QKI促進(jìn)NSCLC細(xì)胞中circNDUFB2的生物發(fā)生
circNDUFB2和NDUFB2均來自NDUFB2 pre-mRNA，而NDUFB2 mRNA在NSCLC中略有上調(diào)。因此，推測circNDUFB2的下調(diào)在轉(zhuǎn)錄后發(fā)生。我們在circNDUFB2中搜索與潛在QRE匹配的序列。接下來進(jìn)行了RIP分析，確認(rèn)QKI確實(shí)與NDUFB2 pre-mRNA中的假定QRE結(jié)合。在NSCLC細(xì)胞中QKI過表達(dá)可能會(huì)上調(diào)circNDUFB2。 這些數(shù)據(jù)表明，QKI與NDUFB2 pre-mRNA的circNDUFB2形成外顯子側(cè)翼的內(nèi)含子結(jié)合，從而促進(jìn)circNDUFB2的形成。 英拜生物對實(shí)驗(yàn)可行性分析。生物學(xué)
4）LINC00926通過增強(qiáng)STUB1介導(dǎo)的泛素-蛋白酶體途徑調(diào)節(jié)PGK1蛋白的穩(wěn)定性
亞細(xì)胞定位結(jié)果顯示，LINC00926主要定位于細(xì)胞質(zhì)，F(xiàn)ISH實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)了這一點(diǎn)(圖4A和4B)。結(jié)合LINC00926沒有改變PGK1mRNA水平的事實(shí)，我們推測LINC00926在轉(zhuǎn)錄后水平下調(diào)了PGK1的表達(dá)。事實(shí)上，蛋白酶體抑制劑MG132的加入阻斷了LINC00926過表達(dá)介導(dǎo)的PGK1降解，這表明泛素-蛋白酶體途徑參與了LINC00926對PGK1蛋白穩(wěn)定性的調(diào)節(jié)(圖4C)。LINC00926過表達(dá)增加PGK1泛素化(圖4D)。下調(diào)LINC00926基因后，PGK1蛋白水平升高，泛素化水平降低(圖4E)。為了尋找負(fù)責(zé)LINC00926調(diào)控PGK1蛋白穩(wěn)定性的E3泛素連接酶STUB1，我們接下來通過RNA下拉實(shí)驗(yàn)確定了LINC00926在乳腺*細(xì)胞中的蛋白伴侶。質(zhì)譜分析結(jié)果顯示了特異性差異表達(dá)譜帶。 細(xì)胞連接通路發(fā)現(xiàn)者醫(yī)學(xué)整體課題外包服務(wù)。
VD通過Ca2+-CAMKK2途徑調(diào)控AMPK
AMPK通過上游激酶磷酸化***，主要包括STK11/LKB1和CAMKK2/CaMKKβ。為了確定AMPK激酶是否參與paricalcitol介導(dǎo)的AMPK***，我們使用STO-609(選擇性CAMKK抑制劑)、CAMKK2siRNA和HK-2STK11KO細(xì)胞。與STO-609或CAMKK2siRNA共同處理完全消除了paricalcitol刺激的PRKAA1和ULK1磷酸化。然而，paricalcitol能夠***HK-2STK11KO細(xì)胞中的PRKAA1和ULK1。這些結(jié)果表明paricalcitol通過CAMKK2***AMPK。由于CAMKK2主要受細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度的調(diào)節(jié)。為了闡明Ca2+信號在paricalcitol介導(dǎo)作用中的參與，我們使用熒光Ca2+探針Fluo4AM評估了細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度的變化對paricalcitol處理的響應(yīng)。如圖7D所示，當(dāng)HK2細(xì)胞暴露于高糖環(huán)境時(shí)，Ca2+濃度下降，paricalcitol可以緩解這種下降。
肺腺* (LUAD) 是**常見的非小細(xì)胞肺*類型。然而，LUAD **發(fā)生的潛在機(jī)制在很大程度上是未知的。N6-甲基腺苷 (m6A) RNA 甲基化在各種人類**中的關(guān)鍵作用，包括肺*。***來講一篇關(guān)于m6A與肺*的文章，題名為：The m 6 A reader YTHDC2 inhibits lung adenocarcinoma tumorigenesis by suppressing SLC7A11-dependent antioxidant function（IF=11.79）。YTHDC2的抑制與LUAD中的**進(jìn)展有關(guān)
