ROS及其細(xì)胞副產(chǎn)物是酪氨酸磷酸酶的有效抑制劑，、用抗霉素A培養(yǎng)T細(xì)胞可導(dǎo)致酪氨酸磷酸化的持續(xù)和升高(圖6a)，這被魚藤酮或NAC阻斷(圖6a,b)。免疫印跡分析顯示，在aa誘導(dǎo)的ROS下，酪氨酸磷酸化的***數(shù)量增加，但幾種不同的蛋白在NAC處理下有差異的磷酸化(圖6b)。TCR-reporter Nur77-GFP小鼠研究表明在TCR信號(hào)缺失的情況下，抗霉素A誘導(dǎo)GFP表達(dá);在低于連續(xù)刺激條件下誘導(dǎo)的信號(hào)時(shí)，抗霉素A處理產(chǎn)生的GFP與酪氨酸磷酸酶抑制劑orthovandate (50 μm)培養(yǎng)的T細(xì)胞表型相匹配(圖6c)。磷酸酪氨酸級(jí)聯(lián)促進(jìn)NFAT1的核積累，單獨(dú)的ROS誘導(dǎo)(通過抗霉素A)以魚藤酮抑制的方式促進(jìn)NFAT1核的增加(圖d).我們使用抗體陣列評(píng)估了表達(dá)PTEN- wt或PTEN- 398a的MCF10A細(xì)胞裂解液的應(yīng)激反應(yīng)和凋亡通路的活性。浙江課題動(dòng)物模型構(gòu)建
結(jié)果1）LINC00926被篩選為PGK1負(fù)調(diào)控的lncRNA，與乳腺*臨床結(jié)果相關(guān)
為了探索負(fù)調(diào)控PGK1的lncRNAs，我們根據(jù)圖1A所示的篩選策略對乳腺*的三個(gè)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行了分析。我們鑒定了3個(gè)lncRNA，LINC00926，LINC01089和LINC00324與PGK1呈負(fù)相關(guān)，且表現(xiàn)出良好的臨床結(jié)果(圖1B-1D)。為了研究鑒定出的lncRNAs是否下調(diào)了PGK1的表達(dá)，我們分別用這三個(gè)lncRNAs分別轉(zhuǎn)染了乳腺*細(xì)胞。我們的結(jié)果表明，在mRNA水平不變的情況下，只有LINC00926導(dǎo)致MCF-7和MDA-MB-231細(xì)胞中PGK1蛋白水平***下降(圖1E)，表明LINC00926下調(diào)了乳腺*細(xì)胞中PGK1的表達(dá)。此外，與非**組相比，13/14(92.9%)例乳腺*患者的LINC00926表達(dá)降低，12/14(85.7%)例乳腺*患者的PGK1表達(dá)上調(diào)。在乳腺*樣本中，LINC00926的表達(dá)與PGK1的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(圖1F)。 湖北課題中標(biāo)率高soRNA測序的 整套服務(wù)。
靶向**相關(guān)巨噬細(xì)胞(TAMs)是一種很有前途的策略，可以改變免疫抑制**微環(huán)境，改善**免疫***。單胺氧化酶A (MAO-A)是一種因其在大腦中的功能而***的酶，小分子MAO抑制劑(MAOIs)用于臨床***神經(jīng)系統(tǒng)疾病。這里作者發(fā)現(xiàn)MAO-A誘導(dǎo)人和小鼠的TAMs進(jìn)而可用于**的免疫***。該文2021年6月發(fā)表于《nature communications》IF：14.919期刊上。
1、MAO-A缺陷小鼠顯示與TAM極化改變相關(guān)的**生長減少
將同基因B16-OVA黑色素瘤接種給C57BL/6J小鼠，分離出TAM并評(píng)估TAM基因表達(dá)譜。除了參與調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞免疫應(yīng)答的經(jīng)典基因的變化，還觀察到一個(gè)Maoa基因在TAMs中的上調(diào)表達(dá)（圖1a），這表明MAO-A可能參與了TAM活性的調(diào)節(jié)。首先構(gòu)建MAO-A缺陷的小鼠，然后接種B16-OVA黑色素瘤細(xì)胞，結(jié)果顯示，與野生型相比，MAO-A缺陷小鼠的**生長被***抑制（圖1b-d）。
