星形膠質(zhì)細胞課題第三方實驗室

四、RIT1抑制MCC-MAD2結(jié)合，促進APC/C底物降解

在MAD1與未連接的動點結(jié)合后，MAD2從開放的構(gòu)象狀態(tài)(O-MAD2)轉(zhuǎn)化為封閉的構(gòu)象狀態(tài)(C-MAD2)， SAC信號被緊密調(diào)控和放大。MAD2的構(gòu)象變化啟動了它與CDC20的結(jié)合。為了直接測試RIT1是否抑制了MAD2與CDC20或MAD1的關(guān)聯(lián)，進行了競爭性pull-down實驗來測試RIT1-MAD2和MAD2-CDC20/ MAD1結(jié)合之間的互斥性(圖4A和4B)。MAD2結(jié)合肽1 (MBP1)是一種模擬CDC20和MAD1相互作用基序(MIM)的高親和合成肽，它取消了MAD2- rit1的結(jié)合。評估了RIT1與O-或c -狀態(tài)穩(wěn)定的MAD2突變體的結(jié)合(圖4C)。用過量的RIT1 c端尾肽孵育MAD2蛋白，并用凝膠過濾分離(圖4D)。

高通量測序后續(xù)的機制實驗。星形膠質(zhì)細胞課題第三方實驗室

2）circPDE4B調(diào)節(jié)軟骨細胞活力和ECM代謝

為了評估circPDE4B在ECM代謝中的作用，我們分別用三種circPDE4BsiRNA轉(zhuǎn)染HCs(圖2A)。我們使用CCK-8方法評估了circPDE4B對軟骨細胞活力的影響。結(jié)果顯示，敲低circPDE4B的表達降低了軟骨細胞的活力(圖2B)。此外，shRNA腺病毒抑制circPDE4B***提高了MMP3、MMP13和ADAMTS4的表達，而SOX9、COL2A1(或COL2蛋白)和aggrecan在HCs/MCs中的表達下調(diào)(圖2C和圖2D)。免疫熒光進一步證實，circPDE4B敲除影響了HCs/MCs的MMP3、MMP13、COL2和aggrecan水平(圖2E、F)。同時，HCs的阿爾新藍染色顯示，circPDE4B抑制導致軟骨細胞功能障礙，蛋白多糖藍染較少(圖2G)。然后通過CCK-8實驗(圖2H)發(fā)現(xiàn)，過表達circPDE4B增加了軟骨細胞的活力。在過表達circPDE4B-HCs中，MMP3、MMP13和ADAMTS4的mRNA和蛋白水平下調(diào)，SOX9、COL2A1(或COL2蛋白)和aggrecan的mRNA和蛋白水平上調(diào)(圖2I-L)。此外，HCs的阿爾新藍染色表明，與單獨IL-1β***相比，circPDE4B過表達和IL-1β共處理減少了軟骨破壞(圖2M)。這些數(shù)據(jù)表明，circPDE4B/circPde4b在HCs中可以促進細胞活力，抑制分解代謝作用。 巨噬細胞課題實驗外包有肝轉(zhuǎn)移的PDAC患者外泌體CD44v6和C1QBP的表達明顯高于無肝轉(zhuǎn)移的PDAC患者。

以上數(shù)據(jù)提示，miR-934異常高表達與結(jié)直腸***進展及肝轉(zhuǎn)移***相關(guān)。生存分析顯示，與miR-934表達較低的患者相比，miR-934表達較高的患者總生存期(OS)和無病生存期(DFS)較低（Fig.1f,g）。因此，在CRLM患者中，miR-934高表達與CRLM進展和預(yù)后不良呈正相關(guān)。

2、miR-934存在于CRC細胞衍生的外泌體中

miR-934在HCT-8和LoVo的CM中的表達***高于其它細胞（Fig.2a）。隨后，研究發(fā)現(xiàn)HCT-8和LoVo的CM中miR-934的表達***高于細胞核和細胞質(zhì)（Fig.2b,c）。并且，miR-934在CM中的表達不隨RNaseA的處理而改變，而隨RNaseA+TritonX-100的處理***下降（Fig.2d），這表明細胞外的miR-934被膜包裹，而不是直接分泌。因此，推測miR-934可能是被外泌體傳輸。電鏡和納米顆粒追蹤分析表明，miR-934表達水平較高的CRC細胞分泌的外泌體比miR-934表達水平較低的CRC細胞分泌的外泌體更多（Fig.2e,f）。各組外泌體標志物CD9，ALIX，TSG101均被WB檢測到（Fig.2g）。

