4）Pex來源的CD44v6對于HSCs的***是必要的，但不是充分的
我們之前的研究揭示了CD44v6參與調(diào)控PDAC細胞的IGF-1通路。因此，我們首先驗證了CD44v6在外泌體中的表達，發(fā)現(xiàn)CD44v6在Pex中的表達水平明顯高于Npex(圖5A)。為了研究CD44v6是否能夠被傳遞到受體細胞中，我們采用蛋白合成抑制劑環(huán)己酰亞胺檢測加入Pex后CD44v6的蛋白水平。westernblot分析顯示，加入Pex后，HSCs中CD44v6的表達水平明顯增加(圖5B)。與Npex-孵育的細胞相比，CD44v6的表達水平保持不變(圖5B)。我們還進行了免疫熒光分析，檢測出HSC膜中CD44v6與Pan-cadherin共定位(圖5C)。這些結(jié)果表明，Pex可將CD44v6輸送到HSC膜。此外，westernblot檢測表明，敲除CD44v6或使用抗CD44v6抗體的Pex強烈減弱了Pex誘導的IGF-1信號通路的***(圖5D)。同時，在CD44v6-kdPex或CD44v6抗體的作用下，Pex誘導的HSC活化(圖5E，F(xiàn))、ECM重塑(圖5G)的積極作用***減少。為了闡明CD44v6在Pex誘導的HSC***中的作用，我們進一步研究了過表達CD44v6在HSC中是否與Pex具有同樣的***HSC的作用。然而，過表達CD44v6并沒有像預期的那樣提高α-SMA的表達(圖5H)。這些結(jié)果表明，CD44v6在Pex誘導的HSC***中發(fā)揮了重要作用。 我們使用抗體陣列評估了表達PTEN- wt或PTEN- 398a的MCF10A細胞裂解液的應(yīng)激反應(yīng)和凋亡通路的活性。免疫熒光課題協(xié)同創(chuàng)作
6、外泌體miR-138-5p促進乳腺*肺轉(zhuǎn)移
極化的巨噬細胞在決定**細胞的表型中起著重要的作用。因此，探究M2巨噬細胞外泌體miR-138-5p處理是否有助于乳腺*小鼠異**模型的**轉(zhuǎn)移。使用氯膦酸鈉***小鼠巨噬細胞，然后轉(zhuǎn)移使用過表達miR-138-5p的T47D或T47D細胞來源的外泌體處理的Raw264.7細胞。小鼠模型通過尾靜脈注射4T1-熒光素酶細胞構(gòu)建（圖6A）。結(jié)果顯示，外泌體miR-138-5p處理組***促進小鼠體內(nèi)乳腺*細胞的**體積和肺轉(zhuǎn)移，同時增加了CD206和Arg-1陽性細胞數(shù)（圖6B-E）。這些結(jié)果表明外泌體miR-138-5p誘導的M2巨噬細胞促進乳腺*的肺轉(zhuǎn)移。 VEGF課題協(xié)同創(chuàng)作高通量測序后續(xù)的機制實驗。
3、白樺素可以改善小鼠飲食導致的肥胖并增加能量消耗
接下來，研究了白樺素在體內(nèi)的作用。洛伐他汀是一種HMGCR抑制劑，具有良好的有益作用，將其與白樺素進行比較。用對照（鹽水），洛伐他汀（30mg/kg/day）或白樺素（15或30mg/kg/day）處理西式飲食（WD）的C57BL/6J小鼠6周。在***期間，未觀察到白樺素或洛伐他汀的明顯毒性，并且不同組的小鼠顯示出相似的食物攝入（圖4A）。有趣的是，盡管小鼠以30mg/kg/day加WD飲食喂養(yǎng)的老鼠比chow飲食喂養(yǎng)的小鼠重，但它們的體重增加比WD喂養(yǎng)的老鼠少，這表明在此劑量下，白樺素和洛伐他汀可以預防飲食引起的肥胖癥（DIO）（圖4B）。洛伐他汀對體重的影響與以前的報道一致。
1）NOX4水平在阿爾茨海默病患者皮質(zhì)區(qū)受損星形膠質(zhì)細胞中升高
為了探討NOX4在AD患者星形膠質(zhì)細胞損傷中的作用，我們分析了AD患者大腦皮質(zhì)星形膠質(zhì)細胞中NOX4蛋白水平是否升高。我們采用免疫熒光染色法檢測AD患者或非AD供者(正常)顳葉皮質(zhì)組織GFAP陽性星形膠質(zhì)細胞中的NOX4蛋白水平(圖1A和B)。免疫熒光染色顯示AD患者皮質(zhì)區(qū)分子層GFAP陽性星形膠質(zhì)細胞中NOX4陽性染色強度相對于非AD供者增加(圖1A)。此外，AD患者皮質(zhì)區(qū)ML中受損的GFAP陽性星形膠質(zhì)細胞中的NOX4陽性染色強度高于非AD供者(圖1A和B)。值得注意的是，AD患者中NOX4與GFAP亞細胞共定位陽性的受損星形膠質(zhì)細胞數(shù)量***增加(圖1C)。與非AD供者相比，每一位AD患者的NOX4水平普遍較高。這些結(jié)果提示，AD患者星形膠質(zhì)細胞受損時NOX4蛋白水平升高。 我們接下來研究了Pex對HSCs生物學行為的影響。