然而，在單細(xì)胞方法中，尚未出現(xiàn)一種適用于所有三種模式的統(tǒng)一方法，這種方法可以應(yīng)用于高度特定的功能免疫細(xì)胞類型。我們系統(tǒng)地測試了PBMCs的全細(xì)胞和核純化和制備方法，以克服以往的分析只限于測量細(xì)胞表面的核成分(ATAC和核rna)或蛋白質(zhì)的局限性。我們發(fā)現(xiàn)完整的透性細(xì)胞的scATAC-seq表現(xiàn)非常好，在某些測量中超過了傳統(tǒng)的細(xì)胞核scATAC-seq(圖1b)。這一發(fā)現(xiàn)使得一種類似于轉(zhuǎn)錄組和表位的細(xì)胞索引(CITE-seq)的新方案能夠測量表面蛋白豐度和染色質(zhì)可及性:染色質(zhì)景觀和表位的整合細(xì)胞索引(ICICLE-seq，圖1a和3)。***，我們證明了我們優(yōu)化的可滲透細(xì)胞方法可以與基于液滴的多組學(xué)平臺(tái)相結(jié)合，從而能夠同時(shí)測量細(xì)胞的三個(gè)不同的分子隔間:mRNA(通過scRNA-seq)，蛋白質(zhì)(使用寡聚標(biāo)記抗體)和DNA(通過scATAC-seq)，我們根據(jù)轉(zhuǎn)錄、表位和可及性將其稱為TEA-seq(圖4)。總之，對單細(xì)胞水平上基因調(diào)控和表達(dá)的分子基礎(chǔ)有了新的、更統(tǒng)一的看法。英拜提供生物醫(yī)學(xué)課題外包服務(wù)。
一、LC3陽性囊泡在質(zhì)膜損傷后在修復(fù)部位積聚
用激光照射*細(xì)胞MCF7，致使細(xì)胞膜上形成小孔。使用膜不可滲透的FM1-43染料測量膜完整性，發(fā)現(xiàn)在Ca2+存在下，細(xì)胞能夠在20到30s內(nèi)修復(fù)它們的質(zhì)膜(Fig.1,AandB,left)；在缺乏Ca2+的培養(yǎng)基中受損的細(xì)胞無法修復(fù)并繼續(xù)吸收細(xì)胞不可滲透的染料(Fig.1B,right)。使用穩(wěn)定表達(dá)融合蛋白增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(eGFP)-LC3的MCF7細(xì)胞研究激光照射后自噬是否參與該過程，結(jié)果顯示，LC3陽性點(diǎn)在損傷后大約8-10min開始在修復(fù)部位形成（Fig.1C）；在未損傷區(qū)域中LC3陽性點(diǎn)未增加（Fig.1D）；LC3依賴于ATG7（Fig.1E-H）。 ATM對PTEN的磷酸化驅(qū)動(dòng)細(xì)胞周期進(jìn)程。湖北課題中標(biāo)率高
公共比較毒理基因組學(xué)數(shù)據(jù)庫。浙江課題動(dòng)物模型構(gòu)建
7、CFL1/PLD1軸介導(dǎo)低氧誘導(dǎo)的HCC細(xì)胞中AKT途徑的***之前的一項(xiàng)研究表明，PLD1***AKT及其下游mTOR通路促進(jìn)HCC細(xì)胞增殖、侵襲。與此一致，作者觀察到CFL1敲除降低了p-AKT水平，在HCCLM3細(xì)胞中通過PLD1恢復(fù)增強(qiáng)了p-AKT水平（圖7A，C）。此外，PLD1沉默逆轉(zhuǎn)了CFL1誘導(dǎo)的Hep3B細(xì)胞中AKT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的活化（圖7B，D）。值得注意的是，CFL1或PLD1敲除抑制了肝*細(xì)胞中缺氧誘導(dǎo)的AKT通路***和EMT過程（圖7E，F(xiàn)）。之后，進(jìn)行拯救實(shí)驗(yàn)探討HIF-1α-CFL1-PLD1軸中PLD1的功能。在HCCLM3細(xì)胞中過表達(dá)的PLD1可以逆轉(zhuǎn)低氧條件下CFL1-shRNA引起的對AKT磷酸化或EMT過程的抑制（圖7G，H）。總的來說，證實(shí)CFL1/PLD1軸在缺氧誘導(dǎo)的HCC進(jìn)展中起重要作用。
總之，該研究表明HCC中過表達(dá)CFL1與較差的臨床病理學(xué)參數(shù)呈正相關(guān)。體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)CFL1是HCC**生長和轉(zhuǎn)移的驅(qū)動(dòng)因素。PDL1/AKT通路介導(dǎo)CFL1的致*功能。此外，CFL1是一個(gè)缺氧反應(yīng)基因，通過***PLD1/AKT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)參與缺氧誘導(dǎo)的HCC進(jìn)展（圖8）。綜上所述，該研究表明CFL1是低氧微環(huán)境與HCC進(jìn)展之間的一種新的連接體。 浙江課題動(dòng)物模型構(gòu)建
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