2）UCP1在AKI中***下調(diào)，且與腎損傷嚴(yán)重程度呈高度負(fù)相關(guān)
UCPs超家族與能量代謝密切相關(guān)，并在多種疾病中介導(dǎo)脂質(zhì)消耗。基于UCPs的功能，我們通過westernblot和免疫組化方法對(duì)正常C57小鼠腎組織中UCP1、UCP2和UCP3的表達(dá)進(jìn)行了表征。結(jié)果顯示，UCP1和UCP2表達(dá)較好，而UCP3幾乎未檢測到(圖2A-B)。在UCPs中，UCP1被認(rèn)為是脂質(zhì)降解**關(guān)鍵的基因，而UCP2與之沒有直接關(guān)系。因此，我們選擇UCP1進(jìn)行進(jìn)一步分析，證實(shí)其在皮質(zhì)小管中高表達(dá)，在髓質(zhì)中部分表達(dá)，C57小鼠、Sprague-Dawley大鼠、Wistar大鼠腎小球、**幾乎無表達(dá)(圖2C-D)。為了進(jìn)一步確認(rèn)UCP1在腎臟中的表達(dá)位點(diǎn)，我們用凝集素染色顯示腎臟的形態(tài)，然后對(duì)UCP1進(jìn)行染色。結(jié)果顯示，UCP1主要表達(dá)于腎小管以上結(jié)果提示，UCP1可能在腎小管的結(jié)構(gòu)和功能中發(fā)揮著潛在的重要作用。 **近科研技術(shù)的開發(fā)。真核生物科研實(shí)驗(yàn)外包
HoxBlinc直接與靶基因結(jié)合，介導(dǎo)染色質(zhì)相互作用，驅(qū)動(dòng)HSPC中的基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)
CTCF邊界促進(jìn)了受限拓?fù)湎嚓P(guān)域(TADs)內(nèi)增強(qiáng)子/啟動(dòng)子的相互作用。作者之前報(bào)道了后HOXA位點(diǎn)的CTCF邊界建立和維持活躍的TAD，以驅(qū)動(dòng)后HOXA基因表達(dá)。為了研究HoxBlinc過表達(dá)是否會(huì)影響CTCF定義的HoxB位點(diǎn)前TAD域和增強(qiáng)子/啟動(dòng)子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，使用高通量測序捕捉環(huán)狀染色體構(gòu)象(4C-seq)使用HoxB位點(diǎn)CTCF結(jié)合位點(diǎn)(cbs)作為HoxBlincTg與WTLin?c-Kit+細(xì)胞（圖5a）。有趣的是，HoxBlinc過表達(dá)增強(qiáng)了這些由CBS5/5和/或+43CBS介導(dǎo)的HoxB前位點(diǎn)內(nèi)的長程相互作用（圖5b）。而+73KbCBS(+73CBS)和HoxB13CBS(CBS13)與前HoxB基因不互作，盡管+73CBS與CBS5/6和CBS8/9存在交互作用，但不受HoxBlinc過表達(dá)的影響（圖5b）。此外，HoxBlinc過表達(dá)也誘導(dǎo)了CBS4/5和/或+43CBS與HoxBlinc靶基因如Stat1、Crd2和后HoxA基因啟動(dòng)子區(qū)域的長程相互作用，而非HoxBlinc靶基因HoxD（圖5c）。這些數(shù)據(jù)表明，HoxBlinc與CBS4/5和+43CBS協(xié)調(diào)，促進(jìn)并維持與NPM1c+標(biāo)記基因位點(diǎn)的長期染色質(zhì)相互作用，從而***它們。 深圳老化芯片科研總體生存率低與m6A水平增高***相關(guān)。
6、**來源外泌體miR-208b影響體內(nèi)化療效果和**生長
隨后作者探究了**來源外泌體miR-208b體內(nèi)對(duì)化療效果和**生長的影響。用慢病毒轉(zhuǎn)染CT26細(xì)胞產(chǎn)生miR-208b過表達(dá)和miR-208b敲低細(xì)胞系。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)示意圖如圖7A所示，實(shí)驗(yàn)采用6組(每組10只小鼠)，其中3組使用奧沙利鉑，BALB/c小鼠植入CT26細(xì)胞，建立**植入模型。如圖7B-7D所示，miR-208b-OE組**生長速度較快，而中miR-208-KD組**生長明顯慢于對(duì)照組。