RIG-I對circNDUFB2誘導的免疫反應至關重要
RIG-I樣受體（RLR）家族可識別病毒RNA 會通過產(chǎn)生IFN和促炎性細胞因子來觸發(fā)針對病毒***的先天免疫反應。已經(jīng)報道外源circRNA有效刺激由RIG-1介導的免疫信號傳導。從qRT-PCR分析獲得的數(shù)據(jù)表明，RIG-1敲低消除了circNDUFB2過表達誘導的免疫反應，RIG-1被circNDUFB2上調。為了研究circNDUFB2和RIG-I之間的關聯(lián)，進行RIP分析和RNA FISH免疫熒光實驗。 結果表明circNDUFB2與RIG-1結合，并且它們共定位在細胞質中。 circNDUFB2過表達后， circNDUFB2顯著上調了RIG-1，IRF7，IFNβ和TNF的蛋白水平，而circNDUFB2則不影響P65和IRF3的蛋白水平。 大部分circSDHC定位于細胞質.重慶外泌體標書
為了檢測該多肽產(chǎn)物，我們使用了一種識別MAPK1中間部分的抗體(圖4d)。Western Blot檢測40對胃*組織(圖4e)和細胞系(圖4f)中MAPK1-109aa和MAPK1的水平。通過半定量分析，胃*組織中MAPK1-109aa水平較正常胃組織中降低。Kaplan-Meier生存分析顯示，MAPK1-109aa表達水平較高的胃*患者總生存期明顯長于MAPK1-109aa表達水平較低的胃*患者(圖4h)。一系列GC細胞系中MAPK1-109aa的含量也明顯低于正常胃粘膜細胞系GES-1。在內(nèi)源性circMAPK1水平較低且?guī)缀鯖]有MAPK1-109aa表達的MKN45細胞中，轉染circMAPK1和MAPK1-109aa質粒均產(chǎn)生預測的MAPK1-109aa帶，而過表達circMAPK1 IRES突變質粒則沒有產(chǎn)生預測的MAPK1-109aa帶(圖4i)。相反，在內(nèi)源性circMAPK1和MAPK1-109aa更高表達的GES-1細胞中，發(fā)現(xiàn)兩種特異性靶向circMAPK1連接的shRNA***降低了MAPK1-109aa的表達(圖4j)。使用anti-flag抗體進行免疫熒光檢測，證實MAPK1-109aa-Flag位于過表達MAPK1-109aa-Flag質粒的MKN45細胞的胞質中，如圖4k所示。褪黑素標書中標率高circNDUFB2觸發(fā)NSCLC細胞的免疫防御反應。
1）USP35敲除抑制肺*細胞生長、集落形成和**進展
我們首先檢測了肺*組織和細胞系中USP35豐度的變化。如圖1A所示，USP35在肺ADC和SCC**中都***上調。與正常的BEAS2B和HBE肺上皮細胞系相比，USP35mRNA水平在肺*細胞系(A549、H358、H460、H1299和H1650)中也高度表達(圖1B)。鑒于H460和H1299細胞中USP35mRNA的豐度較高，我們在下一項研究中使用了這兩種細胞系。與mRNA水平一致，在H460和H1299細胞中USP35蛋白也增加了(圖1C)。為了闡明USP35在肺*發(fā)病機制中的作用，我們在H460和H1299細胞中沉默了USP35(圖1D)。有趣的是，USP35敲除抑制了H460和H1299細胞在體外的生長能力和集落形成(圖1E、F)。來自**異種移植實驗的數(shù)據(jù)進一步表明，USP35沉默抑制了25天生長后的**體積和重量(圖1G，H)。總之，USP35在調節(jié)肺*細胞生長和**進展中起著關鍵作用。
3）IGF-1信號在Pex誘導的HSC活化和肝纖維化中至關重要