再次從老年和年輕小鼠中分離BMSCs，Dil染色劑標記后體外增殖，脛骨內(nèi)注射到另一批年輕小鼠中，三天后收獲脛骨對成骨標志物Runx2進行熒光免疫染色。發(fā)現(xiàn)老年BMSCs處理的小鼠中Dil標記細胞降低，表明老化過程中OPCs向骨形成表面的遷移能力降低。大部分遷移到骨形成表面的Dil標記細胞表達Runx2，表明OPCs遷移到骨形成表面發(fā)生成骨分化，有助于體內(nèi)骨形成。與年輕BMSCs相比，老年BMSCs的體外遷移能力明顯受損，Macf1***下調(diào)，從Macf1基因位點轉(zhuǎn)錄而來的長鏈非編碼RNA PMIF（即lnc-PMIF）表達***增高。上述提示，衰老過程中小鼠骨形成的減少伴隨著OPCs向骨形成表面遷移的減少和OPCs中l(wèi)nc-PMIF表達的升高。上海英拜提供課題外包服務(wù)。

4）DRD2重編程的Mφ誘導**細胞的焦亡

如HE所示，來自小鼠模型的**承載DRD2顯示**細胞死亡增加(圖4A)。在免疫組化染色中，表達DRD2的4T1**樣本中pMLKL表達較高(圖4A)。根據(jù)TUNEL實驗，DRD2也促進了體內(nèi)細胞凋亡(圖4B)。DRD2上調(diào)GSDME而不是GSDMD(圖4C)。在crosstalk過程中，Mφ進一步促進了DRD2轉(zhuǎn)染的BrCa細胞中GSDME的表達(圖4C)。在表達DRD2的BrCa細胞中，Mφ也能上調(diào)IL-1β(圖4C)。WB結(jié)果表明，DRD2誘導了MLKL的磷酸化，而在共培養(yǎng)過程中，MLKL被Mφ抑制(圖4D)。此外，DRD2表達***了caspase-8，而***被Mφ抑制(圖4D)。假設(shè)，DRD2可能在與Mφcrosstalk時誘發(fā)焦亡。BrCa細胞中與Mφ共培養(yǎng)時，NLRP3在表達DRD2的BrCa細胞中被觸發(fā)。***的caspase-1蛋白水解也能誘導IL-1β和IL-18的成熟(圖4D)。在共培養(yǎng)過程中，Cleavedcaspase-3表達上調(diào)(圖4D)。此外，在共培養(yǎng)過程中發(fā)現(xiàn)表達DRD2的BrCa細胞中，GSDME的N端發(fā)生了剪切(圖4D)。為了確定是否由M1Mφ引起焦亡，我們使用了LPS誘導的M1Mφ培養(yǎng)基，結(jié)果表明，在表達DRD2的BrCa細胞中，M1Mφ*觸發(fā)NLRP3組裝并剪切GSDME(圖4E)。以上結(jié)果提示，M1Mφ以DRD2依賴的方式觸發(fā)BrCa細胞的焦亡。 醫(yī)學整體課題外包服務(wù)。帕金森小鼠模型課題

TIMEOR是***個基于 Web 的自適應(yīng)時間序列多組學管道方法。星形膠質(zhì)細胞課題第三方實驗室

二、npm1突變AML患者聚集的分子基礎(chǔ)

CDH2是鈣粘蛋白家族的一員，被認為是決定干細胞命運的調(diào)節(jié)因子15。類似地，G蛋白偶聯(lián)受體12(GPR12)在原始亞型中上調(diào)，已知在干細胞維持和**干細胞的體細胞重編程中發(fā)揮作用。MyoD家族抑制劑(MDFI)在原始亞型中表達增加，據(jù)報道它是WNT信號通路的調(diào)節(jié)因子，只在造血干細胞祖細胞中表達。鋅指蛋白521(ZNF521)是一種轉(zhuǎn)錄因子，其在人類白血病細胞系中被敲低可以減少增殖但在原始亞型中卻有***的高表達。CD163是一種免疫調(diào)節(jié)劑，是巨噬細胞清清體受體家族的成員，已知在單核細胞系的AML細胞中表達。在committedcluster中其他基因的高表達包括免疫相關(guān)基因，如C1QA,CD14和MARCO。msl1基因，一種已知的白血病干細胞增殖抑制因子，也在committedcluster中高表達。我們通過qPCR驗證了關(guān)鍵基因的差異表達(圖2B)。使用基因**富集分析(GSEA)，在committed亞型中，免疫反應(yīng)通路如干擾素-γ介導的信號通路、GPCR信號通路和toll樣受體(TLR)信號通路上調(diào)(圖2C,D,SupplementaryFigs.16,18，與FLT3-ITD和DNMT3A突變的弱相關(guān)性一致。 星形膠質(zhì)細胞課題第三方實驗室

公司特色是以各式高通量二代測序為基礎(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細胞實驗平臺，提供課題整體設(shè)計外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實驗平臺落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實驗平臺開放參觀，客戶可隨時參觀實驗并參與實驗課題的進度，保證您的實驗是在您的指導下完成。

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