為了評估m(xù)6A閱讀器在肺*中的表達(dá)譜，通過 GEPIA 數(shù)據(jù)庫分析了已知的閱讀器，包括 YTHDF1/2/3、YTHDC1/2、HNRNPA2B1、HNRNPC/G、eIF3A、FMR1 和 IGF2BP1/2。其中，與正常肺相比，LUAD 和 LUSC 中只有 YTHDC2 下調(diào)。然而，IGF2BP2 在 LUAD 和 LUSC 中差異表達(dá)。Oncomine 數(shù)據(jù)庫還顯示 YTHDC2 在 LUAD 中通常被下調(diào)。Kaplan-Meier 圖的分析進(jìn)一步表明，較低的 YTHDC2 與 LUAD 中較差的總體生存率相關(guān)。這些結(jié)果使我們研究了 YTHDC2 在 LUAD 中的作用。 英拜生物對整體實(shí)驗(yàn)實(shí)施的全局把控。
H460和H1299細(xì)胞是表皮生長因子受體(EGFR)野生型細(xì)胞，我們進(jìn)一步確定了在EGFR突變的H1650細(xì)胞中，USP35對細(xì)胞生長、鐵死亡誘導(dǎo)和**生長的作用。如圖5A-C所示，USP35沉默***減少了H1650細(xì)胞生長、集落形成和**進(jìn)展。因此，在USP 35缺陷型H1650細(xì)胞中，ROS生成、MDA生成、細(xì)胞內(nèi)LIP和Fe2+增加，而GSH水平和GPX4活性降低(圖5D-F)。相反，USP35過表達(dá)***阻止了erastin/RSL3誘導(dǎo)的體內(nèi)外對H1650細(xì)胞生長、集落形成和**進(jìn)展的抑制(圖5G-J)。在H1650細(xì)胞中過表達(dá)USP35也降低了ROS生成、MDA產(chǎn)生和鐵負(fù)荷的增加(圖5K-M)。總的來說，USP35過表達(dá)減少了erastin/RSL3觸發(fā)的鐵紊亂和鐵死亡。高表達(dá)的外泌體CD44v6和C1QBP是預(yù)測PDAC患者預(yù)后和肝轉(zhuǎn)移的很有前途的生物標(biāo)志物。流式細(xì)胞術(shù)
動(dòng)物建模模型實(shí)驗(yàn)的整體服務(wù)。生物學(xué)
5）NOX4的升高通過抑制人類星形膠質(zhì)細(xì)胞線粒體呼吸和ATP的產(chǎn)生來促進(jìn)線粒體代謝的損傷，從而促進(jìn)氧化應(yīng)激
我們研究了AD期間NOX4升高誘導(dǎo)受損星形膠質(zhì)細(xì)胞氧化應(yīng)激的潛在分子機(jī)制。與對照組相比，NOX4過表達(dá)***抑制了OCR的基礎(chǔ)水平，且***降低了寡霉素和FCCP作用下的OCR水平(圖5A和B)。接下來，我們研究了NOX4上調(diào)對人類星形膠質(zhì)細(xì)胞線粒體呼吸途徑調(diào)控的分子靶點(diǎn)。我們分析了包括NADH在內(nèi)的5種線粒體ETC蛋白復(fù)合物的水平(圖5C)。與OCR水平一致，與對照組相比，NOX4過表達(dá)***抑制了5種線粒體氧化磷酸化酶復(fù)合物的蛋白水平并***減少ATP的產(chǎn)生(圖5D)。免疫熒光染色顯示，與對照組相比，NOX4的升高導(dǎo)致線粒體碎裂，并***增加了線粒體碎裂的細(xì)胞數(shù)量(圖5G)。這些結(jié)果表明，NOX4的升高通過抑制人類星形膠質(zhì)細(xì)胞線粒體呼吸和ATP的產(chǎn)生，從而損害線粒體代謝，從而促進(jìn)氧化應(yīng)激。 生物學(xué)
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5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實(shí)驗(yàn)：DNA甲基化實(shí)驗(yàn)（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實(shí)驗(yàn)
7.實(shí)時(shí)定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(靶基因驗(yàn)證，過表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)