為了進一步確定過表達的Caspase-11是否足以加重MCD誘導的NASH，我們給小鼠使用了Caspase-1抑制劑belnacasan。belnacasan******降低MCD***對照組小鼠的脂肪變性評分(圖8H)。相比之下，belnacasan***不影響MCD處理的Caspase-11過表達小鼠的脂肪變性評分。同樣，belnacasan處理***降低了MCD處理對照組小鼠的腫脹評分(圖8I)、血清ALT(圖8J)、AST(圖8K)和肝臟甘油三酯(圖8L)，而MCD處理過表達Caspase-11小鼠的這些指標沒有明顯影響。綜上所述，過表達Caspase-11足以促進MCD誘導的小鼠脂肪性肝炎的嚴重程度。
結論MCD處理后Caspase-11缺陷小鼠的肝損傷、纖維化和炎癥明顯減輕。Caspase-11缺失可改善NASH患者的肝細胞焦亡。 深耕科研行業提高科研的高效。wb課題基礎實驗外包
6）MAPK1-109aa通過競爭性結合MEK1來抑制MAPK1的磷酸化
為了研究MAPK1-109aa抑制GC的分子機制，我們將標記的MAPK1-109aa質粒轉染HEK293T細胞。在flag標記的MAPK1-109aa免疫沉淀復合物中，潛在的相互作用蛋白被拉下(圖7a)。采用蛋白MS分析對差異表達蛋白進行鑒定。在被識別的蛋白質列表中，豐度比較高的蛋白質是MEK1，表明MEK1是MAPK1-109aa潛在的相互作用蛋白(圖7b，c)。此外，flag標記的MAPK1-109aa可以與MEK1相互作用，證實了MAPK1-109aa與MEK1之間的直接相互作用(圖7d)。免疫熒光染色顯示MAPK1-109aa與MEK1共定位(圖7e)。此外，我們采用MEK1抗體免疫共沉淀，探討MAPK1-109aa對MAPK1通路的潛在調控作用。 肝損傷課題分子生物學英拜生物對實驗可行性分析。
對HoxBlincTg (Line #1)小鼠隊列的監測顯示，1歲以內，67%的HoxBlincTg小鼠(15只中有10只)因病死或被殺，而WT小鼠(n = 12只)沒有死亡（圖2e）。與野生型相比，垂死的HoxBlincTg小鼠表現出體重減輕、肝脾腫大、淋巴結腫大以及腳墊和股骨蒼白（圖2f）。形態學上，May-Grünwald-Giemsa染色顯示母細胞明顯增加(圖2g，左)。BM細胞自旋制備也顯示髓系細胞占優勢，未成熟髓系前體增多(圖2g，右側)。骨髓組織切片的形態學評估顯示髓樣增生伴未成熟髓樣前體增多，以髓過氧化物酶(MPO)陽性表明髓樣來源（圖2h）。此外，HoxBlincTg的組織學評估顯示脾臟、肝臟和淋巴結切片正常***結構扭曲，并有MPO陽性骨髓細胞浸潤（圖2h-i）。這些數據表明，與NPM1c/+小鼠相似，HoxBlinc過表達小鼠足以引起類似AML的異常血液學特征。
巨噬細胞在AP恢復不同階段的不同作用
鑒于AP恢復過程中巨噬細胞的表型變化，接下來試圖通過用脂質體***巨噬細胞來檢查巨噬細胞在不同修復/再生階段的作用。首先，我們在急性炎癥反應后（從第1天到第2天）立即消耗了胰腺巨噬細胞，并在第3天檢查了胰腺。如圖所示，第3天之前巨噬細胞的消耗可以在很大程度上減少導管樣結構，這表明巨噬細胞在ADM的形成。AP損傷后第3天巨噬細胞的消耗顯著延遲了胰腺修復。Ki67+細胞在第3天達到峰值，并隨著胰腺恢復逐漸下降。與組織學結果一致，發現CN處理組的Ki67+細胞從第5天到第7天大幅下降，但在CL處理組中沒有，表明CL處理小鼠的修復過程受損。 IGF-1信號在Pex誘導的肝纖維化中起重要作用。
5）缺氧主要通過FOXO3A轉錄抑制LINC00926的表達，***PGK1的表達
由于缺氧是**的一個關鍵現象，我們確定了LINC00926/PGK1軸是否在缺氧下糖酵解的調節中發揮作用。缺氧刺激了PGK1在mRNA和蛋白水平上的表達，并降低了LINC00926的表達(圖5A)。為了確定缺氧如何抑制乳腺*細胞中LINC00926的表達，我們研究了缺氧后對LINC00926啟動子的抑制。對不同的LINC00926啟動子缺失報告基因的分析顯示，啟動子區域在300-200bp之間包含一個缺氧抑制元件(圖5B)。該區域假定的FOXO3A結合位點的突變會導致抑制的喪失。在常氧或缺氧條件下，FOXO3A影響LINC00926和PGK1的表達，說明FOXO3A是LINC00926調控的特異性轉錄因子(圖5C和5D)。ChIP分析表明，在常氧條件下，FOXO3A被募集到LINC00926啟動子內包含FOXO3A結合位點的區域，但沒有被募集到LINC00926啟動子上游的區域，在缺氧條件下募集減少(圖5E)。FOXO3A提高了LINC00926水平，降低了PGK1水平，而且重要的是，在正常或缺氧條件下，下調LINC00926均嚴重損害了FOXO3A調節LINC00926和PGK1表達的能力(圖5F)。此外，敲除LINC00926還**削弱了缺氧對PGK1上調的影響。這些數據表明，缺氧主要通過FOXO3A轉錄抑制LINC00926的表達，***PGK1的表達。 外泌體CD44v6和C1QBP可能是預測PDAC患者預后的有前途的生物標志物。江蘇課題CRO
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10）M1-Exos在bEnd.3細胞中通過miR-155/SOCS6/p65軸上調ROS水平，損害線粒體功能
我們進行了一系列功能喪失和功能獲得實驗來研究miR-155/SOCS6/p65軸在調節線粒體功能中的作用。如圖10A-E所示，SOCS6過表達消除了miR-NCOE-Exos或miR-155OE-Exos誘導的ROS水平(圖10A和B)、線粒體超氧化物含量(圖10C和D)和線粒體電位(圖10E)的升高。此外，SOCS6過表達***緩解了miR-NCOE-Exos或miR-155OE-Exos處理后的線粒體腫脹，并降低了線粒體碎片細胞的比例(圖10F和G)。進一步的結果表明，SOCS6過表達可挽救miR-NCOE-Exos或miR-155OE-Exos處理導致的OCR、基礎呼吸、ATP產生、呼吸能力和呼吸逆轉的下降(圖10H和I)。miR-NCKD-Exos或miR-155KD-Exos處理后沉默SOCS6則出現相反的結果(圖10J-R)。
結論：在本研究中，我們發現SCI后浸潤的巨噬細胞可通過傳遞外泌體miR-155促進EndoMT，損害線粒體功能，從而加重BSCB完整性，隨后通過抑制SOCS6誘導的p65降解，***NF-κB通路。我們的工作可能會加強對巨噬細胞和血管內皮細胞之間相互干擾的理解，并揭示脊髓損傷后BSCB完整性的潛在調節機制。 wb課題基礎實驗外包
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