circ_0072083 與 miR-1252-5p 相互作用以調節 TMZ 抗性
神經膠質瘤細胞中的 ALKBH5/NANOG 軸和 TMZ 抗性為了分析circ_0072083如何調節ALKBH5/NANOG軸，探索了潛在的 miRNA作為串擾。基于Circinteractome和starBase的數據庫，維恩圖顯示只有一種miRNA（miR-1252-5p）可以與circ_0072083、ALKBH5和NANOG結合。 miR-1252-5p 表達在 TMZ 抗性組織和細胞中顯著降低。為了驗證它們的相互作用，構建了野生型和突變型熒光素酶報告載體。miR-1252-5p 過表達明顯降低了野生型組（WT-circ_0072083、WT-NANOG 3'UTR 和 WT-ALKBH5 3'UTR）的熒光素酶活性，而沒有改變突變組（MUT -circ_0072083，MUT-NANOG 3'UTR 和 MUT-ALKBH5 3'UTR）。 產生關于環境影響疾病的病因和分子機制的可測試的假設。湖北課題服務兩年
1）circMAPK1的鑒定和circMAPK1的臨床特征
由于MAPK信號通路在**發生和進展中起著重要的病理作用，我們首先根據在線數據庫circBase中的circRNA測序數據分析了來自MAPK通路相關基因的circRNA。然后我們清點了MAPK通路相關的circRNAs，發現大部分細胞系可以表達數以百計的MAPK通路的circRNAs(圖1a)。在來源于MAPK1的circRNA中，circ-0006203、circ0004872和circ-0008870在超過三個**的測序數據集中被***檢測。我們利用qRT-PCR檢測了這三種circRNA在胃*患者的胃*組織和*旁組織中的表達水平(圖1b)。結果顯示circ-0004872的表達變化**為***。circ-0004872在*組織/細胞中的reads明顯低于正常組織/細胞(圖1c)。此外，GSE121445和GSE100170數據庫中也證實了GC中circMAPK1的下調(圖1d)。這些數據提示circ-0004872具有潛在的抑制作用，從而促使我們進一步研究其在胃*惡性**中的作用。 河南課題中標率高致力于醫學相關領域的實驗技術服務和相關生物醫學課題的研究。
五、敲除核孔蛋白來挽救核孔蛋白的表達導致果蠅的運動功能障礙和壽命縮短
Nup62、Nup214、Nup43在運動神經元中過表達***降低了運動功能和攀爬速度(圖5A和B)。與各自的Nup對照或對照組動物相比，過表達Nup62和Nup214或Nup62和Nup43的動物的壽命明顯縮短——Nup62/ Nup214 OE和Nup62/Nup43 OE的中位存活時間分別為23天和21天(圖5C)。用RNAi成蟲(Nup62或Nup214)多次暴露于創傷后，檢測其運動功能和壽命。Nup62 mRNA (p <0.01)和Nup214 mRNA (p <0.001)與對照組相比，Nup62和Nup214 RNAi處理組的攀爬水平***降低(圖5D和E)。有趣的是，Nup62 RNAi和Nup214 RNAi處理組創傷后攀爬水平***提高(圖5E, )和速度(圖5F）。
六、核孔病理存在于重復性TBI患者腦組織中，并與TDP-43病理共同聚集
輕度和重度CTE的組織，但年齡不匹配的對照組顯示***和強烈的NUP62免疫反應性(圖6A,B,C）。21例嚴重CTE患者腦組織的NUP62水平明顯高于對照組(圖6D)。輕度CTE病例中NUP62與pTDP-43的共聚集程度有限，而重度CTE病例中NUP62和pTDP-43陽性包體在額葉皮質的共聚集(箭頭)更為明顯(圖6E)。
急性髓系白血病(AML)的靶向***的實施一直具有挑戰性。FTO是一種m6A去甲基酶，作為一種致*基因，促進白血病*基因介導的細胞轉化和白血病發生。因此為大家介紹于2021年3月發表于影響因子為8.579的Theranostics上文章“Saikosaponin D exhibits anti-leukemic activity by targeting FTO/m6A signaling”。在這里，我們研究了Saikosaponin-d (SsD)在AML中***的抗增殖作用中的作用，并通過靶向SsD的FTO來評估m6A去甲基化活性。SsD在體外和體內均能***抑制AML細胞增殖，促進細胞凋亡和細胞周期阻滯。機制上，SsD直接靶向FTO，從而增加了m6A RNA的甲基化，降低了下游基因轉錄本的穩定性，導致相關通路的抑制。重要的是，SsD還克服了FTO/m6A介導的白血病對酪氨酸激酶抑制劑的耐藥性。總之，FTO依賴的m6A RNA甲基化介導了SsD的抗白血病作用，使SsD成為一種***白血病的藥物。阻斷atm依賴的磷酸化會損害DNA損傷后PTEN的亞細胞再分配。
值得注意的是，與對照組相比，NOX4的升高增加了鐵的積累，這是鐵死亡的特異性標志(圖7D)。接下來，我們使用3D分析儀分析NOX4上調后人星形膠質細胞細胞毒性的形態學變化(圖7E)。相對于對照，NOX4的升高誘導了細胞毒性的形態學特征，包括細胞質面積縮小和起泡(圖7E)。此外，與對照組相比，NOX4升高后，形態死亡細胞數量***增加(圖7F)。與形態學分析結果一致，相對于對照，NOX4的升高***增加了細胞毒性水平(圖7G)。這些結果表明，NOX4通過氧化應激誘導的人星形膠質細胞脂質過氧化促進了鐵死亡。
結論：NOX4通過線粒體代謝損傷，氧化應激誘導的脂質過氧化作用促進星形膠質細胞的鐵死亡，這是AD期間星形膠質細胞損傷的一種重要分子機制。 使用motif和CHIP-seq預測影響基因簇表達的轉錄因子。內蒙古課題創新服務
TIMEOR用于推斷基因調控事件之間的關系。湖北課題服務兩年
3）FTO是SsD的直接靶點
基于基因芯片數據，SsD介導的白血病發生抑制主要是由于m6A通路，我們假設SsD可能調節白血病m6ARNA甲基化。我們確定了FTO在白血病發生中起作用。為了驗證SsD與FTO的直接結合，我們首先基于已發表的FTO晶體結構進行分子對接分析。SsD的比較好結合位點表現出與底物結合位點互補的特殊形狀，占據了整個結合口袋(圖3A-B)。4個氨基酸殘基(R96,K216,E234,R332)參與了與SsD的相互作用(圖3C)，在抑制FTO活性方面發揮了關鍵作用。在NB4和Kas-1AML細胞中，SsD與FTO蛋白的結合導致了明顯的熱轉移，表明對熱降解有保護作用(圖3D)。接著，我們利用NMR進一步研究了FTO和SsD之間的相互作用，在滴定過程中觀察到信號的劑量依賴性衰減(圖3E)。這些結果表明，FTO干擾了SsD的狀態。接下來，我們使用LC-MS/MS定量分析了細胞對SsD的攝取(圖3F)。在NB4和Kas-1細胞中，SsD在0.05-0.14nmol/百萬細胞中檢測到。HPLC顯示SsD對體外FTO去甲基化的抑制活性(圖3G)。此外，在無細胞系統中，斑點印跡試驗證實了SsD介導的FTO活性競爭性抑制(圖3H)。綜上所述，FTO是SsD的直接靶點，可能是SsD誘導的白血病細胞生長抑制作用的主要介質。 湖北課題服務兩年
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