肝細(xì)胞*(HCC)是全球第四大致命惡性**類型。然而，參與HCC進(jìn)展的確切分子機(jī)制尚不清楚。本研究發(fā)現(xiàn)缺氧誘導(dǎo)的CFL1通過(guò)***PLD1/AKT通路增加HCC的增殖、遷移、侵襲和EMT。本文于2021年3月發(fā)表在《Clinical and Translational Medicine》IF：7.919期刊上。
1、CFL1在HCC中高表達(dá)門(mén)靜脈瘤血栓(PVTT)是HCC預(yù)后不良的重要危險(xiǎn)因素。取3對(duì)HCC和配對(duì)的PVTT組織進(jìn)行iRTAQ檢測(cè)，挖掘到946個(gè)差異表達(dá)蛋白。圖1A列舉了*****上調(diào)的10個(gè)蛋白，其中CFL1在HCC中***高表達(dá)。WB和免疫組化表明CFL1在*旁組織，HCC和PVTT組織中表達(dá)逐漸上調(diào)（圖1B-C）。隨后在100對(duì)HCC和**組織，以及6株細(xì)胞系中檢測(cè)了CFL1的表達(dá)，證實(shí)CFL1在HCC中高表達(dá)。 高表達(dá)的外泌體CD44v6和C1QBP是預(yù)測(cè)PDAC患者預(yù)后和肝轉(zhuǎn)移的很有前途的生物標(biāo)志物。項(xiàng)目課題
4）DRD2重編程的Mφ誘導(dǎo)**細(xì)胞的焦亡
如HE所示，來(lái)自小鼠模型的**承載DRD2顯示**細(xì)胞死亡增加(圖4A)。在免疫組化染色中，表達(dá)DRD2的4T1**樣本中pMLKL表達(dá)較高(圖4A)。根據(jù)TUNEL實(shí)驗(yàn)，DRD2也促進(jìn)了體內(nèi)細(xì)胞凋亡(圖4B)。DRD2上調(diào)GSDME而不是GSDMD(圖4C)。在crosstalk過(guò)程中，Mφ進(jìn)一步促進(jìn)了DRD2轉(zhuǎn)染的BrCa細(xì)胞中GSDME的表達(dá)(圖4C)。在表達(dá)DRD2的BrCa細(xì)胞中，Mφ也能上調(diào)IL-1β(圖4C)。WB結(jié)果表明，DRD2誘導(dǎo)了MLKL的磷酸化，而在共培養(yǎng)過(guò)程中，MLKL被Mφ抑制(圖4D)。此外，DRD2表達(dá)***了caspase-8，而***被Mφ抑制(圖4D)。假設(shè)，DRD2可能在與Mφcrosstalk時(shí)誘發(fā)焦亡。BrCa細(xì)胞中與Mφ共培養(yǎng)時(shí)，NLRP3在表達(dá)DRD2的BrCa細(xì)胞中被觸發(fā)。***的caspase-1蛋白水解也能誘導(dǎo)IL-1β和IL-18的成熟(圖4D)。在共培養(yǎng)過(guò)程中，Cleavedcaspase-3表達(dá)上調(diào)(圖4D)。此外，在共培養(yǎng)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)表達(dá)DRD2的BrCa細(xì)胞中，GSDME的N端發(fā)生了剪切(圖4D)。為了確定是否由M1Mφ引起焦亡，我們使用了LPS誘導(dǎo)的M1Mφ培養(yǎng)基，結(jié)果表明，在表達(dá)DRD2的BrCa細(xì)胞中，M1Mφ*觸發(fā)NLRP3組裝并剪切GSDME(圖4E)。以上結(jié)果提示，M1Mφ以DRD2依賴的方式觸發(fā)BrCa細(xì)胞的焦亡。 課題贈(zèng)送提供技術(shù)路線深耕科研行業(yè)提高科研的高效。
5）MAPK1-109aa對(duì)胃*有抑制作用
為了進(jìn)一步研究MAPK1-109aa的生物學(xué)功能，我們將circMAPK1ATG突變質(zhì)粒、circMAPK1IRES突變質(zhì)粒和circMAPK1過(guò)表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到MKN45和BGC823細(xì)胞中。如預(yù)期的那樣，當(dāng)轉(zhuǎn)染ATG突變質(zhì)粒和IRES突變質(zhì)粒時(shí)，沒(méi)有出現(xiàn)circMAPK1編碼的MAPK1-109aa13-kDa帶(圖5a)。CCK8實(shí)驗(yàn)(圖5b)、集落形成實(shí)驗(yàn)(圖5c，d)和EdU實(shí)驗(yàn)(圖5e，f)顯示過(guò)表達(dá)circMAPK1明顯抑制了細(xì)胞的增殖能力。流式細(xì)胞術(shù)顯示，處于S期的GC細(xì)胞數(shù)量也明顯減少(圖5g)。然而，當(dāng)circMAPK1的ATG或IRES序列發(fā)生突變時(shí)，MKN45和BGC823細(xì)胞的增殖能力沒(méi)有明顯變化。
