醫(yī)學(xué)相關(guān)科研國家自然科學(xué)基金

2.Lnc-PMIF抑制OPCs遷移到骨形成表面

在成骨細(xì)胞分化過程中，lnc-PMIF在早期增加，在礦化啟動(dòng)后減少，表明lnc-PMIF可能在成骨分化的早期階段發(fā)揮作用。過表達(dá)/敲低lnc-PMIF不影響OPCs的增殖和成骨分化。敲低lnc-PMIF的細(xì)胞遷移減弱，敲低組細(xì)胞處理的小鼠脛骨中Dil標(biāo)記細(xì)胞數(shù)量升高，小鼠中l(wèi)nc-PMIF表達(dá)更高。這些表明lnc-PMIF可抑制OPCs向骨形成表面的遷移，而不干擾其增殖和成骨潛能。

3.Lnc-PMIF與HuR相互作用抑制β-actin的表達(dá)以抑制OPC遷移

為探索Lnc-PMIF介導(dǎo)的OPC遷移的調(diào)節(jié)機(jī)制。RNApulldown-MS實(shí)驗(yàn)尋找lnc-PMIF的相互作用蛋白，鑒定出一種RNA結(jié)合蛋白HuR，WB證實(shí)HuR在生物素標(biāo)記的lnc-PMIF細(xì)胞裂解的下拉組分中富集，RNA免疫沉淀(RIP)試驗(yàn)lnc-PMIF與HuR的結(jié)合。 METTL14的上調(diào)可以通過m6A修飾降低PERP水平。醫(yī)學(xué)相關(guān)科研國家自然科學(xué)基金

2）TGF-β1促進(jìn)腎小管上皮細(xì)胞分泌外泌體，并在體外***成纖維細(xì)胞我們研究了腎小管來源的外泌體在介導(dǎo)成纖維細(xì)胞***中的潛在作用。TGF-β1作為主要的成纖維因子，用于刺激UUO腎損傷/應(yīng)激小管細(xì)胞的狀態(tài)。不同濃度TGF-β1伴或不伴GW4869孵育24小時(shí)后，NRK-52E細(xì)胞與無外泌體培養(yǎng)基孵育24小時(shí)，從條件培養(yǎng)基中收集外泌體來刺激正常大鼠腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞(NRK-49F細(xì)胞)。如圖2B-D所示，NTA、DLS和TEM顯示大部分分離的細(xì)胞外囊泡為外泌體。CD63的Westernblot分析證實(shí)，外泌體的分泌依賴于TGF-β1的濃度，而GW4869處理明顯抑制了細(xì)胞外基質(zhì)的沉積(圖2E-F)。隨后我們用PKH-67標(biāo)記NRK-52E細(xì)胞，熒光強(qiáng)度***增強(qiáng)，進(jìn)一步證實(shí)TGF-β1處理后外泌體分泌增加。此外，PKH-67標(biāo)記的外泌體與NRK-49F細(xì)胞孵育后被成纖維細(xì)胞吸收。從TGF-β1處理的NRK-52E細(xì)胞中分離的外泌體能夠誘導(dǎo)NRK-49F細(xì)胞增殖和基質(zhì)生成，表現(xiàn)為α-SMA、PCNA、Col-I和纖連蛋白表達(dá)增加。而GW4869處理明顯逆轉(zhuǎn)了上述變化。自噬醫(yī)學(xué)相關(guān)科研實(shí)驗(yàn)外包嘌呤在細(xì)胞中執(zhí)行許多重要的功能。

固醇調(diào)控元件結(jié)合蛋白(SREBPs)是***高脂血癥特征性膽固醇、脂肪酸和甘油三酯生物合成的主要轉(zhuǎn)錄因子。本研究中發(fā)現(xiàn)了一種小分子，白樺素，它通過誘導(dǎo)SREBP裂解***蛋白(SCAP) 與Insig相互作用特異性地抑制SREBP的成熟，進(jìn)而降低膽固醇和脂肪酸的生物合成，改善飲食誘導(dǎo)的肥胖，降低血清和組織中的脂質(zhì)含量，提高胰島素敏感性，減小***斑塊的大小。樺樹皮中含有豐富的白樺素，有望成為開發(fā)***高脂血癥藥物的先導(dǎo)化合物。本研究于2021年1月發(fā)表在《Cell Metabolism》IF:21.567期刊上。

7）在體外，上調(diào)UCP1減少AKI期間的脂質(zhì)積累可通過AMPK/ULK1途徑促進(jìn)自噬

自噬已被證實(shí)在AKI中發(fā)揮重要作用。因此，自噬已經(jīng)成為我們關(guān)注的重要途徑之一。在通過慢病毒轉(zhuǎn)染過表達(dá)UCP1或UCP1激動(dòng)劑CL316243的AKI細(xì)胞模型中，自噬相關(guān)指標(biāo)顯示AMPK/ULK1/自噬通路******(圖7A-B)。電子顯微鏡圖像也顯示，上調(diào)UCP1消除AKI中的脂質(zhì)積累后，細(xì)胞自噬得到促進(jìn)(圖7C)。基于這些發(fā)現(xiàn)，為了驗(yàn)證自噬在UCP1功能中的重要性，我們進(jìn)行了功能恢復(fù)實(shí)驗(yàn)。如圖7D-F所示，氯喹抑制自噬***逆轉(zhuǎn)了順鉑組UCP1引起的炎癥指標(biāo)下降。同樣，TUNEL染色顯示，使用氯喹抑制自噬，可以明顯逆轉(zhuǎn)UCP1促進(jìn)的凋亡抑制作用(圖7G)。這些結(jié)果表明，脂質(zhì)積累通過作用于AKI細(xì)胞自噬，在調(diào)節(jié)細(xì)胞功能方面發(fā)揮著重要作用。 Th1/Th2細(xì)胞失衡也是結(jié)腸炎的一個(gè)重要特征。

