3）RIC8A與circPDE4B相互作用，參與OA
為了鑒別與circPDE4B相互作用的蛋白，我們采用RPD-MS(圖3A)，共鑒定出112個與circPDE4B相互作用的蛋白(圖3B)，確定RIC8A。HCs中的RNA-蛋白共定位證實了RIC8A和circPDE4B之間的相互作用(圖3C)。RPD實驗表明，體外線性轉錄的circPDE4B能拉下重組RIC8A(圖3D)。然后，我們使用catRAPID工具預測circPDE4B和RIC8A的相互作用區域(圖3E)。為了識別預測的結合位點，我們將FLcircPDE4B截短為3個片段。據預測，RIP結果顯示有FL和S3被RIC8A拉下(圖3F)。有綜合來看，這些結果表明circPDE4B在HCs中與RIC8A相互作用。我們進一步的研究表明，circPDE4B調控RIC8A蛋白水平，而不是mRNA水平或穩定性(圖3G-I)。我們還阻斷了RIC8A蛋白的合成，并觀察到sh-陰性對照(NC)和sh-circPDE4B的HCs之間的RIC8A蛋白半衰期有明顯差異(圖3J)，說明circPDE4B降低了RIC8A蛋白的穩定性。經PS341處理后，RIC8A在circPDE4B過表達和下調細胞中均未發生變化(圖3K,L)，表明circPDE4B通過蛋白酶體活性調節RIC8A。無論內源性還是外源性RIC8A,RIC8A的多泛素化在circPDE4B耗盡后均下降，在過表達circPDE4B后則上升(圖3O)。綜上，circPDE4B翻譯后影響蛋白酶體介導的RIC8A的降解和周轉。 Pex衍生的CD44v6/C1QBP復合物介導了Pex對肝纖維化和PDAC肝轉移的積極作用。糖尿病課題技術指導
編碼PI3Kαp110α亞基的PIK3CA在多達40%的乳腺*中發生突變，**常見的是雌***受體陽性(ER+)**。突變的PIK3CA在校正ER陽性等有利風險變量時并不是預后的**標記物，但它是改善晚期ER+乳腺*內分泌和PI3K聯合***應答的預測生物標記物。有趣的是，與PTEN等其他PI3K通路改變的**相比，pikca突變ER+乳腺*顯示出極少的AKT***和對AKT信號的依賴。
NPP4B抑制AKT信號，并在三陰性(ER/PR/HER2)和基底樣乳腺*中表現出**抑制活性。此外，INPP4B蛋白在黑色素瘤、卵巢*和前列腺*中表達減少。在小鼠模型中，Inpp4b消融與Tp53/Brca1缺失共同增加了乳腺**外顯率，并與Pten雜合子缺失共同促進體內甲狀腺**的發生和轉移。值得注意的是，INPP4B通過降解PI(3,4)P2，抑制早期核內體的局部AKT2信號通路和EGFR降解。 自噬醫學相關課題地區科學基金英拜生物致力于分子生物行業十余年。
造血干細胞早期命運決定的機制在很大程度上尚不清楚。據推測，譜系特異性轉錄因子(TFs)在噪聲閾值以上的隨機表達可以鎖定一個細胞進入一個獨特的細胞命運。與此相一致的是，在多能造血細胞中觀察到與拮抗譜系相關的基因的共表達，包括關鍵的TFs，這表明在多能細胞室中存在一些細胞亞群，這些亞群允許細胞在譜系承諾之前的命運相反，這一現象被稱為啟動。**近，人類hspc的單細胞RNA測序(scRNA-seq)引入了一個不同的啟動概念。對成人骨髓和胎兒肝臟造血的研究已經確定了造血干細胞和多能祖細胞(MPPs)的亞群，這些亞群具有協調表達的標記基因，特異于不同的單胎分化程序，并沿著所有分化分支逐漸增加。有一些跡象表明，星狀細胞間室的譜系啟動可能不僅發生在轉錄水平，也發生在表觀遺傳水平。來自成人骨髓表型hspc的轉座酶可及染色質測序(scATAC-seq)的單細胞分析數據顯示，表型MPPs在染色質可及性方面存在差異。
細胞周期蛋白依賴性激酶4和6(CDK4/6)的藥理學抑制劑是***受體陽性乳腺*的獲批***藥物，目前正在其他**類型的數百項臨床試驗中進行評價。這些抑制劑的臨床成功在很大程度上歸因于定義明確的**內在細胞抑制機制，而其作為免疫調節劑的新作用知之甚少。本研究利用整合的表觀基因組、轉錄組學和蛋白質組學分析，證明了CDK4/6抑制劑在促進免疫T細胞記憶的表型和功能獲得中的新作用。本文的機制見解拓寬了CDK4/6抑制劑作為增強抗**T細胞免疫的臨床工具的前瞻性效用。本研究于2 021年5月14日發表在《Cancer Discovery》IF:29.497期刊上。高通量測序后續的機制實驗。
VDR***STZ誘導的糖尿病小鼠AMPK.