6、白樺素降低***的發(fā)展
用LDLR敲除小鼠探索了白樺素對(duì)***病變形成的作用。LDLR缺陷小鼠用WD飲食并分別添加了成分，對(duì)照（鹽），洛伐他汀（30mg/kg/day）或白樺素（30mg/kg/day）處理14周。不同組的小鼠顯示出相似的食物攝入量和體重（圖7A-7B）。在經(jīng)白樺素處理的小鼠肝臟中，SREBP-1c和SREBP-2降低，脂質(zhì)合成基因（包括HMGCS，HMGCR和FAS）下調(diào)（圖7C）。但是，洛伐他汀可上調(diào)HMGCR和FAS基因的表達(dá)（圖7C）。白樺素極顯著降低了血液中的TC，TG和LDL-c的含量，并增加了HDL-c。洛伐他汀具有類似的作用，只是它不降低TG（圖7D–7G）。與對(duì)照處理的小鼠相比，洛伐他汀或白樺素處理的小鼠的主動(dòng)脈斑塊的數(shù)量和大小顯著降低（圖7H和7I）。特別是，主動(dòng)脈弓（圖7J）和胸主動(dòng)脈（圖7K）的病變區(qū)域明顯較小。以上數(shù)據(jù)表明，白樺素降低了WD喂養(yǎng)的LDLR敲除小鼠***病變的形成，并穩(wěn)定了主動(dòng)脈根部粥樣硬化斑塊。
總之，本文確定了SREBP的一種特定的小分子抑制劑，即betulin白樺素，可以降低脂質(zhì)水平，增強(qiáng)胰島素敏感性并減少***斑塊的形成。 這些數(shù)據(jù)支持以下觀點(diǎn)：抑制SREBP途徑可能是***II型糖尿病和***的有用策略。 Betulin可以作為藥物控制代謝性疾病的主要化合物。 小鼠正常胰腺(Npex)和小鼠PDAC細(xì)胞分離的外泌體呈現(xiàn)典型的外泌體結(jié)構(gòu)。
4）APP/PS1小鼠大腦皮質(zhì)區(qū)受損星形膠質(zhì)細(xì)胞中氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的脂質(zhì)過(guò)氧化水平升高
我們研究了NOX4來(lái)源的氧化應(yīng)激在APP/PS1小鼠受損星形膠質(zhì)細(xì)胞中的作用。我們用免疫熒光染色法測(cè)定了APP/PS1小鼠和野生型(WT)小鼠大腦皮層GFAP陽(yáng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞中4-HNE的蛋白水平(圖4A)。免疫熒光染色顯示，與WT小鼠相比，APP/PS1小鼠皮質(zhì)區(qū)GFAP陽(yáng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞中4-HNE陽(yáng)性染色強(qiáng)度增加(圖4A、C)。APP/PS1小鼠皮質(zhì)區(qū)受損的GFAP陽(yáng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞中4-HNE陽(yáng)性染色強(qiáng)度升高。此外，與WT小鼠相比，APP/PS1小鼠中4-HNE和GFAP亞細(xì)胞共定位呈陽(yáng)性的受損星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量***增加(圖4D)。與WT小鼠相比，APP/PS1小鼠皮質(zhì)區(qū)GFAP陽(yáng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞(圖4B和E)和MDA與GFAP亞細(xì)胞共定位陽(yáng)性的受損星形膠質(zhì)細(xì)胞(圖4F)數(shù)量增加。4-HNE在APP/PS1小鼠NOX4陽(yáng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞***定位(圖4G)。此外，APP/PS1小鼠NOX4和4-HNE陽(yáng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量***增加(圖4H)。