作者進(jìn)行了PAR-CLIP實(shí)驗(yàn)，以評估SLC7A11 mRNA-YTHDC2相互作用是否依賴于m6A甲基化。結(jié)果表明，在H1299細(xì)胞中，通過過表達(dá)METTL3來提高m6A的甲基化水平，促進(jìn)YTHDC2與SLC7A11 mRNA的結(jié)合(圖6D)。無論METTL3是否過表達(dá)，YTH結(jié)構(gòu)域的缺失都阻斷了SLC7A11 mRNA-YTHDC2的相互作用(圖6D)。作者通過SLC7A11 3’-UTR探針進(jìn)行RNA-pull down實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)YTHDC2WT，優(yōu)先結(jié)合于含有m6A的SLC7A11 mRNA的3'UTR，而不是含有未甲基化腺苷的mRNA(圖6E)。此外，YTHDC2傾向于結(jié)合m6A共識(shí)基元GGAC (圖6E)。通過在H1299和H1975細(xì)胞中進(jìn)行METTL3的功能增加和丟失實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)SLC7A11 mRNA-YTHDC2的相互作用是由m6A水平?jīng)Q定的(圖6F和G)。這些數(shù)據(jù)表明YTHDC2優(yōu)先與m6A甲基化的SLC7A11 mRNA結(jié)合。乳酸菌是益生菌在嘌呤代謝中發(fā)揮關(guān)鍵作用。河南科研實(shí)驗(yàn)可參觀

英拜跟客戶形成產(chǎn)學(xué)研合作模式。醫(yī)學(xué)相關(guān)科研國家自然科學(xué)基金

7）MIR210HG通過miR-337-3p和miR-137促進(jìn)**進(jìn)展

為了確定MIR210HG下調(diào)對Ishikawa和HEC-1A細(xì)胞系惡性行為的抑制作用是否通過miR-337-3p/137介導(dǎo)，我們進(jìn)行了功能挽救實(shí)驗(yàn)。結(jié)果證實(shí)MIR210HG沉默對Ishikawa和HEC-1A細(xì)胞遷移和侵襲的惡性抑制作用被miR-337-3p/137敲低***逆轉(zhuǎn)(圖7A-7E)。這表明MIR210HG通過miR-337-3p/137調(diào)控Ishikawa和HEC-1A細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為。

8）抑制MIR210HG和miR-337-3p/137過表達(dá)抑制**生長

我們測定了MIR210HG和miR-337-3p/137在體內(nèi)**模型中的功能。裸鼠實(shí)驗(yàn)中，每組實(shí)驗(yàn)小鼠3只。結(jié)果表明與對照組相比，轉(zhuǎn)染sh-MIR210HG并過表達(dá)miR-337-3p和miR-137降低了**體積(圖8A)。轉(zhuǎn)染shMIR210HG并同時(shí)過表達(dá)miR-337-3p和miR-137的組**體積**小。免疫組化分析顯示，與單獨(dú)轉(zhuǎn)染agomir-337-3p/137和sh-MIR210HG組相比，共轉(zhuǎn)染組HMGA2和Ki-67的表達(dá)較低(圖8B)。

結(jié)論：MIR210HG在子宮內(nèi)膜*患者中是一個(gè)**的預(yù)后因素，干擾MIR210HG的體內(nèi)外表達(dá)可抑制子宮內(nèi)膜*細(xì)胞的惡性表型。MIR210HG-miR-337-3p/137被發(fā)現(xiàn)介導(dǎo)HMGA2調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜*細(xì)胞惡性行為的能力。MIR210HG-miR-337-3p/137-HMGA2軸是新的子宮內(nèi)膜*分子預(yù)后標(biāo)志物和潛在的***靶點(diǎn)。 醫(yī)學(xué)相關(guān)科研國家自然科學(xué)基金

公司特色是以各式高通量二代測序?yàn)榛A(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過英拜生物自有的分子、病理以及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，提供課題整體設(shè)計(jì)外包、撰寫SCI論文一站式服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)平臺(tái)落座在漕河涇開發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實(shí)驗(yàn)平臺(tái)開放參觀，客戶可隨時(shí)參觀實(shí)驗(yàn)并參與實(shí)驗(yàn)課題的進(jìn)度，保證您的實(shí)驗(yàn)是在您的指導(dǎo)下完成。

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7.實(shí)時(shí)定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(靶基因驗(yàn)證，過表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)