8.EVs介導的ELNAT1上調HLECs中SOX18的表達
qRT-PCR分析UM-UC-3-EV1載體或UM-UC-3-EVELNAT1處理的HLECs中淋巴管生成相關基因的表達，結果顯示SRY-box轉錄因子18（SOX18）是**明顯的與EVs介導的ELNAT1表達正相關的基因（Figure8A,B）。此外，ChIRP分析表明EVs介導的ELNAT1與HLECs中SOX18啟動子的771~786bp（p4）直接相互作用（Figure8C,D）。SOX18-p4區域的突變降低了EVs介導的ELNAT1誘導的熒光素酶活性（Figure8E,F），表明SOX18-p4對于EVs介導的ELNAT1誘導HLECs中SOX18的上調至關重要。hnRNPA1和H3K4me3在SOX18啟動子上的富集與EVs介導的ELNAT1表達***相關（Figure8G,J）。EVs介導的ELNAT1過表達增強了HLECs的管形成和遷移能力，而干擾SOX18則HLECs的管形成和遷移能力受損（Figure8K,M），表明SOX18是EVs介導的ELNAT1驅動體外BCa淋巴管生成所必需的。綜上所述，這些結果表明，EVs介導的ELNAT1通過轉錄上調HLECs中SOX18的表達來促進BCa淋巴管生成。 外泌體CD44v6和C1QBP可能是預測PDAC患者預后的有前途的生物標志物。snoRNA課題設計實驗
NRF2是阻斷鐵死亡的關鍵介質，TYRO3過表達的293T細胞中NRF2轉錄活性增加。TAM激酶下游的PI3K/AKT信號通路可增加NRF2轉錄活性，TYRO3-OE介導的NRF2轉錄***被AKT抑制劑MK2206消除。這些結果表明TYRO3通過AKT/NRF2軸抑制鐵死亡。吞噬細胞對瀕死細胞的***依賴于對凋亡細胞暴露的“吃我信號”的識別。磷脂酰絲氨酸(PS)是一種關鍵的“吃我”分子，可與橋接分子結合，如TAM激酶配體蛋白S(Pros1)和Gas6。Pros1在與PS結合時同時***TYRO3。Pros1處理4T1和PY8119**細胞可抑制erastin誘導的脂質過氧化作用，表明凋亡細胞的Pros1“吃我”信號可以通過TYRO3抑制**細胞鐵死亡。帕金森小鼠模型課題產學研合作也是***PDAC肝轉移的潛在靶點。
生物標志物是生物體中可測量的物質或特征，它指示某些現象，例如狀況，疾病，飲食，干預措施或環境暴露。在這方面，生物標記物可分為三種類型：（i）分子（化學物質，蛋白質或基因），（ii）細胞（細胞類型，細胞形態，組織組織學）或（iii）成像（X射線，CT） ，PET或MRI功能）。生物標記物類型的選擇在很大程度上取決于所研究的現象和所研究的生物系統。在醫學中，生物標志物的主要目的是診斷，預后或預測疾病。它們還可以用于評估藥物，***，污染物，食物或其他攝入物質的暴露。
在與轉染sh陰性對照(CoshCtrl)的PANC-1細胞共培養過程中，與轉染shROR (CoshROR)相比，成熟脂肪細胞表現出脂滴明顯減少，細胞外觀呈拉長狀，類似成纖維細胞的形態。為了確定外泌體linc-ROR誘導脂肪細胞脫分化的機制，采用western blot和實時熒光定量PCR分析PID 11不同實驗條件下脂肪細胞的基因表達水平。正如預期的那樣，在一些成熟的脂肪細胞特異性標記物，如葡萄糖轉運體-4 (GLUT4)、增殖***受體γ (ppar)和***敏感脂肪酶(HSL)的表達方面，我們觀察到，與CoshROR或單個脂肪細胞(PBS-Adi)組相比，CoshCtrl組明顯降低了它們的表達水平。此外，還檢測了一些成纖維細胞特異性基因的表達水平，如α平滑肌肌動蛋白(α-SMA)、基質金屬蛋白酶11 (MMP11)和膠原蛋白I。共培養6天后其表達水平***升高，進一步支持脂肪細胞向成纖維細胞樣細胞的脫分化過程。使用motif和CHIP-seq預測影響基因簇表達的轉錄因子。
ChIP分析結果表明，高濃度si-circ#2轉染后FIR和FUSE的結合水平高于低濃度si-circ#2轉染后FIR和FUSE的結合水平。此外，沉默 FIR 顯著增強了 MYC 的表達，而過表達 FIR 通過 qRT-PCR 和 BC 細胞中的蛋白質印跡降低了 MYC 的水平。OE-FIR 或 sh-FIR 與 circACTN4 或 si-circ#2 共轉染后，我們發現過表達 FIR 可以逆轉 circACTN4 對 MYC 表達的增強作用，而 FIR 敲低可以抵消下調的抑制作用qRT-PCR 在 MYC 水平上檢測到 circACTN4。總之，這些結果表明circACTN4可以抑制FIR和FUBP1的結合以減輕FIR的抑制作用，從而促進MYC轉錄。有肝轉移的PDAC患者外泌體CD44v6和C1QBP的表達明顯高于無肝轉移的PDAC患者。北京課題課題設計
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MB患者血漿來源的外泌體中miR-101-3p和miR-423-5p水平上調，這些miRNA可通過外泌體轉移到**細胞中
在初步篩選中，使用超離心法從MB患者和健康對照組的血漿中分離出外泌體。通過透射電子顯微鏡分析分離出的外泌體，確定外泌體的平均大小和形態，顯示出典型的直徑<150nm的雙層球形結構。為了進一步驗證我們的外泌體制劑，我們通過westernblot檢測了外泌體標志物CD9、CD63和GM130的表達。分離的顆粒外泌體**蛋白標記CD9和CD63陽性，GM130陰性。此外，我們通過miRNA-seq研究了血漿外泌體的miRNA表達譜。我們發現與健康對照組相比，MB患者中有35個miRNA上調，5個miRNA下調。 snoRNA課題設計實驗
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4.二代測序：轉錄組測序、smallRNA測序、snoRNA測序、TRF測序
5.芯片：信號通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實驗：DNA甲基化實驗（BSP,MSP，焦磷酸測序），RNA甲基化實驗
7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，FISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學實驗