LCAT3與FUBP1發生物理作用，FUBP1在LUAD中也過表達
為了闡明LCAT3在肺*細胞中作用的潛在分子機制，我們進行了RNA下拉試驗來鑒定LCAT3結合蛋白。從凝膠中剪切LCAT3義和反義之間的明顯波段用于質譜分析。FUBP1因其與LCAT3的特異性結合而被選擇進行進一步研究。此外，采用抗FUBP1抗體進行RIP檢測，進一步證明FUBP1與LCAT3之間的相互作用。與FUBP1結合的**序列為LCAT3的208-342nt，形成莖環結構。因此，我們使用LCAT3的208-342nt片段進行RNA拉下分析。結果證實該莖環區(208-342nt)確實負責LCAT3和FUBP1之間的結合。前人研究表明，FUBP1可以分為三個結構域，分別是抑制結構域、DNA和RNA結合結構域和轉錄結構域。因此，我們構建了flag標記的全長野生型FUBP1突變體的類型和三個缺失域突變體。RIP實驗顯示，LCAT3主要結合于DNA和RNA結合區域(100-447aa)。綜上所述，這些數據表明LCAT3與FUBP1發生物理作用，LCAT3的莖環區(208-342nt)和FUBP1的DNA和RNA結合域(100-447aa)是LCAT3與FUBP1結合所必需的。此外，我們發現，FUBP1的mRNA和蛋白水平在LUAD中均***上調，且在肺*患者中，FUBP1的高表達與較短的生存時間相關。 大黃酸導致嘌呤代謝正常化和腸道尿酸水平的降低。天津科研贈送提供技術路線
四、在體內和體外，NUPs的上調導致TDP-43/TBPH定位錯誤和聚集
為了檢測Nup上調對Tbph (Drosophila TDP-43)病理的影響，我們建立了一個位點特異性Nup62過表達(Nup62 OE)蠅線，并對內源性Tbph進行染色。在eGFP對照(以下稱為對照)表達的果蠅幼蟲VNC中，Tbph的分布以細胞核為主，而Nup62 OE幼蟲VNC***改變了Tbph的定位，出現細胞質聚集(圖4A)。定量分析顯示，與對照組相比，Nup62 OE果蠅幼蟲或成年大腦中斑點Tbph***增加(圖4B）。與對照組相比，Nup62 OE vnc的核Tbph強度***降低(圖4C)。此外，核細胞質(N/C)分割進一步證實，與對照組相比，Nup62 OE動物的Tbph N/C比值***降低(圖4D和E)，表明Nup62的上調改變了Tbph在體內的亞細胞定位。Nup62表達引起的Tbph的錯位和聚集也讓我們檢測了Nup62表達是否影響Tbph的溶解度。 生物相關科研推薦咨詢增加乳酸桿菌水平導致尿酸水平下降。
circMAPK14在CRC細胞和組織中的特征
作者首先從circRNADb數據庫中篩選到了4個來源于MAPK14分子的circRNAs，結果發現只有(hsa_circ_24603在72對CRC組織中***上調，將其命名為circMAPK14，其低表達與CRC**不良預后相關，且在多個CRC細胞系中***下調表達。研究顯示circMAPK14來源與MAPK14的外顯子4至10的片段背向剪切而成，全長536nt，并主要定位在細胞質中。
circMAPK14抑制CRC的增殖和遷移
接下來作者研究了circMAPK14的生物學功能，結果顯示過表達circMAPK14會***抑制CRC細胞系的增殖，集落形成，遷移和侵襲，同時促進*細胞凋亡。
m6A生物學功能
越來越多的證據表明m6A修飾在哺乳動物中發揮重要的生物功能。例如，在轉錄后水平上調控RNA的穩定性[11]、定位[12]、運輸、剪切[13]和翻譯[14]。Claudio R. 等發現依賴METTL3的pri-miRNA甲基化，會促進DGCR8識別和加工，從而促進microRNA的成熟[15]。此外，m6A識別蛋白 HNRNPA2B1促進 pri-miRNA 加工成 pre-miRNA[16]。另外，環狀RNA上m6A的修飾能促進環狀RNA的翻譯[17]。m6A修飾在基因表達調控中起著重要的作用，其調控機制的異常可能與人類疾病或**相關。目前發現m6A可能會影響精子發育（ALKBH5，METTL3，Ythdc2）、發育（METTL3、FTO、ALKBH5）、免疫（METTL3）、UV誘導的DNA損傷反應（METTL3，FTO）、**生成（YTHDF2）或轉移（METTL14）、干細胞更新（METTL14）、脂肪分化（FTO）、生物節律、細胞發育分化、細胞分裂及其它的一些生命過程。例如，ALKBH5敲除的雄性小鼠增加了mRNA中的m(6)A修飾，其特點是凋亡影響減數分裂中期的精子細胞，引起生育能力受損[7]。 文章使用FMT(糞微生態移植)來確定大黃酸改變的腸道菌群是否對結腸炎有療效。
另外，之前報道過hnRNPA1將miR-196a和miR-320加載到EVs中，本研究ELNAT1表現出的EVs-細胞比率與miR-196a和miR-320相當（Figure6F）。hnRNPA1沉默***抑制了ELNAT1在BCa細胞分泌的EVs中的富集（Figure6G）。此外，缺失的ELNAT1（包含hnRNPA1結合位點的610-680nt）主要保留在BCa細胞中（Figure6H），證實了ELNAT1通過與hnRNPA1的相互作用被加載到EVs中。
驗證SUMOylation是否有助于hnRNPA1介導的EVs包裹ELNAT1。在BCa細胞中，hnRNPA1中K113位點突變使BCa細胞分泌的EVs中ELNAT1表達降低，沉默UBC9降低了BCa細胞分泌的EVs中ELNAT1的富集（Figure6I,J）。與hnRNPA1WT沉默相比，hnRNPA1沉默后，轉染hnRNPA1K113R并不能恢復EVs介導的ELNAT1下調（Figure6K）。共聚焦顯微鏡顯示，在UBC9沉默或hnRNPA1K113R突變后，ELNAT1在CD36標志的多囊泡（MVBs）中的積累明顯下降（Figure6L），表明ELNAT1進入EVs受hnRNPA1的SUMO化調控。 m6A表達水平較高的**患者淋巴轉移***增加。泌尿科研免費設計
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LC3陽性囊泡在質膜損傷后在修復部位積聚用激光照射*細胞MCF7，致使細胞膜上形成小孔。使用膜不可滲透的FM1-43染料測量膜完整性，發現在Ca2+存在下，細胞能夠在20到30s內修復它們的質膜(Fig.1,AandB,left)；在缺乏Ca2+的培養基中受損的細胞無法修復并繼續吸收細胞不可滲透的染料(Fig.1B,right)。使用穩定表達融合蛋白增強型綠色熒光蛋白(eGFP)-LC3的MCF7細胞研究激光照射后自噬是否參與該過程，結果顯示，LC3陽性點在損傷后大約8-10min開始在修復部位形成（Fig.1C）；在未損傷區域中LC3陽性點未增加（Fig.1D）；LC3依賴于ATG7（Fig.1E-H）。天津科研贈送提供技術路線
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7.實時定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗證實驗(靶基因驗證，過表達，干擾),基因突變及SNP檢測，FISH，RNA-PULLdown，rip，chip實驗以及細胞增殖，凋亡，流式等細胞功能學實驗