從各組小鼠中分離出外周血CD4+T細(xì)胞，結(jié)果顯示miR-208b-OE組中PDCD4的***下調(diào)，miR-208-KD組的結(jié)果則相反(圖7E和7F)。然而，在PDCD4mRNA水平上沒有觀察到差異(圖7G)。從血清中分離出外泌體，檢測miR-208b水平(圖7H)。如預(yù)期的，miR-208b在miR-208b-OE組中***升高，而miR-208b-KD組中miR-208b水平下降(圖7I)。這些結(jié)果表明，**分泌的miR-208b在體內(nèi)可以充分地傳遞到CD4+T細(xì)胞中，抑制PDCD4的表達(dá)。此外，這種現(xiàn)象在奧沙利鉑***組更加***(miR-208b-OE+OXA和miR-208b-KD+OXA)。
6）NOX4誘導(dǎo)的線粒體代謝損傷通過抑制人類星形膠質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞抗氧化過程而誘導(dǎo)氧化應(yīng)激
我們研究了NOX4誘導(dǎo)的線粒體代謝損傷是否可以通過抑制人體星形膠質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞抗氧化過程來誘導(dǎo)氧化應(yīng)激。與對(duì)照組相比，NOX4的升高***降低了谷胱甘肽(GSH)水平和谷胱甘肽/氧化谷胱甘肽(GSSG)的比值(圖6A和B)。NOX4的升高也增加了GSSG的水平(圖6C)。由于NOX4導(dǎo)致GSH減少以及GSH/GSSG比值降低，我們接下來研究NOX4是否可以影響人類星形膠質(zhì)細(xì)胞中NRF2信號(hào)通路，這是細(xì)胞抗氧化反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)控因子。與對(duì)照組相比，NOX4的升高抑制了NRF2在細(xì)胞質(zhì)中的核易位(圖6D)。此外，NRF2靶基因HO-1和GCL的水平和活性在人星形膠質(zhì)細(xì)胞中被NOX4過表達(dá)***抑制(圖6E和F)。這些結(jié)果表明，NOX4誘導(dǎo)的線粒體代謝損傷通過抑制人星形膠質(zhì)細(xì)胞的細(xì)胞抗氧化過程而誘導(dǎo)氧化應(yīng)激。 評(píng)估了成對(duì)*組織和鄰近組織樣本中**重要的m6A調(diào)節(jié)因子（METTL3、METTL14和WTAP）的表達(dá)。
METTL3增強(qiáng)APCmRNA的m6A和隨后的YTHDF結(jié)合抑制APC表達(dá)
YTHDF1-3介導(dǎo)mRNA降解，針對(duì)YTHDF1的抗體進(jìn)行RIP分析，實(shí)時(shí)定量PCR分析顯示，在KYSE180中，與APCmRNA結(jié)合的YTHDF2的數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于YTHDF1和YTHDF3的數(shù)量，并且由于METTL3缺失而減少。這些結(jié)果表明METTL3增加了APCmRNA的m6A，在很大程度上促進(jìn)了YTHDF2與APCmRNA的結(jié)合。
為了研究YTHDF2與APCmRNA結(jié)合在APC表達(dá)中的作用，我們?nèi)コ薡THDF2，這增加了KYSE450細(xì)胞中APC的mRNA（圖5d和補(bǔ)充圖5e）和蛋白質(zhì)表達(dá)。YTHDF1–3的聯(lián)合缺失進(jìn)一步增加了這些細(xì)胞中APC的mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)。此外，還進(jìn)行了熒光素酶報(bào)告子分析，結(jié)果表明，缺失YTHDF2增強(qiáng)了由含m6A的WTAPCCDS序列驅(qū)動(dòng)的熒光素酶活性，而突變的APC增強(qiáng)了熒光素酶活性，并使該活性抵抗了YTHDF2缺失的調(diào)節(jié)。此外，METTL3過表達(dá)抑制由WTAPCCDS序列驅(qū)動(dòng)的熒光素酶活性通過YTHDF2耗竭恢復(fù)，其不影響突變的APC增強(qiáng)的熒光素酶活性。這些結(jié)果表明METTL3增加了APCmRNA的m6A，隨后的YTHDF結(jié)合抑制了APC的表達(dá)。 尿酸升高直接引起腸道屏障損傷。血清/血漿芯片科研實(shí)驗(yàn)外包