這些結(jié)果提示APP/PS1受損小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞中氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的脂質(zhì)過(guò)氧化水平升高。 提供生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域內(nèi)的課題思路設(shè)計(jì)。常規(guī)課題國(guó)家自然科學(xué)基金
高通量測(cè)序的后續(xù)成文服務(wù)。項(xiàng)目課題
七、急性腎損傷和慢性腎臟疾病患者PT_VCAM1的比例升高
對(duì)小鼠缺血再灌注損傷(IRI)實(shí)驗(yàn)中獲得的大量RNA-seq進(jìn)行反卷積，以確定PT_VCAM1的比例是否與急性腎損傷有關(guān)。BisqueRNA使用基于scRNA-seq參考的反褶積方法從整體RNA-seq中估算細(xì)胞類型的豐度。PT_VCAM1估計(jì)比例在iri后24h***增加，并持續(xù)至少7天;與正常近端小管細(xì)胞比例下降相對(duì)應(yīng)(圖7a)。有趣的是，未手術(shù)控制小鼠腎臟中PT_VCAM1的估計(jì)比例在老齡小鼠中增加(圖7b)。用BisqueRNA對(duì)非**腎樣本進(jìn)行反卷積，估計(jì)PT_VCAM1細(xì)胞的比例為2.6%(圖7d)，這與我們的snRNA-seq和snatc-seq估計(jì)一致。接下來(lái)，我們分析了來(lái)自2型糖尿病患者腎臟活檢的大量RNA-seq。與對(duì)照組和早期糖尿病腎病患者相比，晚期糖尿病腎病患者PT_VCAM1的比例明顯更高(圖7e)，提示PT_VCAM1和小管損傷可能與糖尿病腎病的疾病進(jìn)展有關(guān)。從小鼠IRI到人類的細(xì)胞類型標(biāo)記轉(zhuǎn)移表明，大部分PT_VCAM1與我們**近在小鼠中發(fā)現(xiàn)的修復(fù)失敗的近端小管細(xì)胞(FR-PTC)群體有關(guān)(圖7c)。 項(xiàng)目課題
公司特色是以各式高通量二代測(cè)序?yàn)榛A(chǔ)，利用生物數(shù)據(jù)信息分析手段，通過(guò)英拜生物自有的分子、病理以及細(xì)胞實(shí)驗(yàn)平臺(tái)，提供課題整體設(shè)計(jì)外包、撰寫(xiě)SCI論文一站式服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)平臺(tái)落座在漕河涇開(kāi)發(fā)區(qū)浦江園區(qū)，實(shí)驗(yàn)平臺(tái)開(kāi)放參觀，客戶可隨時(shí)參觀實(shí)驗(yàn)并參與實(shí)驗(yàn)課題的進(jìn)度，保證您的實(shí)驗(yàn)是在您的指導(dǎo)下完成。
1.整體課題外包服務(wù)：RNA甲基化研究專題，外泌體研究專題，wnt/VEGF/toll等經(jīng)典通路研究，設(shè)計(jì)的課題均具有后續(xù)實(shí)驗(yàn)課題的延展性，為您的標(biāo)書(shū)奠定較好的基礎(chǔ)
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4.二代測(cè)序：轉(zhuǎn)錄組測(cè)序、smallRNA測(cè)序、snoRNA測(cè)序、TRF測(cè)序
5.芯片：信號(hào)通路pcr芯片蛋白芯片
6.表觀遺傳實(shí)驗(yàn)：DNA甲基化實(shí)驗(yàn)（BSP,MSP，焦磷酸測(cè)序），RNA甲基化實(shí)驗(yàn)
7.實(shí)時(shí)定量PCR（mRNA,LncRNA,microRNA,circRNA）,WB，RNA功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)(靶基因驗(yàn)證，過(guò)表達(dá)，干擾),基因突變及SNP檢測(cè)，F(xiàn)ISH，RNA-PULLdown，rip，chip實(shí)驗(yàn)以及細(xì)胞增殖，凋亡，流式等細(xì)胞功能學(xué)實(shí)驗(yàn)