中，Mφ也能上調(diào)IL-1β(圖4C)。WB結(jié)果表明，DRD2誘導(dǎo)了MLKL的磷酸化，而在共培養(yǎng)過(guò)程中，MLKL被Mφ抑制(圖4D)。此外，DRD2表達(dá)***了caspase-8，而***被Mφ抑制(圖4D)。假設(shè)，DRD2可能在與Mφcrosstalk時(shí)誘發(fā)焦亡。BrCa細(xì)胞中與Mφ共培養(yǎng)時(shí)，NLRP3在表達(dá)DRD2的BrCa細(xì)胞中被觸發(fā)。***的caspase-1蛋白水解也能誘導(dǎo)IL-1β和IL-18的成熟(圖4D)。在共培養(yǎng)過(guò)程中，Cleavedcaspase-3表達(dá)上調(diào)(圖4D)。此外，在共培養(yǎng)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)表達(dá)DRD2的BrCa細(xì)胞中，GSDME的N端發(fā)生了剪切(圖4D)。為了確定是否由M1Mφ引起焦亡，我們使用了LPS誘導(dǎo)的M1Mφ培養(yǎng)基，結(jié)果表明，在表達(dá)DRD2的BrCa細(xì)胞中，M1Mφ*觸發(fā)NLRP3組裝并剪切GSDME(圖4E)。以上結(jié)果提示，M1Mφ以DRD2依賴(lài)的方式觸發(fā)BrCa細(xì)胞的焦亡。 PCOS大鼠血清水蘇糖水平升高。深圳RNA甲基化標(biāo)書(shū)
間接量熱法測(cè)定平均呼吸交換商（RQ值）在SCI + FMT組恢復(fù)正常。上海chip標(biāo)書(shū)
2)在體內(nèi)和體外，DRD2的表達(dá)抑制BrCa細(xì)胞的**發(fā)生
構(gòu)建過(guò)表達(dá)DRD2的MDA-MB231和BT549細(xì)胞，通過(guò)RT-PCR(Figure2A)和WB(Figure2B)驗(yàn)證。CCK8實(shí)驗(yàn)證明，DRD2異位表達(dá)抑制**細(xì)胞生長(zhǎng)(圖2C)。在單層集落形成實(shí)驗(yàn)(圖2D)和軟瓊脂形成實(shí)驗(yàn)(圖2E)中，DRD2也損害了存活能力。并進(jìn)行細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期分布分析。DRD2的表達(dá)***促進(jìn)了BrCa細(xì)胞凋亡(圖2F)，并阻斷了MDA-MB231和BT549在G2/M期的凋亡(圖2G)。此外，過(guò)表達(dá)DRD2促進(jìn)了BrCa細(xì)胞對(duì)PTX的敏感性(圖2H)。在傷口愈合實(shí)驗(yàn)中，異位表達(dá)的DRD2比對(duì)照組表現(xiàn)出更少的閉合人工傷口的能力(圖2I)。與此相一致的是，DRD2的過(guò)表達(dá)***降低了BrCa的遷移和侵襲(圖2J)。在體內(nèi)進(jìn)一步測(cè)定了DRD2的抑瘤作用。皮下**模型顯示過(guò)表達(dá)DRD2模型的**體積和重量均減小(圖2K)。 上海chip標(biāo)書(shū)
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