英拜的員工福利待遇很好。真核生物科研實(shí)驗(yàn)外包
WTAP介導(dǎo)的HK2調(diào)控依賴于其m6A甲基化酶活性
m6A閱讀器IGF2BP2識(shí)別WTAP轉(zhuǎn)錄本中的m6A位點(diǎn)，以促進(jìn)其穩(wěn)定性。qPCR結(jié)果顯示，IGF2BP2缺陷細(xì)胞中HK2的轉(zhuǎn)錄水平***降低(圖6A)，mRNA穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)顯示HK2在IGF2BP2缺陷細(xì)胞中趨于不穩(wěn)定(圖6B)。pGL3-HK2-WT載體的熒光素酶活性通過抑制IGF2BP2而降低，而pGL3-HK2-MUT載體的熒光素酶活性則消失(圖6C)。因此，IGF2BP2與WTAP共同作用，影響DLBCL細(xì)胞中HK2mRNA的穩(wěn)定性和表達(dá)。此外，考慮到piRNA-30473在**發(fā)生和疾病進(jìn)展中的功能重要性，利用選擇性抑制劑靶向piRNA-30473/WTAP/HK2軸可能是***DLBCL的一種有前景的***策略(圖6D)。
結(jié)論：作者證明了piRNA-30473通過調(diào)節(jié)m6ARNA甲基化，從而觸發(fā)下游信號(hào)級(jí)聯(lián)而促進(jìn)DLBCL的**發(fā)生和不良預(yù)后。該研究強(qiáng)調(diào)了m6A修飾機(jī)制在DLBCL中的功能重要性，并通過揭示一個(gè)之前未被發(fā)現(xiàn)的DLBCL基因調(diào)控機(jī)制，為**發(fā)生的表觀遺傳機(jī)制提供了深刻的見解。 真核生物科研實(shí)驗(yàn)外包
公司特色是以各式高通量二代測序?yàn)榛A(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，提供課題整體設(shè)計(jì)外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)平臺(tái)落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實(shí)驗(yàn)平臺(tái)開放參觀，客戶可隨時(shí)參觀實(shí)驗(yàn)并參與實(shí)驗(yàn)課題的進(jìn)度，保證您的實(shí)驗(yàn)是在您的指導(dǎo)下完成。
1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計(jì)的課題均具有后續(xù)實(shí)驗(yàn)課題的延展性，為您的標(biāo)書奠定較好的基礎(chǔ)
2.標(biāo)書申請：提供標(biāo)書課題設(shè)計(jì)、撰寫，標(biāo)書部分基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)的開展，設(shè)計(jì)的標(biāo)書均符合科研前沿?zé)狳c(diǎn)，中標(biāo)率很高。
3.提供熱點(diǎn)**文獻(xiàn)技術(shù)支持，探討科研前沿?zé)狳c(diǎn)研究：trfRNA，DNA/RNA甲基化，外泌體，自噬，WNT等相關(guān)研究
4.二代測序：轉(zhuǎn)錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序
5.芯片：信號(hào)通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實(shí)驗(yàn)：DNA甲基化實(shí)驗(yàn)（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實(shí)驗(yàn)
7.實(shí)時(shí)定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(靶基因驗(yàn)證，過表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)