為了進一步探索Pex調控HSC行為的機制，我們比較了Pex和Npex組間的HSC的RNA測序基因表達譜(圖3A)。在差異表達基因中，我們觀察到41個重疊的上調基因在Pan02exo組與Npex組和KPCexo組與Npex組之間存在部分交集(圖3B)。主要涉及的基因參與細胞外空間、細胞外區(qū)域和ECM(圖3C)，表明Pex調節(jié)HSC的ECM分泌。此外，GO和KEGG通路分析顯示，IGF-1及其下游PI3K/AKT是受Pex影響的排名比較高的信號通路(圖3D，E)。westernblot分析支持了Pex***增加HSC中IGF-1R、IRS-1和AKT磷酸化的發(fā)現(xiàn)(圖3F)。當使用IGF-1R抑制劑時，Pex誘導的p-IGF-1R、p-IRS-1和p-AKT的上調被阻斷(圖3G)。基于這些結果，我們推測IGF-1信號可能是介導Pex依賴的HSC活化的關鍵因素。與預期的一樣，IGF-1R抑制劑抑制了Pex誘導的HSC的活化、增殖和遷移(圖4A-D)。此外，IGF-1R抑制劑逆轉了Pex誘導的HSC中ECM的產(chǎn)生(圖4E)。我們的體內(nèi)實驗表明，IGF-1R抑制劑可以阻斷Pex誘導的肝纖維化(圖4F-I)。這些數(shù)據(jù)表明IGF-1信號在Pex誘導的肝纖維化中起重要作用。 免疫組織學染色顯示TNFαIL-1β和NF- κ b陽性染色主要分布在結腸黏膜層。
8）人類乳腺*患者中LINC00926和PGK1表達的相關性及LINC00926與葡萄糖攝取的相關性
我們通過IHC和FISH檢測109例人乳腺*樣本中PGK1和LINC00926的表達情況。與培養(yǎng)細胞中LINC00926抑制PGK1的結果一致，LINC00926的表達與PGK1的表達呈負相關，與FOXO3A呈正相關(圖8A)。通過18FDGPET掃描評估葡萄糖攝取增加的乳腺**患者顯示LINC00926和FOXO3A表達降低，而PGK1表達增加(圖8B)。綜上所述，這些數(shù)據(jù)表明了LINC00926/PGK1軸在乳腺*中的重要病理作用。
結論我們的研究***證實了LINC00926通過抑制糖酵解關鍵酶PGK1的表達來抑制糖酵解，從而在體內(nèi)外抑制乳腺*細胞的增殖、侵襲和轉移。在乳腺*患者中，F(xiàn)OXO3A調控的LINC00926與PGK1表達呈負相關。這些發(fā)現(xiàn)概述了FOXO3A/LINC00926/PGK1軸在Warburg效應和乳腺**發(fā)生進展中的重要性。因此，上調LINC00926可能是***PGK1過表達的乳腺*患者的一種有前途的方法。 WB結果顯示結腸中炎癥分子的相對表達似乎低于脊髓中的。西安納米顆粒標書
水蘇糖減輕DHEA誘導的多囊卵巢綜合征大鼠卵巢功能障礙.重慶外泌體標書
6）Pex衍生的CD44v6和C1QBP的高表達預示著PDAC患者的肝轉移和低生存率采用免疫組化和westernblot檢測肝轉移灶周圍肝組織和正常肝組織的纖維化ECM微環(huán)境。與體內(nèi)實驗一致，纖維連接蛋白、I型膠原和α-SMA水平***升高，而玻連蛋白和固生蛋白C水平下調(圖7A，B)。接下來，我們研究了外泌體衍生CD44v6和C1QBP在PDAC患者中的預后價值。外泌體CD44v6和C1QBP在PDAC組織中的表達明顯高于正常胰腺組織(圖7C)。此外，有肝轉移的PDAC患者外泌體CD44v6和C1QBP的表達明顯高于無肝轉移的PDAC患者(圖7C)。免疫電鏡顯示，CD44v6和C1QBP在PDAC組織來源的EVs***表達(圖7D)。Pex中CD44v6和C1QBP高表達的患者比其他患者更容易發(fā)生肝轉移(圖7E)。重慶外泌體標書
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