背景：超過100個不同的RNA修改特征已經(jīng)在過去的幾十年里,其中,該N6-methyladenosine(m6A)修改是**豐富的形式在真核mRNA。不同的m6A讀者蛋白優(yōu)先區(qū)分轉(zhuǎn)錄組范圍內(nèi)的RNAm6A景觀。在細胞質(zhì)中，大多數(shù)YTH(YTHDF1-3和YTHDC2)和IGF2BP(IGF2BP1-3)家族蛋白與m6a修飾的mrna結(jié)合并調(diào)節(jié)其穩(wěn)定性和翻譯。此外，其他蛋白質(zhì)可以結(jié)合m6a修飾的前體rna在細胞核內(nèi)，并影響其加工。
m6a相關(guān)基因缺陷影響多種生物過程。例如，metttl3的缺失導致受損的胚胎干細胞退出自我更新走向分化;抑制METTL14導致明顯的胚胎生長遲緩;斑馬魚胚胎中YTHDF2的消融延遲了早期胚胎發(fā)育中的母-合子過渡。特別是，RNAm6a相關(guān)基因正在成為在各種**中促進**啟動和進展的關(guān)鍵調(diào)控因子，包括肺*中的metttl3、肝*中的metttl14、白血病中的FTO和乳腺*中的ALKBH5。然而，m6A如何調(diào)節(jié)*變以及下游通路和機制如何傳遞這些信號尚不完全清楚。 阻斷atm依賴的磷酸化會損害DNA損傷后PTEN的亞細胞再分配流式課題整體服務(wù)
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10.EVs介導的ELNAT1與BCa淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)
確定EVs介導的ELNAT1在BCa淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的臨床意義十分重要。首先，作者發(fā)現(xiàn)來自BCa患者的尿中EVs與配對BCa組織的ELNAT1表達呈正相關(guān)，這意味著EVs介導的ELNAT1是BCa中ELNAT1調(diào)控的重要參與者（Figure10A）。同時，BCa患者的尿中EV介導的ELNAT1過表達與BCa的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)（Figure10B）。EV介導的ELNAT1表達較高的BCa患者總生存期（OS）和無病生存期（DFS）率較短（Figure10C-D）。ROC分析顯示尿液中EV介導的ELNAT1可有效區(qū)分BCa患者與健康志愿者（Figure10E）。與尿液細胞學和FISH檢查結(jié)果相比，尿液中EVs介導的ELNAT1診斷BCa-LN轉(zhuǎn)移的準確性很高（Figure10F）。BCa患者血清中EVs介導的ELNAT1表達水平高于健康對照組（Figure10G）。與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的BCa患者血清相比，伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的BCa患者血清中EVs介導的ELNAT1表達上調(diào)（Figure10H）。
結(jié)論：EVs介導的ELNAT1促進了BCa的淋巴管生成和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。充分闡明EVs介導的ELNAT1***hnRNPA1/UBC9/ SOX18軸誘導BCa淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的精確機制，不僅將增加我們對EVs介導的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的認識，也將有助于開發(fā)一種***BCa的有效策略。 免疫熒光課題協(xié)同創(chuàng)作
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