為了進一步證實VD-VDR對高糖環境下AMPK***的影響，我們檢測了STZ誘導的糖尿病小鼠AMPK-ULK1的磷酸化水平。如圖8所示，STZ誘導的糖尿病小鼠PRKAA1和ULK1磷酸化水平降低，KO+STZ小鼠的這種變化更明顯。此外，paricalcitol或VDR過表達促進PRKAA1和ULK1磷酸化，盡管WT+STZ組和OE+STZ組之間沒有統計學差異。我們還通過免疫熒光染色檢測了p-PRKAA1的水平，其變化趨勢與蛋白印跡相似。結合圖3E的結果，我們推測在STZ誘導的糖尿病腎臟中，VDR需要VD***才能有效磷酸化PRKAA1，然后調節自噬。綜上所述，VD-VDR通過***AMPK-ULK1通路恢復了stz誘導的糖尿病小鼠腎臟缺陷的自噬。 動物建模模型實驗的整體服務?？臻g轉錄組學課題服務兩年
Pex調節HSC的ECM分泌。糖尿病課題技術指導
METTL3促進小鼠ESCC細胞增殖和**生長
為了確定METTL3在細胞增殖中的作用，通過轉染METTL3shRNAs來去除ESCC細胞中的METTL3。發現METTL3缺失減少了這些細胞的增殖和集落數。通過在KYSE180和KYSE450中重組表達METTL3，這些抑制作用被消除。
接下來在KYSE450細胞中建立四環素誘導的METTL3表達。四環素***以劑量依賴的方式增加METTL3的表達，相應地引起細胞增殖水平的增加和集落形成水平的增加。與野生型（WT）METTL3的過表達相比，在ESCC細胞中METTL3非活性突變體的過表達未能促進細胞生長和增殖。這些結果有力地表明，METTL3促進**細胞增殖依賴于其表達水平和完整的活性。
為了確定METTL3在小鼠**生長中的作用，將KYSE180或KYSE450細胞皮下注射到裸鼠體內，發現METTL3缺失降低了**大小、體積和重量。與表達METTL3非活性突變體引起的有限效應相比，WTMETTL3過表達極大地促進了**生長。這些結果表明METTL3的表達有助于小鼠**的生長。 糖尿病課題技術指導
公司特色是以各式高通量二代測序為基礎，利用生物數據信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細胞實驗平臺，提供課題整體設計外包、撰寫SCI論文一站式服務。公司實驗平臺落座在漕河涇開發區浦江園區，實驗平臺開放參觀，客戶可隨時參觀實驗并參與實驗課題的進度，保證您的實驗是在您的指導下完成。
1.整體課題外包服務：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經典通路研究，設計的課題均具有后續實驗課題的延展性，為您的標書奠定較好的基礎
2.標書申請：提供標書課題設計、撰寫，標書部分基礎實驗的開展，設計的標書均符合科研前沿熱點，中標率很高。
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4.二代測序：轉錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序
5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實驗：DNA甲基化實驗（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實驗
7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，FISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學實驗